刘建源
- 作品数：17 被引量：50H指数：4
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在CHO细胞中的表达及免疫学特性研究
- 目的：为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性，通过PCR克隆了HSV-2 gD基因，并构建PCMV-gD的真核表达载体，在CHO细胞中表达，并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。
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- 晁华刘建源张振龙
- 关键词：单纯疱疹病毒糖蛋白DCHO细胞真核表达载体抗体检测生物制品
- 文献传递
- SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察被引量：5
- 2004年
- 观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果 ,为进一步的临床研究奠定基础 .将BJ0 1株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清 ,经 β 丙内酯灭活和超滤浓缩 ,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗 .经HPLC分析其纯度为 97.6 % ,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒 .蛋白质印迹 (westernblotting)分析表明 ,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应 .纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准 .用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体 ,可阻止SARS病毒在猴体内增殖 ,且对SARS病毒攻击具有保护作用 .在低中和抗体情况下 ,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象 .猴体免疫SARS灭活疫苗后 ,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫 ,均未发现局部和全身副反应 。
- 秦鄂德石慧颖唐琳王翠娥常国辉丁志芬赵铠汪建于曼司炳银刘建源陈则吴东来彭文明孟庆文刘伯华韩伟国尹训南段鸿元杨保安战大伟田龙程晓洁吴劲松谭刚李懿李豫川李双利刘永刚刘洪
- 关键词：猴体SARS病毒灭活疫苗免疫原性中和抗体疫苗免疫
- SARS病原学及其防控系列研究
- 祝庆余秦鄂德曹务春黄培堂王希良张文福鹿建春刘建源文洁杜新安
- 该项目对SARS病原学、诊断试剂、疫情监测及流行规律、预防与治疗性生物制剂以及防护装备等进行了系列研究。该项目主要技术创新点是：(1)在国内率先分离到SARS冠状病毒(SARS-CoV)，最先完成该病毒全基因组序列的测定...
- 关键词：
- 关键词：诊断试剂生物制剂抗体检测试剂盒酶联免疫吸附试验
- 一种抗SARS－CoV免疫球蛋白抗体及其制备方法
- 本发明涉及一种用于治疗、预防及诊断SARS－CoV的抗SARS－CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体，特征在于该抗体为马抗SARS－CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗体，同时本发明公开该抗体的制备方法。本发明抗体能特异消灭S...
- 王希良杜新安石辛甫张松乐刘建源李岩赵光宇田光周华
- 文献传递
- 细胞免疫和遗传因素对乙型肝炎疫苗阻断母婴传播效果的影响被引量：16
- 2006年
- 目的比较接种重组乙肝疫苗后不同体液免疫应答高危儿童的细胞免疫反应特点,进一步探讨母婴阻断失败、无应答的机理。方法124名母亲HBsAg和HBeAg双阳性的新生儿按常规乙肝的免疫程序接种重组CHO和酵母乙肝疫苗,于第1针免后3、7、12月检测HBsAg和抗-HBs,判定免疫成功或失败的新生儿,首针后60～120月(平均80月)再次检测HBsAg和抗-HBs指标,选取8名免疫重组乙肝疫苗母婴阻断失败儿童、4名免后无应答抗体反应的儿童和11名母婴阻断成功的儿童采集静脉血样,分离淋巴细胞,应用ELISPOT方法检测产生IL-2斑点形成细胞的数量,并对斑点数和表面抗体滴度的相关性进行比较,同时分析HLA-A、-B、DRB1和DQB1等位基因的多态性。结果(1)124名研究对象中有77．4％的儿童可产生保护性表面抗体,成功阻断母婴传播;13．7％的人免疫失败,感染乙肝;8．9％的儿童则对乙肝疫苗呈无应答状态。(2)免疫成功组产生IL-2细胞数(55．2±42．22)显著高于免疫失败组(3,75±3．24)和抗体无应答组(6．75±3．59),P<0．01。(3)儿童免疫乙肝疫苗后的表面抗体滴度与经乙肝疫苗诱导产生的特异性分泌IL-2的T细胞数量呈显著性正相关(r =0．601,P<0．01)。(4)HLA-B*48在对酵母乙肝疫苗无应答的儿童中占有25％的频率,显著高于免疫成功(2．2％)和失败的儿童(0％),P<0．05。对CHO疫苗无应答儿童的HLA-DRB1*15的频率显著高于免疫成功和失败的儿童(P<0．05)。结论乙肝疫苗母婴阻断失败和免后抗体无应答儿童的细胞免疫应答显著低于阻断成功的儿童,并且可能与遗传因素有关。
- 廖雪雁梁争论李艳萍李荣成刘建源吴小音张瑞方鑫农艺黄月奎张华远李河民
- 关键词：重组乙型肝炎疫苗HLA细胞免疫ELISPOT
- 重组人干扰素βser17工程菌发酵培养条件的优化研究被引量：3
- 2005年
- 实验对重组人干扰素βser17(rhIFNβser17)工程菌的发酵培养条件进行了研究,通过实验优化确定了适宜rhIFNβser17表达的培养基、诱导剂使用浓度、诱导时期和诱导后的收获时间等,建立了发酵培养工艺,并在50L发酵罐进行了中试发酵,菌体收获量湿重达13.08g/L,rhIFNβser17表达量占菌体总蛋白的20.2%,纯化后比活性达2×107IU/mg蛋白以上,为进一步的下游开发奠定了基础。
- 张振龙刘建源邓宛明郭秀梅郭鹏扬云凯
- 关键词：发酵
- 重组人干扰素βSer^(17)的结构及活性分析被引量：1
- 2005年
- 目的分析大肠杆菌表达的重组人干扰素βSer17(rhIFN-Ser17)的分子结构及其生物学活性。方法通过West-ernblot、氨基酸末端测序、质谱及生物学活性分析等,对大肠杆菌表达的rhIFN-Ser17分子进行鉴定。结果大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17的N末端20个氨基酸及C端2个氨基酸序列与文献报道一致,产物的相对分子质量为19877·9,比活性超过2×107IU/mg蛋白。结论大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17分子结构与理论推测值完全一致。
- 杨云凯张振龙刘建源邓宛明崔春青
- 关键词：分子结构生物学活性质谱分析
- 重组人干扰素βSer^(17)的制备及其对SARS病毒的抑制作用被引量：4
- 2005年
- 目的制备重组人干扰素-βSer17(rhIFN-βSer17),并检测其对SARS病毒的抑制作用。方法通过发酵收集菌体,经高压匀浆破碎收集包涵体、有机溶剂抽提、酸沉淀、柱层析纯化重组蛋白,通过细胞病变抑制法检测其对SARS病毒的抑制作用。结果研制的rhIFN-βSer17的纯度超过95%,比活性超过2.0×107IU/mg蛋白,在体外对SARS病毒具有明显的抑制作用。结论已成功制备rhIFN-βSer17,并在体外对SARS病毒具有抑制作用。
- 张振龙刘建源杨云凯邓宛明崔春青王淑芳汤燕文赵建英
- 关键词：SARS病毒非典型性肺炎
- 复制型重组痘苗活载体疫苗生产工艺研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究复制型重组痘苗活载体疫苗的生产工艺。方法通过在病毒-细胞比(MOI)、不同培养时间、培养温度、碳酸氢钠含量的条件下培养复制型重组痘苗病毒,确定适用于重组痘苗活载体疫苗的生产工艺。以确定的生产工艺制备3批疫苗,并进行各项检定。结果以MOI为1∶750,培养液中加入7.5%碳酸氢钠的比例为1.0%,培养温度为37℃,培养时间为72 h左右,获得疫苗的病毒滴度最高。按此生产工艺生产的3批疫苗,病毒滴度均在107PFU/ml以上,经检定各项指标均合格。结论确定了复制型重组痘苗活载体疫苗的生产工艺。
- 王宁刘颖李媛媛罗兰侯秀霞刘建源
- 关键词：痘苗病毒疫苗生产工艺
- Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在CHO细胞中的表达及其免疫学特性
- 2012年
- 目的在CHO细胞中表达Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus-2,HSV-2)糖蛋白D(Glycoprotein D,gD),并检测其免疫学特性。方法采用Vero细胞培养HSV-2,提取总DNA,以其为模板,PCR扩增gD基因,与pCMV-sport载体连接,构建重组表达质粒pCMV-gD,将质粒pCMV-gD转染COS-7和CHO-K1细胞,并进行表达。亲和胶Anti-flag M2 Agarose纯化表达蛋白,经SDS-PAGE和HPLC分析重组蛋白纯度,Western blot分析蛋白反应原性,全波长扫描分析蛋白的光谱曲线,等电聚焦电泳测定蛋白的等电点。以20、40μg纯化的gD免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中HSV-2 gD特异性抗体水平,中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。结果酶切鉴定及DNA测序表明,重组表达质粒pCMV-gD构建正确,在COS-7细胞的瞬时表达产物和CHO细胞中的稳定表达产物均可被HSV-2 gD单抗特异性识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。纯化的gD在相对分子质量约5 500处可见目的蛋白条带,纯度为65.46%;保留天然HSV-2 gD的反应原性,最适紫外吸收波长为275.50 nm,等电点为8.3。gD 20μg组和40μg组小鼠血清特异性抗体滴度分别为1∶125 000和1∶16 000,中和抗体滴度分别为1∶17和1∶16,表明gD可诱导中和抗体的产生,也可诱导高滴度的HSV-2gD特异性抗体。结论成功在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD,表达的HSV-2 gD具有较好的免疫原性,为基因工程疫苗的开发奠定了基础。
- 晁华刘建源张振龙
- 关键词：单纯疱疹病毒属糖蛋白类CHO细胞
