黄鲲 作品数:20 被引量:86 H指数:7 供职机构: 广西大学生命科学与技术学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 广西壮族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 化学工程 轻工技术与工程 医药卫生 更多>>
耐放射异常球菌海藻糖合成酶基因的克隆及功能鉴定 被引量:9 2004年 利用生物信息学手段 ,在GenBank中进行氨基酸序列的同源性比较分析 ,检索到来自于耐放射异常球菌(Deinococcusradiodurans)基因组序列中一功能未确定的开放阅读框 (ORF) ,其氨基酸序列和已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序列有约 6 0 %的同源性 .将这段ORF克隆到大肠杆菌进行表达 ,并进行功能鉴定 .实验表明这段ORF序列所编码的是一种海藻糖合成酶 ,它能将麦芽糖分子转化成海藻糖分子 ,以 30 %的麦芽糖为底物时能将约 6 5 %的麦芽糖转化成海藻糖 .重组酶性质初步研究表明 ,在 pH 7 0 ,最佳温度 30℃转化麦芽糖效率 最高 . 韦宇拓 朱绮霞 罗兆飞 陈发忠 李桂媛 黄鲲 黄日波关键词:海藻糖合成酶 基因克隆 合成耐高温α-淀粉酶基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达 被引量:13 2005年 PFA是来源于Pyrococcus furious的一种耐高温α-淀粉酶,为了使PFA能够在巴斯德毕赤酵母中高效表达,根据巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性对PFA的基因序列进行密码子优化,人工合成耐高温淀粉酶PFA基因pfa,并连接到巴斯德毕赤酵母中表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-pfa。重组质粒线性化后转化到巴斯德毕赤酵母菌株GS115中,重组菌株在摇瓶中用甲醇诱导表达,分泌表达酶活最高为220 U/L。 韦宇拓 汪嵘 杜丽琴 陆坚 黄鲲 黄日波关键词:耐高温性能 Α-淀粉酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达 克雷伯氏菌甘油脱水酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达 被引量:14 2004年 利用PCR技术从克雷伯氏菌 (KlebsiellapneumoniaeATCC4 9790 )总DNA中扩增得到甘油脱水酶 (glyceroldehydratase ,DHAB)基因的DNA片段 ,并将其连接到表达质粒 pSE380 ,携带有重组质粒 pSE dhaB的大肠杆菌JM 1 0 9实现了dhaB基因的表达 ;对含有dhaB工程菌进行表达研究 ,表明工程菌在 37℃ ,以 1 .0mmol LIPTG诱导 5h酶活力即达到 1 1 6 4.1 4U L ,比野生菌酶活力 (1 6 8.6 9U L)提高了 6 .9倍。 周文广 韦宇拓 黄鲲 陈发忠 黄日波关键词:克雷伯氏菌 甘油脱水酶 大肠杆菌 克隆 质粒 Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建 被引量:4 1999年 利用计算机软件对取自GenBank的嗜热栖热菌ThermusthermophilusHB-8的DNA聚合酶基因(Tth)进行分析,并设计了两组引物进行PCR,分段克隆该基因。将两个PCR产物同时连接到另一个克隆载体上,使之成为完整基因,最后将完整基因克隆到表达载体上,构建了Tth基因的表达质粒,使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。 蒋永强 蒙健宗 黄鲲 黄日波关键词:嗜热栖热菌 DNA聚合酶 基因克隆 产甘油基因工程菌的构建 2004年 利用途径工程的基本原理 ,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae INVSc1菌株总 DNA克隆 3-磷酸甘油脱氢酶基因 (gpdl)和 3-磷酸甘油酯酶基因 (hor2 ) ,构建由两个杂合启动子 trc启动基因的双表达盒的重组质粒 p GEM- Cgpd1- Chor2 ,后者转入E. coli JM10 9菌株 ,构建的重组菌株就具有一条直接将葡萄糖转化为甘油的新代谢途径 ,将该重组菌株以葡萄糖为底物进行摇瓶发酵 ,甘油产率为 1.18g/ L。该研究结果为进一步构建生产 1,3-丙二醇工程菌打下了基础。 杜丽琴 韦宇拓 黄鲲 陈发忠 黄日波关键词:甘油 葡萄糖 重组质粒 重组菌株 基因工程菌 磷酸 高密度培养生产高活力α-乙酰乳酸脱羧酶 黄日波 蒙健宗 王青艳 卢福燊 周志强 李庆业 李丛 韦函忠 韦旭钦 林海鹏 黄鲲 杜丽琴 陆坚 该项目采用现代化生物技术手段重组DNA,经高密度培养生产 α-乙酰乳酸脱羧酶,经菌种筛选和反复多次的PCR测试,项目组从一株克雷伯氏土壤菌中克隆到编码α-乙酰乳酸脱羧酶的基因(约900bp片段),经过周密细致的基因操作,...关键词:关键词:Α-乙酰乳酸脱羧酶 利用葡萄糖、木糖生产燃料酒精的基因工程菌构建 被引量:10 2005年 以运动发酵单胞菌的总DNA为模板,PCR扩增Zym om onas m obilis中的乙醇脱氢酶基因(adhB)和丙酮酸脱羧酶基因(p d c)。首先进行单个基因表达,基因表达产物经SDS-PAGE电泳分析和乙醛指示平板检测,确认有酶活性后,将这2个基因串联构建多顺反子表达质粒pSE-p d c-adhB,转入大肠杆菌DH 5α内,得重组工程菌株。工程菌株经IPTG诱导,分别在含10%葡萄糖和10%木糖培养基中于37℃培养72 h,有乙醇产生,酒精产率分别为对照菌株21倍和5倍。 陆坚 韦宇拓 黄鲲 卢春花 黄日波关键词:运动发酵单胞菌 丙酮酸脱羧酶 乙醇脱氢酶 克隆 马链球菌透明质酸合成酶基因的分子克隆及表达 被引量:9 2003年 根据Streptococcus equisimilis、Streptococcus pyogenes、Streptococcus uberis三种链球菌透明质酸合成酶(seHAS、spHAS、suHAS)基因的高度保守区,设计一对简并引物,用两次PCR从Streptococcus equi的总DNA中扩增出sqHAS基因。构建表达质粒pSE-sqHAS并转化大肠杆菌DH5α,诱导培养后在细胞膜中检测到sqHAS蛋白及活性。利用携带该酶的细胞膜以UDP-GlcA和UDP-GlcNAc为底物在体外合成了分子量为3.6×10~6Da的HA,分别是发酵法生产和提取法生产的HA的分子量的2.5倍和5倍左右。马链球菌透明质酸合成酶基因的克隆及表达,国内外文献尚未见报道。本研究为体外酶法生产透明质酸做了初步探索。 凌敏 黄日波 黄鲲 韦宇拓关键词:克隆 克雷伯氏菌甘油脱水酶基因和1,3—丙二醇氧化还原酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 1,β—丙二醇是一种重要的化工原料,可用作溶剂、抗冻剂或保护剂、精细化工原料以及新型聚酯—聚埘苯二甲酸丙二醇酯(PTT)和聚氨酯的单体。PTT是一种新型聚酯材料,具有优异的回弹性、染色性、抗污性、较好的抗紫外变色性能等特... 周文广 韦宇拓 黄鲲 黄日波关键词:甘油脱水酶 大肠杆菌 文献传递 运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:7 2004年 采用PCR技术 ,以基因组DNA为模板克隆得到运动发酵单胞菌 (Zymomonasmobilis)乙醇脱氢酶 (alcoholdehydrogenaseⅡ )基因adhB ,连接到表达载体 pSE380上 ,得到重组质粒 pSE adhB。将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株DH5α中 ,重组菌株经IPTG诱导后 ,在乙醛指示平板检测到乙醇脱氢酶活性。SDS PAGE电泳结果显示出明显的 4 0KD特异性蛋白质条带。重组菌株经诱导培养 ,每毫升发酵液酶活力为 5u。 陆坚 韦宇拓 黄鲲 黄日波关键词:运动发酵单胞菌 乙醇脱氢酶 克隆 大肠杆菌