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人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究被引量：2: 2006年; 反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.; 仇灏金美芳周迎会孙其昌刘可人沈宏杰吴士良; 关键词：基质金属蛋白酶转化生长因子-Β1 SGC7901细胞

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定被引量：2: 2007年; 目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGal-NAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA O ligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平。结果:采用RNA i技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低。结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础。; 仇灏刘可人朱琍燕吴士良; 关键词：多肽 RNAI SGC7901细胞

人多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAc-T2）RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究: 目的:人类多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶/(ppGalNAcT/)催化O-聚糖合成的第一步反应,将UDP-GalNAc上的GalNAc基因转移至蛋白多肽链上特定序列中的Ser或Thr,从而合成GalNAcα-O-Ser/...; 刘可人; 关键词：RNA干扰 SIRNA 基质金属蛋白酶转化生长因子-Β1 SGC7901细胞; 文献传递

O-糖基化位点预测及糖基化酶催化特点被引量：9: 2006年; O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催化特性。; 刘可人金美芳吴士良; 关键词：黏蛋白脯氨酸

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定被引量：3: 2005年; 目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901。方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7901的总RNA为模板,利用RTPCR方法扩增两段不同长度ppGalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞GC7901细胞ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆。通过荧光显微镜、RT-PCR技术手段检测封闭反义ppGalNAc-T2基因RNA表达。结果:ppGalNAc-T2反义表达质粒载体pEGFP-FDT2和pEGFPFX-T2经限制性酶切及部分序列分析证明基因已正确插入载体中,荧光显微镜及RTPCR显示转染成功。结论:成功构建了ppGalNAc-T2反义表达质粒载体,反义封闭ppGalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞GC7901ppGalNAc-T2的含量明显降低,为进一步研究ppGalNAc-T2奠定了基础。; 金美芳刘可人周嘉梁郭向红潘浩吴士良; 关键词：半乳糖转移酶克隆鉴定 RT-PCR方法反义表达载体人胃癌细胞限制性酶切

ppGalNAc-T2对胃癌细胞株SGC-7901生物学性能的影响被引量：1: 2009年; 目的探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)对胃癌细胞株SGC-7901细胞性能的影响。方法构建ppGalNAc-T2RNA干扰真核载体(pSilenCircle-SiT2)、正义真核表达载体(pEGFP-C1-T2)及空载体(pEGFP-C1),分别转染胃癌细胞株SGC-7901细胞。MTT法检测上述各组转染后细胞对SGC-7901细胞增殖的影响;细胞黏附和穿膜实验分别检测其黏附力和迁移力的变化;同时采用RT-PCR和Westernblot检测MMP2、MMP14、TGF-β1等与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平。结果转染正义真核表达载体的SGC-7901细胞,随着ppGalNAc-T2表达量的增加,细胞的生长增殖受到抑制,并对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力降低,但其侵袭迁移能力变化不明显;而转染ppGalNAc-T2RNA干扰载体的SGC-7901细胞,细胞生长最快。ppGalNAc-T2与肿瘤细胞相关因子TGF-β1、MMP2的mRNA表达水平成负相关,但对MMP14无明显影响,Westernblot检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致。结论ppGalNAc-T2可影响胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖、黏附能力,并影响与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平。; 徐岚刘可人岳爱环仇灏顾永平吴士良; 关键词：胃癌细胞株生物学性能

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2):RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究: 目的:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应,将 UDP-GalNAc中的GalNAc基转移至蛋白多肽链上特定序列中的Set或Thr,从而合成GalNAcα-O- Ser／T...; 朱燕仇灏刘可人吴士良; 文献传递

茯苓多糖对受照射白血病K562细胞N-乙酰氨基半乳糖转移酶-9和自由基等的影响被引量：9: 2005年; 目的用化学方法提取茯苓多糖,并观察其对肿瘤细胞的作用。方法利用乙酸沉淀法、DEAE-纤维素层析法提取并分离茯苓多糖,并运用RT-PCR方法和流式细胞技术,检测其对受照射后肿瘤细胞的多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶-9(ppGalNAc-T9)mRNA表达、自由基活力以及细胞周期的影响。结果茯苓多糖可使经γ射线照射后的K562细胞中的自由基增多、ppFalNAc-T9表达增高、G_1期受阻明显。结论茯苓多糖对肿瘤细胞中自由基具有一定的清除作用,同时还可以增加ppGalNAc-T9在mRNA水平的表达。; 刘可人杨雪枫吴士良范雁徐爱华; 关键词：茯苓多糖 RT-PCR 多肽自由基细胞周期

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刘可人

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