马晓玲
- 作品数：15 被引量：34H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 山羊胚胎干细胞的分离与培养
- 2008年
- 对关中奶山羊配种后6～7天的桑椹胚和囊胚，分别采用全胚培养法、酶消化法和免疫外科法进行处理。将处理后的胚胎培养于小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）饲养层上，分离培养山羊胚胎干细胞（Embryonic stem cell，ESC）。对分离传代的山羊ESCs分别进行免疫组化染色，RT-PCR检测和体外诱导分化试验。结果表明，全胚培养法易于胚胎贴壁形成原代集落，采用全胚培养法获得的ESCs有一株目前已传至18代。山羊ESCs Nanong、Oct4、SSEA-3免疫组化染色呈阳性，SSEA-1免疫组化染色呈弱阳性，SSEA-4免疫组化染色呈阴性，RT-PCR检测显示其表达Nanog、Oct4、端粒酶、CD117。山羊ESCs经DMSO体外诱导可以向心肌细胞分化，这些试验均表明该细胞具有ESCs的生物学特性。
- 闫龙雷蕾杨春荣高志敏雷安民马晓玲窦忠英
- 关键词：山羊胚胎干细胞内细胞团
- 无血清培养山羊内细胞团的研究被引量：1
- 2007年
- 对32只关中奶山羊进行超排处理,获得胚胎263枚,其中囊胚122枚。采用机械法、酶消化法和免疫外科法分离囊胚83枚,得到内细胞团(ICM)65个。将ICM培养于小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,研究含血清和无血清条件下ICM的增殖规律,并比较添加不同生长因子对ICM增殖的影响。结果表明,无血清培养时,ICM细胞增殖相对较慢,分化减少;添加LIF、bFGF、两种同时添加或均不添加对原代ESC样集落形成率的影响不显著(P>0.05),但添加10 ng/mL bFGF稍微有助于ICM增殖。山羊ICM适宜于无血清培养。
- 杨炜峰葛秀国杨春荣马晓玲华进联窦忠英
- 关键词：山羊内细胞团胚胎干细胞
- 牛体细胞核移植显微操作环节的优化被引量：7
- 2009年
- 本研究从牛卵母细胞去核方法(纺锤体观测仪法&Hoechst33342染色法)、供体细胞核引入去核卵细胞质的方法(卵细胞质注射法和电融合法)和重构胚胎电融合(3组参数)等3个环节对牛体细胞核移植的显微操作过程及相关参数进行了筛选优化。以核移植胚胎的卵裂率、囊胚发育率作为检测指标,对不同的方法所获得的克隆胚胎的卵分裂率与囊胚发育率进行比较,最后筛选获得1个优化的牛体细胞核移植操作程序,即采用Spindle view系统对牛卵母细胞进行去核操作,将供核体细胞注射到卵周隙,然后通过电融合法将供体核引入去核卵细胞质(电融合参数为1.9kV/cm,脉冲时程10μs,方波2次间隔2s)。以此核移植程序进行牛体细胞核移植实验,自获得克隆胚胎中筛选80枚优质囊胚移植到33头受体牛子宫内,最后2头母牛产下2头克隆牛犊,结果表明利用该优化的显微操作环节进行牛体细胞核移植可以获得体细胞克隆牛犊。
- 雷安民马晓玲高志敏胡勇策隋进强黄伟伟昝林森窦忠英
- 关键词：去核方法电融合
- 一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法
- 一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法，构建了一种包含NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体pSP-NRAMP1-HA，以及一种基于该载体的包含NRAMP1基因的秦川牛成纤维细胞系，利用该细胞系作...
- 王华岩程祥邓捷马晓玲孟书燕来威锋
- 文献传递
- 陕北白绒山羊种公羊的体细胞克隆被引量：12
- 2012年
- 【目的】利用体细胞核移植技术克隆陕北白绒山羊优秀种公羊个体。【方法】以特别优秀成年陕北白绒山羊种公羊耳部皮肤成纤维细胞为供体细胞,体外培养成熟的陕北白绒山羊卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到其卵周隙内,经电融合将其导入去核卵母细胞内形成核移植重组胚。利用钙离子载体Ionomycine联合蛋白酶抑制剂6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)对核移植重组胚进行激活处理,挑选激活后完整的胚胎继续进行体外培养,然后在2～16细胞期时将克隆胚胎移植到相应的同期发情受体母羊体内,利用PCR-RFLP技术鉴定克隆羊。【结果】构建了体细胞核移植胚胎253枚,重组胚胎的融合率为71.54%(181/253),体外培养后的卵裂率为68.33%(123/180),囊胚发育率为25.20%(31/123);在此基础上,构建了537枚克隆胚,将其中卵裂的359枚分别移植到32只代孕母羊体内,移植60d后,有2只受体母羊确认妊娠,最终1只受体母羊妊娠第4月流产出2只死羔;另1只受体母羊维持到期并顺产体细胞克隆羊1只。经遗传学鉴定,2只流产羊羔与1只存活个体均为体细胞核移植后代。【结论】获得陕北白绒山羊克隆个体,建立了相对完善的陕北白绒山羊克隆技术体系。
- 屈雷雷安民闫海龙于鸿浩袁超王磊白丁平陈生会冯平马晓玲高晔陈玉林
- 关键词：体细胞克隆核移植陕北白绒山羊
- 尿嘧啶和ATP对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响被引量：4
- 2007年
- [目的]探究尿嘧啶(Uracil)和三磷酸腺苷二钠盐(ATP)对牛卵母细胞成熟及激活后孤雌胚胎发育的影响。[方法]在体外成熟培养液中添加不同浓度的尿嘧啶和ATP,研究其对牛卵母细胞体外成熟及激活后孤雌胚胎发育能力的影响。[结果]在成熟培养液中添加50μg/ml尿嘧啶能够显著提高卵母细胞的成熟率、分裂率及孤雌胚胎囊胚率;在成熟培养液中分别添加0、250、500、750μg/mlATP,对卵母细胞成熟率影响不大,但添加500μg/ml ATP能显著提高激活后孤雌胚胎囊胚率。[结论]该研究为牛卵母细胞IVM研究提供了参考资料。
- 黄伟伟马晓玲雷安民严兴荣贾文文谭晓颖窦忠英
- 关键词：牛卵母细胞体外成熟线粒体尿嘧啶ATP
- 父系遗传背景对小鼠体细胞核移植效率的影响被引量：1
- 2007年
- 为了评价父系遗传背景对小鼠体细胞核移植效率的影响,本试验用129/Sv小鼠、C3H小鼠和ICR的雄鼠分别与昆明雌鼠(KM)杂交的F1代为研究对象,以KM自交鼠F1代为对照,比较卵母细胞的可操作性以及重构胚的激活率、卵裂率和囊胚发育率。结果显示:129/Sv×KM、C3H×KM和KM×KM的去核效率显著高于ICR×KM(78.0%、82.9%、81.0%vs63.9%;P<0.05);129/Sv×KM的注核成功率显著高于C3H×KM、ICR×KM和KM×KM(83.0%vs59.6%、55.5%、71.4%;P<0.05);129/Sv×KM的重构胚激活率显著高于C3H×KM、ICR×KM和KM×KM(97.3%vs85.2%、81.7%、78.3%;P<0.05);C3H×KM的卵裂率和囊胚率显著高于ICR×KM和KM×KM(84.5%、28.2%vs63.2%、11.4%,64.5%、16.5%;P<0.05)。研究表明129/Sv、C3H和ICR3个品系父系遗传背景影响小鼠体细胞核移植效率,其中C3H父系遗传背景的卵母细胞可提高体细胞核移植效率。
- 严兴荣余树民雷安民杨学义沈文正刘淑娟马晓玲窦忠英
- 关键词：小鼠卵母细胞核移植
- 猪bmp15基因报告载体的构建及其特异性被引量：2
- 2014年
- 为了研究骨形态发生蛋白15(bmp15)基因的表达和调控特性,通过克隆猪bmp15基因2.2 kb启动子片段,构建pBMP15-EGFP报告载体,实现监测干细胞向类卵母细胞分化的过程。以猪卵巢组织和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、成肌细胞(C2C12)、猪羊水干细胞(pAFSC)为材料,通过RT-PCR、免疫荧光、细胞转染、显微注射检测bmp15组织特异性表达,并且通过单层细胞诱导检测该基因体外示踪类卵母细胞获得过程的能力。RT-PCR结果显示bmp15在猪的卵巢组织中特异表达,在CHO中表达,而在C2C12和pAFSC中不表达。卵巢组织切片免疫荧光检测结果显示bmp15表达于卵泡发育的各个阶段。瞬时转染不同细胞发现启动子只在CHO中有活性,而在C2C12和pAFSC中均无活性。显微注射重组质粒片段结果显示增强绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorecence Protein,EGFP)在卵母细胞体外成熟18 h启动表达,并能够持续至4-细胞期胚胎。单层细胞诱导结果显示诱导12 d的pAFSC出现携带EGFP的圆形细胞团。说明bmp15具有表达特异性和示踪干细胞诱导分化为类卵母细胞的潜能。
- 秦明鸣魏江华俞晓丽张景龙刘晓鹏马晓玲王华岩
- 关键词：BMP15启动子基因表达
- 一种自动变量灌溉系统
- 本发明公开一种自动变量灌溉系统，用来测量种植草莓土壤水分含量并实现自动变量灌溉，主要包括：FDS传感器模块1、单片机处理模块2、LCD19264液晶显示模块3、增量式pid控制算法模块4、继电器控制电磁阀和水泵模块5。其...
- 陈军张恒榜杨术明白璐马晓玲
- 文献传递
- 牛体细胞核移植技术体系优化的研究
- 本研究以牛卵母细胞为对象,对卵母细胞体外成熟培养体系和孤雌胚胎体外培养体系进行了优化研究。比较了mTCM-199成熟培养液、SOF成熟培养液以及商品化卵子成熟培养液1600对牛卵成熟效率的影响；对美国Vitrolife和...
- 马晓玲
- 关键词：体细胞核移植卵母细胞
- 文献传递
