高柳村
- 作品数：17 被引量：40H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金上海市科委科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教文化科学更多>>
- ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体
- :建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体. 方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗...
- 高柳村李黎王绪甲陈方董立厚欧伦宋海峰
- 关键词：B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体药物酶联免疫吸附分析
- Cetuximab抑制胃癌SGC7901/ADR细胞的增殖并增加其化疗敏感性被引量：6
- 2013年
- 目的:探讨EGFR在胃癌耐药细胞中的表达及作用。方法:采用Western blot和免疫组化检测EGFR蛋白在胃癌耐药细胞系及组织标本中的表达,WST-1检测EGFR特异性抗体Cetuximab对胃癌耐药细胞增殖及化疗敏感性的影响。结果:SGC7901/ADR胃癌耐药细胞系中EGFR的表达明显高于亲本细胞,多数化疗后进展的胃癌组织EGFR的表达高于化疗前组织,针对EGFR的单克隆抗体Cetuximab可抑制SGC7901/ADR细胞的增殖,并增加其对部分化疗药物的敏感性。结论:EGFR过表达是胃癌细胞化疗耐药的分子机制之一,Cetuximab可逆转EGFR高表达耐药细胞的耐药表型。
- 王思萌高柳村帖君卢瑗瑗潘妍雷少妮刘娜吴开春王新
- 关键词：西妥昔单抗胃癌化疗耐药
- 复方血竭对烫伤大鼠肠黏膜屏障的实验研究被引量：2
- 2010年
- [目的]探讨复方血竭对烫伤大鼠肠黏膜屏障的影响。[方法]雄性Wistar大鼠70只,随机分为无烫伤组10只,烫伤组及烫伤后使用复方血竭组(血竭组)各30只。用沸水制成大鼠背部35%Ⅱ度烫伤,血竭组于烫伤后立即、4 h、8 h用复方血竭20 ml/kg灌胃,烫伤组和无烫伤组口服等量0.85%氯化钠。烫伤组、血竭组分别于烫伤后8、12、24 h处死动物,无烫伤组8h全部处死。大鼠FITC-D灌胃测定肠黏膜通透性,穿刺腹主动脉测血浆白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、IL-10的水平。[结果]烫伤后大鼠门静脉FITC-D标记的葡聚糖及血浆IL-1β、IL-6与无烫伤组相比均显著升高(P<0.01)。使用复方血竭后,门静脉FITC-D标记的葡聚糖及血浆IL-1β、IL-6均明显下降,血竭组IL-1β、IL-6水平较烫伤组明显降低,IL-4、IL-10水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。[结论]烫伤可导致大鼠肠黏膜应激损伤,肠黏膜通透性增加,血浆IL-1β、IL-6升高;复方血竭可以保护应激状态下的肠黏膜屏障,抑制炎症因子IL-1β、IL-6的产生,上调IL-4和IL-10等抑炎性因子,纠正异常的免疫功能,降低免疫细胞对炎症的反应性,从而有利于炎症的消除及组织的修复,减轻全身炎症反应,保护脏器功能。
- 李楠王雪明高柳村王建华嵇扬朱建华石玉玲张林李树林翟俊山
- 关键词：复方血竭肠黏膜屏障烫伤
- 基于SPR系统的TMP-Fc免疫原性分析方法建立与应用被引量：1
- 2017年
- 目的:利用Biacore 3000 Gx P系统建立并验证基于表面等离子体共振(SPR)技术的免疫原性分析方法,对2种重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白(TMP-Fc)在食蟹猴体内的免疫原性(IM)进行比较研究。方法:采用食蟹猴连续皮下注射候选药LMF(L,100,300,1 000μg·kg^(-1))或参照药romiplostim(R,300μg·kg^(-1))后采集血清样品,用验证的IM分析方法检测样品中的抗药抗体(ADA)。筛选阈值(CP)采用信噪比(S/N)进行计算;确证阈值(SCP)经免疫抑制试验确定;其他验证指标包括灵敏度、分析范围与Hook效应、药物耐受性与精密度。结果:候选药与参照药筛选阈值分别为CPL1.54和CPR1.41。确证阈值分别为SCPL37.6%和SCPR40.9%;配制于混合食蟹猴血清(PCMS)中的阳性质控(PC)浓度为1~64μg·mL^(-1),参数模型拟合良好,未见Hook效应。二者方法灵敏度分别为556和463 ng·mL^(-1)。药物耐受性数据表明样品S/N值随药物浓度升高而降低,其信号抑制比率(inhibition)反之升高。所有阴性质控(NC)、低浓度LPC与抗体血清rs PC样品变异系数(CV)均不高于25%。样品分析结果表明各给药组均有个体检出ADA,相同剂量下L和R的ADA阳性率均为50%;2种方法(anti-L,anti-R)对R的样品检测阳性个体及其检测时间点高度吻合。结论:本研究建立并验证了基于SPR系统的IM分析方法。方法符合生物制品IM研究要求,并成功应用于2种TMP-Fc生物样品的ADA检测。
- 谢新遥徐静芝罗宇欧伦高柳村高晨燕王海学付洁董立厚宋海峰
- 关键词：免疫原性
- 束缚应激诱导大鼠肠黏膜屏障变化的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的建立冷-束缚应激(CRS)诱导肠黏膜屏障破坏大鼠模型,探讨肠黏膜屏障变化在应激发病机制中的作用。方法选取W istar大鼠40只,随机分成模型组和正常对照组。模型组采用寒冷加束缚为应激源实施干预,对照组不予任何干预。实验期间通过直结肠扩张(CRD)实验测定内脏敏感性,取大鼠远端结肠及回肠黏膜行病理组织学检查。采用气相色谱法(GC)测定两组大鼠5h尿液中乳果糖(L)与甘露醇(M)排泄率(L/M)比值,反映肠黏膜屏障的变化情况。8结果模型组初始感觉阈值、疼痛感觉阈值、最大耐受阈值分别较对照组显著降低(P<0.05);两组肠黏膜病理检查均未见明显异常;模型组大鼠5 h尿液中L/M比值较对照组显著增大(P<0.05)。结论应激损伤导致大鼠肠黏膜通透性增大,肠黏膜屏障受损可能与应激发病机制有关。
- 李楠王雪明高柳村王建华嵇扬翟俊山石玉玲李娜朱建华张林
- 关键词：束缚应激肠黏膜屏障感觉阈值肠黏膜通透性内脏敏感性远端结肠
- 军队医科院校学员军事医学课程设计评价分析被引量：1
- 2007年
- 目的:通过在校学员对所接受的军事医学课程合理性的评价与建议,从课程种类、课程顺序、课程内容与课程时间等方面找出课程安排中的优点及不足并提出改进建议。方法:为了保证返回率,我们利用上课时间,统一对我校188名入伍学员接受军事医学课程学习的情况进行问卷调查,结果进行统计学分析,之后找学员代表座谈以论证答案的可信度。结果:军医大学军事医学课程设计总体情况良好,能满足学员培养基本要求,但为了适应21世纪军事医学人才要求,个别方面有待改革。同时该研究结果为军医大学培养国防生的课程安排提供一定依据。
- 刘卫辉张献志高柳村
- 关键词：课程设计学员
- ELISA法测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体的抗药抗体被引量：5
- 2016年
- 目的:建立测定食蟹猴血清中抗BLyS抗体抗药抗体(ADA)的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法并进行验证,用于测定该药的抗药抗体。方法:在96孔板中包被治疗药物,以捕获食蟹猴血清中的抗药抗体,之后加入生物素标记的治疗药物与被捕获的抗药抗体结合,最后用链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联试剂作为检测试剂。以羊抗人的IgG作为对照品,对食蟹猴血清中的抗药抗体进行半定量。结果:筛选判断阈值信噪比(SNR)为1.158,批内批间精密度小于20%,样品复孔A值变异小于20%,确证判断阈值为38.4%游离药物抑制率。抗BLyS抗体连续给药13周食蟹猴体内产生抗药抗体。结论:成功建立、验证并应用该方法测定了抗BLy S抗体的抗药抗体,为该药申请临床实验报批提供数据支持。
- 高柳村李黎王绪甲陈方董立厚欧伦宋海峰
- 关键词：酶联免疫吸附分析
- pCP能够增强树突状细胞对乙肝表面抗原肽提成能力被引量：2
- 2011年
- 目的:研究对氯苯酚(pCP)对乙肝疫苗反应性差志愿者外周血分离、诱导的DC细胞对乙肝表面抗原肽(HB-sAg)的负载及抗原提呈能力的影响。方法:用梯密度离心法分别分离10例对乙肝疫苗反应性差志愿者外周血单核细胞,黏附的单核细胞培养液中加入HBsAg、rhGM-CSF、rhIL-4、pCP培养7d诱导成熟的DC细胞(实验组),培养体系中不加人pCP为阴性对照组,不加人pCP及HBsAg为空白对照组,ELISA实验检测各自上清其IL-12水平;培养7d后DC细胞与自身T淋巴细胞共培养3d后收集上清,ELISA实验检测其IFN-γ含量。结果:IL-12的水平在实验组(265.68±16.21)ng/L明显高于阴性对照组(168.76±10.01)ng/L(P<0.05)及空白对照组(87±5.79)ng/L(P<0.05);与自身T淋巴细胞共培养3d后,上清中IFN-γ水平在实验组(773.04±32.73)mg/L也明显高于阴性对照组(573.59±26.11)mg/L(P<0.05)及空白对照组(362.81±24.27)mg/L(P<0.05)。结论:pCP能够有效增强乙肝疫苗反应性差志愿者外周血分离、诱导的DC细胞对HBsAg的负载及抗原提成能力,这种效应也能明显增强成熟的CD细胞对自身T淋巴细胞的刺激力,有望成为乙肝疫苗佐剂提高其临床效率。
- 汤善宏高柳村张志勇李运明毕茜宋朝君杨桂涛
- 关键词：对氯苯酚树突状细胞酶联免疫吸附试验
- 筛选能够增强B细胞与乙肝表面抗原肽结合能力的小分子化合物被引量：1
- 2010年
- 目的:筛选能够有效增强Epstein-Barr病毒转化的B细胞与HBsAg相关抗原肽结合能力的小分子化合物MLE(MHC loading enhancer)。方法:EB病毒转化的B细胞系与HBsAg17-31及全长在加或不加小分子化合物的情况下共孵育4 h后,流式细胞术检测平均荧光强度(MFI)。结果:FITC标记的HBsAg17-31肽段在不加小分子化合物与B细胞共孵育4 h候后(阴性对照)的45±7.87(P=0.008),对氯苯酚(pCP)为60.33±14.34(P<0.01);HBsAg全长与B细MFI为19.97±4.95,加甲醇的MFI为24.67±4.24(P=0.506),加正丁醇的则为胞共孵育4 h后,其阴性对照MFI值为26.67±1.53,加入甲醇的MFL值为31.33±2.08(P=0.078),加入正丁醇的为51.67±3.61(P<0.01),而加入pCP的MFI值为71.67±3.51(P<0.01)。结论:这些小分子化合物能够有效增强Epstein-Barr病毒转化的B细胞与FITC标记的HBsAg17-31肽段及其全长的结合能力,甲醇的催化能力较弱,正丁醇的催化能力明显强于甲醇,对氯苯酚的催化能力最强;为进一步将MLE应用于HBV免疫治疗、乙肝疫苗佐剂打下基础。
- 汤善宏高柳村李运明毕茜靳江宋朝君杨桂涛
- 关键词：MHCB细胞
- 人源抗BLyS单链抗体的筛选及其构建与表达被引量：2
- 2015年
- 目的:从人源单链抗体库中筛选抗B细胞刺激因子(BLy S)的单链抗体基因、构建表达载体并实现单链抗体的表达。方法:以哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库为起始文库,通过流式细胞术进行分选,获得荧光强度最强、比例为0.1%的阳性细胞。从候选细胞中提取质粒并转化至DH5α中进行扩增,得到质粒转染293T细胞作为下一轮筛选所需的抗体库。经过依次降低抗原浓度进行了3轮分选得到2个候选的Sc Fv序列。经序列分析,选择其中一种单链抗体基因,利用基因工程技术构建分泌型表达质粒,转染293E细胞并通过镍亲和层析纯化获得B-10 Sc Fv抗体蛋白并通过Fortie Bio Octet QK进行亲和力分析。结果:经过3轮筛选获得了全新的抗BLy S Sc Fv抗体序列,成功构建并表达了anti-Bly S Sc Fv抗体蛋白,该单链抗体与的BLy S亲和常数为3.08 nmol·L-1。结论:从哺乳动物细胞展示型人源Sc Fv抗体库中成功获得了可结合BLy S的全新单链抗体基因序列,该单链抗体与BLy S具有较高的亲和力,这为后续的活性研究以及产品开发奠定了基础。
- 钱尼良张晶高柳村万德有冯红茹刘蕴慧杨懿高新宋海峰
- 关键词：B细胞B细胞刺激因子单链抗体
