刘富强
- 作品数：6 被引量：22H指数：2
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- 免疫沉淀1,25D_3-MARRS后胃黏膜提取物对成骨细胞生物学活性的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨1,25D3-MARRS(Membrane Associated,Rapid Response Steroid binding)Receptor蛋白是否参与胃黏膜提取物(EOM)对成骨细胞生物学活性的影响。方法酶消化法培养SD大鼠新生乳鼠的成骨细胞。提取SD大鼠胃黏膜提取物,每500μg胃黏膜提取物中分别加入10μg、1μg、0.1μg ERp57抗体(即1,25D3-MARRS抗体)、1μg正常IgG抗体进行孵育,然后分别加入50μl预洗的Protein A/G bead slurry进行免疫沉淀反应,离心去除1,25D3-MARRS-1,25D3-MARRS抗体-Protein A/G bead slurry复合物后取上清液作为高沉淀组EOM、中沉淀组EOM、低沉淀组EOM和正常IgG组EOM,并设生理盐水和未处理组EOM干预成骨。MTT法检测0～3天成骨细胞的增殖能力。逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测成骨细胞Ⅰ型胶原和骨钙素的表达变化。结果在成骨细胞增殖实验中,生理盐水组低于其他5组的增殖能力(P<0.05),免疫沉淀组EOM和未处理组EOM之间无显著差别(P>0.05)。Ⅰ型胶原和骨钙素的表达水平在免疫沉淀1,25D3-MARRS后发生不同程度的降低。结论 免疫沉淀1,25D3-MARRS后胃黏膜提取物对成骨细胞的增殖能力无明显影响,但降低分化能力,提示可能它通过参与EOM对成骨细胞的分化作用而影响骨钙代谢。
- 刘富强陈建庭徐静白岚
- 关键词：免疫沉淀成骨细胞
- 大鼠椎体生长板软骨细胞的改良培养及传代特征被引量：2
- 2011年
- [目的]建立体外培养及鉴定大鼠椎体生长板软骨细胞的方法,观察软骨细胞的传代特征。[方法]采用改良胰酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法对4只1周龄SD大鼠椎体生长板软骨细胞进行体外分离、培养。原代细胞传代后采用细胞HE染色和甲苯胺蓝染色对软骨细胞进行鉴定,采用MTT比色法绘制细胞生长曲线。将细胞传代至第6代,采用倒置相差显微镜观察各代软骨细胞的形态,采用免疫细胞化学染色鉴定各代软骨细胞Ⅱ型胶原的表达。[结果]MTT比色法显示,传3代以前的软骨细胞的生长曲线近似"S"形,从第4 d开始细胞呈对数生长,第9 d达平台期,至第11 d开始出现生长抑制。体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形。传3代以前的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫细胞化学呈强阳性。[结论]本研究所采用的软骨细胞分离和培养方法,能在短时间内获得高纯度的软骨细胞,传3代及以前的细胞具有软骨细胞的特征性表型,增殖较快,这一方法为更深入地从细胞水平研究椎体的纵向生长奠定了基础。
- 李涛陈建庭朱青安许子星查丁胜刘富强巫松辉吴骞肖文德
- 关键词：软骨细胞细胞培养
- 不同年龄大鼠胸椎椎体生长板的组织学观察及增殖能力测定被引量：1
- 2011年
- 目的比较不同年龄大鼠胸椎椎体生长板的组织学差异并对不同年龄大鼠椎体生长板软骨细胞的增殖能力进行测定。方法采用番红O-固绿染色法对1 d及1、4、8、16、28周龄大鼠胸椎椎体生长板进行染色鉴定,测定生长板软骨肥大区、增殖区、静止区的高度。采用改良的胰酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法对以上年龄阶段大鼠胸椎椎体生长板软骨细胞进行原代培养。采用实时定量PCR检测不同年龄大鼠胸椎椎体生长板体外培养软骨细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的基因表达水平,采用Western blot法测定不同年龄大鼠胸椎椎体生长板体外培养软骨细胞PCNA蛋白的表达。结果 1 d及1周大鼠肥大区和增殖区明显高于其他年龄组(P<0.01);4周大鼠增殖区高于28周大鼠(P<0.05);1 d及1周大鼠静止区高于其他年龄组(P<0.05),4周大鼠静止区高于16周、28周大鼠(P<0.05)。16周大鼠椎体生长板静止区内开始出现骨化现象,28周龄大鼠椎体生长板静止区大部分出现骨化现象。PCNA在基因和蛋白水平的表达随年龄增加而降低。结论 1 d及1周大鼠椎体生长板各区的高度明显高于年龄较大的大鼠。16周大鼠椎体生长板静止区内开始有骨长入,28周龄大鼠椎体生长板静止区大部分出现骨化现象。随年龄增加椎体生长板软骨细胞的增殖能力逐渐下降。
- 李涛陈建庭朱青安许子星查丁胜刘富强巫松辉吴骞肖文德
- 关键词：生长板软骨细胞增殖细胞核抗原
- 中老年人正位腰椎及髋部骨密度扫描对骨质疏松诊断敏感性的比较被引量：14
- 2010年
- 目的比较双能X线骨密度仪腰椎正位扫描及髋部扫描对骨质疏松诊断的敏感性。方法通过病史询问排除腰椎骨折的患者后,随机选取来我院骨密度室行骨密度检测的40至82岁中老年人340名(其中男性108名,女性232名)作为研究对象。采用双能X线骨密度仪对被检者腰部正位及髋部行骨密度检测,分析比较此两测量部位对骨质疏松症诊断的敏感性。结果男性被检者髋部骨密度扫描骨质疏松的检出率为62.03%高于腰椎正位的23.14%,结果有统计学差异,各年龄组髋部最低T分值均低于腰椎正位最低T分值,各组结果均有统计学差异。女性被检者髋部骨密度扫描骨质疏松的检出率为56.89%高于腰椎正位的50%,结果有统计学差异,各年龄组髋部最低T分值均低于腰椎正位最低T分值,各组结果均无统计学差异。结论 中老年人髋部T评分低于正位腰椎;髋部骨密度扫描较正位腰椎骨密度扫描对骨质疏松的诊断具有更高的敏感性;髋部T评分在骨质疏松诊断中的意义更为重要。
- 吴骞陈建庭钟招明李丽巫松辉刘富强
- 关键词：敏感性骨密度髋部
- 新型活性修饰聚乳酸组织工程骨的体外成骨研究被引量：3
- 2011年
- [目的]探讨氨等离子体改性、酰胺键接枝甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(GRGDS)短肽的活性修饰方法对消旋聚乳酸(PDLLA)组织工程骨体外成骨能力的影响。[方法]制备圆片状直径8 mm、厚1 mm的PDLLA三维多孔支架,分为三组:表面氨基化PDLLA(aminated PDLLA,A/PDLLA,A组),接枝肽A/PDLLA(peptides conjugated A/PDLLA,PA/PDLLA,PA组),以未经处理的PDLLA(P组)作为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组材料上骨髓间充质干细胞(BMSCs)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白-2(Bmp-2)和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达变化并进行ALP活性测定和钙黄绿素矿化荧光染色。[结果]qPCR结果示:第3 d,PA组各基因表达倍数均较P组高;除OCN外的各基因表达也均较A组高。第7 d,A组OCN(13.13±1.28)、Col-Ⅰ(23.71±6.51)和OPN(27.4±7.17)mRNA表达倍数为最高,PA组次之。第14 d,多数基因表达上调,A组和PA组表达倍数较对照组明显增高。PA组OCN(49.21±7.03)、ALP(24.26±3.41)和BMP-2(11.82±2.38)mRNA的表达较A组高,差异有统计学意义(P<0.05)。ALP活性检测结果示:A组和PA组ALP活性持续升高,P组活性第21 d较第14 d时略有下降。第7 d,A组和PA组之间ALP活性比较无统计学意义(P>0.05),但均高于P组(P<0.01);第14 d和第21 d,三组间ALP活性两两比较均有统计学意义,ALP活性PA组>A组>P组。钙黄绿素矿化荧光染色观察示,骨支架上钙盐沉积与ALP的活性变化趋势相平行。[结论]氨等离子体改性能够促进聚乳酸组织工程骨支架上BMSCs早期向成骨细胞分化,改性后接枝GRGDS肽的新型活性修饰PDLLA具有更好的促BMSCs体外成骨能力。
- 许子星陈建庭张鑫鑫姜晓锐李方国李涛查丁胜刘富强巫松辉朱青安
- 关键词：消旋聚乳酸仿生材料骨组织工程
- 大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的原核表达并纯化大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合(1,25D3-Membrane associated rapid re-sponse steroid binding,1,25D3-MARRS)蛋白。方法经RT-PCR扩增大鼠1,25D3-MARRS基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,并进行Western blot鉴定。结果重组原核表达质粒pET-32a-1,25D3-MARRS经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为77 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,且具有良好的反应原性。结论已成功表达并纯化了重组1,25D3-MARRS蛋白,为进一步研究其性质、功能及分布特点奠定了基础。
- 徐静张振书王灿刘富强白岚
- 关键词：原核细胞
