- 人结肠癌CW-2干细胞的分离纯化和生物学特性研究
- 目的：分选、培养人结肠癌细胞株CW-2干细胞。比较3种细胞分选方法对人结肠癌细胞株CW-2干细胞的富集效率，探讨获得肿瘤干细胞的有效方法。探讨人结肠癌细胞株CW-2干细胞生物学特性。
方法：采用单纯无血清悬浮培养、...
- 刘美
- 关键词：结肠癌肿瘤干细胞细胞分离生物学特性
- 文献传递
- 结肠腺癌中结肠癌干细胞的分离、鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的从人结肠腺癌组织中分离、鉴定结肠癌干细胞,并初步观察其生物学特性。方法利用新鲜结肠腺癌组织,无血清悬浮成球培养,流式细胞检测ESA、CD44表达情况,体外观察其诱导分化及CK20、Muc表这情况,Balb/C小鼠移植观察其成瘤情况。结果从人原代结肠腺癌中分离、纯化EpCAM^(high)CD44^+结肠癌干细胞,结肠癌原代细胞中EpCAM^(high)CD44^+细胞比例为1.7%～38%(平均5.4%)。单克隆形成实验证实结肠癌组织中存在肿瘤干细胞,其比例为(2.07±0.11)%,分离获得的EpCAM^(high)CD44^+细胞能在无血清培养基中"成球",在血清诱导下能贴壁分化;将EpCAM^(high)CD44^+细胞移植在Balb/C裸鼠体内,表现出很强的致瘤性,移植瘤中EpCAM^(high)CD44^+细胞比例为3.6%～43.2%(平均15.2%),所有的移植瘤经组织学测定,均形成腺管样结构,表达结肠特异性分化标志物CK-20、中性上皮粘蛋白(neutral epithelial mucins,Muc)。结论人结肠腺癌组织中存在EpCAM^(high)CD44^+细胞群,具有和普通干细胞相类似的无限增殖、自我更新和分化能力。
- 艾亮刘美陈宓李少林
- 关键词：结肠腺癌结肠癌干细胞
- RNA干扰CD133基因对结肠癌干细胞生物学行为的影响
- 2011年
- 目的探讨CD133基因表达、活化被阻断后对结肠癌干细胞生物学行为的影响。方法从EpCAM^(high)CD44^+结肠癌干细胞中流式分选获得CD133+细胞,感染LV-CD133shRNA载体慢病毒后观察CD133+结肠癌干细胞在生长方式、成球能力、克隆形成率、成瘤能力以及ABCG2 mRNA的变化;Western blot分析CD133^-细胞中CD133蛋白表达情况。结果 EpCAM^(high)CD44^+结肠癌干细胞中CD133^+细胞比例为89.2%。实验组经过LV-CD133shRNA载体病毒感染后,在干细胞养液中细胞改悬浮生长的方式为贴壁生长,不能形成细胞球。MTT法测定发现细胞增殖减慢,克隆形成率明显下降。将感染细胞移植在Balb/C裸鼠体内,在观察期间,感染LV-CD133shRNA载体病毒的CD133^+细胞无肿瘤形成。ABCG2 mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。从EpCAM^(high)CD44^+结肠癌干细胞中流式分选获得CD133^-细胞,其中也有CD133蛋白的表达。结论 CD133维持结肠癌干细胞生物学特性。
- 艾亮刘美陈宓李少林
- 关键词：结肠癌干细胞CD133RNA干扰生物学行为
- 人结肠癌细胞株CW-2干细胞生物学特性研究被引量：1
- 2010年
- 目的从人结肠癌细胞株CW-2中分离癌干细胞,并观察其生物学特性。方法采用多重联合法分离人结肠癌干细胞,应用流式细胞仪检测分离后细胞中CD44+EpCAM+癌干细胞含量;细胞周期检测、体外侵袭实验、体内成瘤实验对癌干细胞进行生物学特性研究。结果分离后细胞中CD44+EpCAM+癌干细胞含量为89.57%;CD44+EpCAM+癌干细胞的增殖能力、侵袭能力、致瘤能力均强于非癌干细胞,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD44+EpCAM+癌干细胞具有低增殖性、高侵袭性、高致瘤性,并可通过多重联合分离获得。
- 刘美艾亮陈宓龙浩李少林
- 关键词：癌干细胞结肠癌流式细胞技术细胞分离
- 人结肠癌CW-2干细胞获取方法研究被引量：1
- 2010年
- 目的运用3种不同的方法分离纯化人结肠癌CW-2干细胞,并对其分离纯化效率进行比较,探讨获得癌干细胞的有效方法。方法采用单纯无血清悬浮培养、无血清悬浮培养联合化疗药物、流式细胞分选技术分别富集人结肠癌细胞株CW-2干细胞;然后运用流式细胞术、NOD-SCID小鼠致瘤实验和Transwell侵袭实验分析比较3种方法的富集效率。结果无血清悬浮培养细胞,无血清悬浮培养联合化疗药物处理细胞和流式细胞仪分选技术分选后细胞中具有结肠癌干细胞特性的CD 44^+EPCAM^+细胞分别为(59.39±4.55)%、(74.36±6.78)%、(86.43±8.43)%;3群细胞的成瘤能力和侵袭能力都存在显著统计学差异(P值<0.05):流式细胞分选技术分选后细胞>无血清悬浮培养联合化疗药物处理细胞>单纯无血清悬浮培养细胞结论流式细胞分选技术富集癌干细胞的能力强于单纯无血清悬浮培养和无血清悬浮培养联合化疗药物,无血清悬浮培养联合化疗药物又强于单纯无血清悬浮培养。
- 刘美陈宓艾亮龙浩李少林
- 关键词：肿瘤干细胞结肠癌奥沙利铂
- 人结肠癌细胞株CW-2干细胞富集方法的比较被引量：4
- 2010年
- 目的比较3种细胞分选方法对人结肠癌细胞株CW-2干细胞的富集效率,探讨获得肿瘤干细胞的有效方法。方法采用单纯无血清悬浮培养、无血清悬浮培养+奥沙利铂、无血清悬浮培养+奥沙利铂+流式细胞术(多重联合)分别富集人结肠癌细胞株CW-2干细胞;应用流式细胞术、NOD-SCID小鼠致瘤实验和Transwell侵袭实验比较3种方法的富集效率;分别测量不同时间点(4、7、9、14、21、28d)各组小鼠成瘤情况;免疫组化检测移植瘤中CD44和EPCAM的表达情况。结果无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞和多重联合分选细胞中具有结肠癌干细胞特性的CD44+EPCAM+细胞,细胞比例分别为57.39%、73.85%、89.57%;多重联合分选细胞接种NOD-SCID小鼠后成瘤时间早、瘤体增长速度快,各时间点体积分别为(209.25±31.54)、(500.00±72.90)、(852.75±157.51)、(2280.00±440.91)、(4897.00±1154.15)、(11070.00±3559.86)mm3,与无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞的成瘤能力比较差异有统计学意义(P<0.05);单纯无血清悬浮培养细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞和多重联合分选后细胞接种72h后穿过人工基底膜的细胞数分别为(98±7)/视野、(135±7)/视野、(188±6)/视野,3组之间差异有统计学意义(P<0.05);各组移植瘤中均表达CD44和EPCAM。3种分选方法所获得细胞中干细胞含量由高到低为:多重联合分选后细胞、无血清悬浮培养+奥沙利铂处理细胞、单纯无血清悬浮培养细胞。结论多重联合法富集肿瘤干细胞的效果明显强于单纯无血清悬浮培养和无血清悬浮培养+化疗药物法,是获得肿瘤干细胞较好的方法。
- 刘美李少林陈宓李小青龙浩
- 关键词：肿瘤干细胞结肠肿瘤细胞分离细胞培养技术
