孔繁强
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
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- 腺苷受体A1亚型对视网膜色素上皮细胞免疫调节功能的影响
- 2018年
- 目的研究视网膜色素上皮细胞(RPE)主要是通过何种亚型的腺苷受体(ARs)来结合腺苷,及其对RPE功能的影响。方法体外培养人ARPE-19细胞系,定量PCR检测4种腺苷受体(ARA1、ARA2A、ARA2B、ARA3)基因的表达;提取细胞膜蛋白,Western blot检测4种腺苷受体在RPE细胞膜上的存在。体外培养ARPE-19细胞至80%融合后随机分为A^E组。其中,A组为无干预对照组,B^E组分别给予ARA1拮抗剂DPCPX(50 nmol/L)、ARA2A拮抗剂SCH58261(100 nmol/L)、ARA2B拮抗剂MRS1754(100 nmol/L)及ARA3拮抗剂MRS1220(5μmol/L)干预。利用H3-腺苷进行放射性配体结合实验,计算各组细胞对腺苷的最大结合容量(Bmax)。以肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg/L及γ干扰素(IFN-γ)1 000 U/m L联合干预体外培养的ARPE-19细胞,给予或不予ARA1激动剂(CCPA),酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中白细胞介素(IL)-6、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)、单核细胞趋化因子(MCP)-1、趋化因子C-X-C配体10(CXCL10,IP-10)的含量。结果在ARPE-19细胞中即可检测到4种腺苷受体基因的表达,也可探测到其分子在细胞膜上的存在。A^E组ARPE-19细胞结合腺苷的Bmax(单位:fmol)分别为2.04±0.31、0.44±0.06、1.82±0.28、2.01±0.42及2.06±0.44,其中B组较其他各组Bmax均降低(P<0.01)。以TNF-α及IFN-γ激活ARPE-19细胞,与对照RPE组比较,CCPA干预RPE组IL-6、MCP-1及IP-10的含量降低、IL-10的含量增加(P<0.01)。2组TGF-β的含量差异无统计学意义。结论 ARA1对ARPE-19细胞结合腺苷的能力具有重要的调控作用,ARA1受体介导的信号可抑制ARPE-19细胞分泌促炎因子及驱化因子,具有潜在的免疫抑制作用。
- 孔繁强周树民张伟陈松
- 关键词：受体视网膜色素上皮细胞
- 2型糖尿病患者血栓形成机制研究进展被引量：3
- 2012年
- 2型糖尿病患者多罹患心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）,其基本病理机制是动脉粥样硬化,患者常因动脉粥样硬化斑块破裂而引发急性动脉血栓形成并导致心肌梗死。与非糖尿病患者相比,2型糖尿病患者有更高的心肌梗死的风险。许多研究显示,在此过程中止凝血系统参与并产生重要作用。本文就近年来2型糖尿病患者相关因素改变对血栓形成影响的研究综述如下。1血小板的改变在糖尿病患者血浆中，血小板病理l生活化以及对活化诱导剂反应性增强是血栓形成过程中的关键环节。在动脉粥样斑块破裂后，血小板迅速活化并且聚集能力显著增强。由于血小板在一期止血过程中的粘附、聚集功能是二期止血（凝血活化）的前期条件，因此同样也是动脉血栓形成的重要基础。在糖尿病中，病理性刺激导致大量高反应性的新生血小板从骨髓释放，并在血栓并发症中起关键作用。
- 孔繁强任静
- 关键词：血栓内皮细胞血管性血友病因子纤溶系统
- 基质金属蛋白-9抑制剂阻断视网膜色素上皮细胞表面CD73脱落防治实验性自身免疫性葡萄膜炎的初步研究被引量：3
- 2020年
- 目的:初步探讨MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73脱落,防治实验性自身免疫葡萄膜炎(EAU)的机制。方法:体外培养分离自野生型C57BL/6小鼠及CD73基因敲除(CD73-/-)小鼠的RPE细胞,以脂多糖及TNF-α共同干预,诱导RPE表面CD73脱落。依据是否同时加入MMP-9抑制剂CTK8G1150(终浓度5.0μmol/L),将两种小鼠培养的RPE细胞分别设为MMP-9抑制剂干预组及无干预对照组。每组细胞给予溶媒、1μmol/L单磷酸腺苷(AMP)、1μmol/L AMP及3μmol/L 5'-α,β-亚甲基-二磷酸腺苷(APCP)(AMP+APCP)进行干预。氚化胸苷掺入法检测不同组别RPE细胞对CD4+T细胞增生的刺激作用。分别以野生型B6小鼠及CD73-/-小鼠为受体,过继免疫诱发EAU。受体小鼠分别随机分为MMP-9抑制剂干预组及未干预对照组,于过继免疫后4、7、10 d视网膜下腔分别注射CTK8G1150或溶媒。实时定量PCR(RT-PCR)、Western blot法检测受体小鼠RPE细胞中CD73 mRNA及蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。结果:刺激方式为AMP时,C57BL/6 MMP-9抑制剂干预组CD4+T细胞的增生能力较无干预组显著下降,差异有统计学意义(F=13.28,P<0.01);溶媒、AMP+APCP时,两组CD4+T细胞增生能力比较,差异无统计学意义(F=7.78、6.58,P>0.05)。CD73-/-MMP-9抑制剂干预组、无干预组不同刺激方式CD4+T细胞增生能力比较,差异均无统计学意义(F=5.24、6.12、7.04,P>0.05)。RT-PCR检测结果显示,B6受体小鼠MMP-9抑制剂组、无干预对照组RPE细胞中CD73 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(F=6.54,P>0.05)。Western blot检测结果显示,B6受体小鼠MMP-9抑制剂组RPE细胞中CD73蛋白表达较未干预对照组显著增加,差异有统计学意义(F=15.24,P<0.01)。结论:MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73的脱落对EAU具有保护作用。
- 周树民孔繁强陈松
- 关键词：视网膜色素上皮
- 血小板功能试验监测P2Y_(12)受体拮抗剂的抗血小板聚集效果研究进展被引量：5
- 2017年
- P2Y_(12)受体拮抗剂广泛应用于心脑血管疾病的预防和治疗中,而监测治疗后血小板功能变化有助于改善患者的预后。血小板功能试验是评估抗血小板聚集治疗后残留血小板高反应性的重要方法,主要包括透射光法血小板聚集试验(LTA)、电阻抗法血小板聚集试验(WBIA)、血管舒张剂刺激磷酸蛋白(VASP)、血栓弹力图(TEG)、血小板功能分析仪-100型(PFA-100)和Verify Now系统。这些试验监测抗血小板聚集治疗后血小板残留反应性的能力各不相同,评估效果也各有不同。其中,LTA是评估抗血小板药物疗效的经典方法,便捷而廉价,但易受操作和环境干扰;WBIA临床应用较少,缺乏评估临界值;VASP对血小板功能变化敏感,但试验复杂且成本高;TEG能监测药物对血小板的抑制率,但指导治疗的安全性还需要验证;PFA-100监测抗血小板聚集药物的敏感性和特异性尚不明确;Verify Now有效可靠,但成本过高。临床研究证据显示,LTA、VASP和Verify Now系统能敏感反映P2Y_(12)受体拮抗剂抗血小板聚集的效果,且与心血管疾病患者主要不良心脏事件(MACE)风险相关。
- 孔繁强任静门剑龙
- 关键词：预后受体拮抗剂血小板功能试验
- 重组人胰岛素样生长因子-1对db/db小鼠应激性血糖升高的保护作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究重组人胰岛素样生长因子(rhIGF)-1对2型糖尿病(T2DM)伴胰岛素抵抗(IR)小鼠应激性血糖升高的治疗作用。方法:以瘦素受体基因缺陷型db/db小鼠为动物模型,电脉冲刺激诱发应激性高血糖。给予高剂量胰岛素或rhIGF-1进行干预,观察血糖的变化情况。Real time-PCR及Western blot分别检测骨骼肌组织内GLUT4基因的表达水平及GLUT4蛋白含量。结果:在8周龄时瘦素受体基因缺陷的db/db小鼠表现出了明显的肥胖、高血糖及高胰岛素血症。应激后组间血糖水平的差异有统计学意义(F组间=48.915,P<0.05),组内不同时间点血糖水平差异无统计学意义(F时间=1.295,P>0.05),组间和时间无交互效应(F交互=1.046,P>0.05)。采取干预措施后,组间血糖水平差异有统计学意义(F组间=36.947,P<0.05),不同时间点血糖水平差异有统计学意义(F时间=13.880,P<0.05),且组间和时间存在交互效应(F交互=11.769,P<0.05)。IGF-1可显著增加db/db小鼠骨骼肌组织中GLUT4基因的表达及GLUT4蛋白在细胞膜中的含量。结论:rhIGF-1对T2DM小鼠被诱发的应激性高血糖具有较胰岛素更好的控制作用,此作用可能是因骨骼肌细胞中GLUT4的表达及转位增加所致。
- 孔繁强周树民赵荣兰孙蓓梁东春
- 关键词：基因缺失胰岛素抗药性葡萄糖转运体4型小鼠血糖
