宿文辉 作品数:35 被引量:58 H指数:4 供职机构: 中国医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省科技厅基金 辽宁省博士科研启动基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
人牛精浆相关蛋白的亚细胞定位及生物活性 2006年 利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察HBRP的亚细胞定位,并用放射自显影检测该细胞系的蛋白激酶C(PKC)活性。HBRP定位在细胞膜及胞浆近膜处;HBRP对PKC活性有明显的抑制作用。从而确定了人新的精子结合蛋白HBRP在细胞内的定位,并认定了HBRP为有生物活性的功能蛋白。 张杰 刘莹 宗志红 宿文辉 于秉治关键词:亚细胞定位 蛋白激酶C活性 S100A2转染SGC-7901细胞后对其增殖、凋亡和迁徙能力的影响 2015年 目的克隆胃粘膜上皮细胞GES-1细胞中S100钙结合蛋白A2 c DNA,构建p SMPUW-NeoS100A2重组表达载体,转染胃癌细胞SGC-7901后,研究S100A2蛋白的表达变化,及其对胃癌细胞增殖、凋亡和迁徙能力的影响。方法应用重组技术构建p SMPUW-Neo-S100A2融合蛋白表达载体,质粒经测序正确后,western-blot检测S100A2蛋白表达水平变化,MTT检测细胞增殖能力、流式细胞仪检测细胞凋亡、划痕实验检测细胞迁徙能力的改变。结果构建的p SMPUW-Neo-S100A2表达质粒,转染SGC-7901细胞后,发现S100A2蛋白表达水平升高,胃癌细胞出现增殖能力下降、凋亡升高和迁徙能力下降的现象。在细胞增殖能力检测中,表达质粒转染细胞后第1天和第2天的细胞增长率分别为18%和32%,而对照组对应为27%和56%,差距有统计学意义(<0.05)。结论S100 A2转染胃癌SGC-7901细胞后使该细胞的增殖能力下降、细胞凋亡程度升高和迁徙能力下降,可以作为一个生物标记物对其进行筛选。 张天彪 宿文辉 赵滢 陈鑫莹关键词:细胞迁徙 人新基因HBRP基因工程细胞系的建立 被引量:1 2004年 在研究牛精浆蛋白 (bovineseminalplasmaproteins ,BSPproteins)及其相关蛋白在受精卵发育过程中的重要作用时 ,在人睾丸组织中发现并克隆了一个与BSP蛋白相关新基因的序列 ,其开放阅读框架 (openreadingframe ,ORF)编码了一个含 2 2 3个氨基酸残基的蛋白质 ,氨基酸序列中含有4个纤连蛋白Ⅱ型结构域 ,与BSP蛋白在结构上有一定的相似性 ,称其为人BSP相关蛋白 (humanBSP relatedprotein ,HBRP) ,并在GenBank注册 ,登录号为AF2 791 4。预测该蛋白是与BSP蛋白功能相关的结合蛋白 ,并已成功地将该基因定位在 1 9号染色体 1区 3带上。为进一步研究该新基因的生物学功能 ,利用重组质粒pEGFP C2 HBRP转染人胚肾HEK2 93细胞 ,通过G41 8筛选出药物抗性克隆 ,建立了稳定的基因工程细胞系 ,为该基因功能的研究奠定了基础 。 张杰 刘莹 惠答美 宿文辉 宗志红 于秉治关键词:基因工程 细胞系 19号染色体 Rab13-蛋白激酶A途径调节体外培养支持细胞屏障通透性的研究 被引量:2 2014年 目的:研究Rab13蛋白在支持细胞(SC)屏障功能调节中的作用。方法:体外分离培养大鼠睾丸SC,Western blotting检测Rab13的表达,免疫共沉淀检测Rab13与蛋白激酶A(PKA)催化亚基间的相互作用;睾酮处理建立SC体外屏障增强模型,Western blotting和放射自显影法分别检测Rab13的表达及PKA活性变化,并通过跨上皮电阻(TER)检测PKA活性对SC屏障功能的影响;小干扰RNA(siRNA)干扰Rab13表达,检测其对PKA活性及SC屏障功能的影响。结果:Rab13的表达随SC屏障的建立逐渐降低,且与PKA催化亚基间存在相互作用;睾酮处理可使Rab13的表达下降而PKA活性升高;Rab13 siRNA干扰可导致PKA活性升高,且SC屏障功能增强;抑制PKA活性可以拮抗睾酮或Rab13 siRNA对屏障功能的增强作用。结论:Rab13可通过调节PKA活性参与调节SC屏障通透性。 宿文辉 孟晓娜 吕孟竹大黄素甲醚对大鼠急性肝损伤的保护作用 被引量:11 2007年 目的探讨大黄有效成分大黄素甲醚对急性肝损伤的保护作用。方法以2ml/kg体质草四氯化碳(CCL4)灌服雄性wistar大鼠3d诱导急性肝损伤动物横型,观察大黄素甲醚对实验性肝损伤大鼠血清酶含量、血清肿瘤坏死因子(TNF)水平及肝组织病理学改变的影响。缩幂太黄寨甲醚组与模型组相比,血清酶学指标[ALT(U/L):(670.3±42,0)VS(917.1±78.0),AST(U/L);(1157,2±86.2)VS(2701.4±108.4)]及TNF水平明显降低[(1.6±0.3)μg/L vs (2.1±0.4)μg/L](均P〈0.05)。大黄零甲醚组肝组织病理改变较模型组明显减轻。结论大黄素甲醚对大鼠急性肝损伤具有保护作用。 张丽雁 宿文辉 熊瑛 王丹关键词:大黄素甲醚 肝损伤 肿瘤坏死因子 胰岛素在小鼠受精卵早期发育中的作用 被引量:1 2008年 大量研究已经证实生长因子和激素在胚胎早期发育的细胞增殖与分化过程中起着重要的作用.应用定量ELISA,RT-PCR,免疫印迹和免疫荧光的方法检测胰岛素在小鼠受精卵和卵母细胞中的表达和定位.发现胰岛素均匀分布在卵细胞的胞浆中.同时也检测到mTOR(mammalian target of rapamycin)和p70S6K的表达、活性和定位.在小鼠受精卵中mTOR和p70S6K的表达没有明显不同.二者在G1,G2和M期分布在细胞浆,在S期聚集在原核的周围.在不同时期,mTOR的活性是波动的.利用PI3K的特异性抑制剂渥曼青霉素,观察到卵裂率明显减低.当使用mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素时,受精卵的第一次有丝分裂延迟.这些结果表明胰岛素存在于小鼠的卵母细胞和受精卵中,并且胰岛素可能通过激活PI3K/PKB/mTOR/S6K的信号传导通路在小鼠的早期胚胎发育中发挥功能作用. 于秉治 张哲 邓欣 徐小燕 冯晨 李延笑 崔城 宿文辉 赵鸿梅 于大海关键词:小鼠 胚胎 胰岛素 MTOR 生命初期的探索——从生殖细胞到子宫内膜微环境 2023年 中国共产党第十八届中央委员会第五次全体会议提出,坚持计划生育的基本国策,完善人口发展战略,“全面实施一对夫妇可生育两个孩子政策”。全面二胎政策的放开,不仅有利于国家发展,也有利于更好满足群众的生育意愿,促进家庭幸福和社会和谐。随着该项政策的提出,生殖医学界在迎来发展机遇的同时也面临着巨大挑战。 蒋术一 宿文辉关键词:人口发展战略 家庭幸福 生育意愿 基本国策 生殖细胞 RNA N6-甲基腺苷(m6A)修饰相关酶在哺乳动物精子发生中的研究进展 2023年 N6-甲基腺苷(m6A)核酸修饰是近10年来研究较多的一类表观修饰,RNA通过经典m6A修饰蛋白“Writers”(METTL3/14/WTAP等)、m6A去修饰蛋白“Erasers”(FTO和ALKBH5)和m6A识别蛋白“Readers”(YTHDC1/2、YTHDF1/2/3等)组成的协同调节体系进行转录后核酸m6A修饰、去修饰和识别结合,进而调控转录本下游命运。精子发生是雄性哺乳动物性成熟和维持生育能力的重要过程,涉及生精上皮支持细胞、间质细胞和精原细胞等增殖分化和维持生精微环境过程。多项研究表明m6A调节体系参与哺乳动物精子发生进程,异常的m6A修饰水平和m6A调节体系失衡均会导致睾丸发育异常、精子发生异常和雄性不育。本文综述了精子发生过程中m6A修饰相关酶的作用,深入分析m6A差异修饰转录本之于正常精子发生的作用,对认知哺乳动物精子发生和解析临床生精障碍的分子机制具有重要意义。 张强 宿文辉关键词:精子发生 支持细胞 间质细胞 生精细胞 Ⅳ型胶原蛋白NC1片段在精子发生及血睾屏障中作用的研究进展 2023年 在哺乳动物睾丸中,位于生精上皮基底膜附近的血睾屏障(blood-testis barrier,BTB)对精子发生至关重要。BTB由相邻的支持细胞(Sertoli细胞)连接而成,将生精上皮分为靠近基底膜的“基底室”和靠近生精小管管腔的“近腔室”,为精子发生提供了免疫屏障。Ⅳ型胶原蛋白是基底膜的重要组成成分,啮齿类动物的睾丸中Ⅳ型胶原蛋白主要是由3条α3链组成的三螺旋结构。大鼠睾丸的Ⅳ型胶原蛋白α3链C端可以水解成大小为28 ku的蛋白片段,称为C端非胶原结构域(noncollagenous domain-peptide,NC1片段)。NC1片段作为一种基底膜源性多肽在参与精子发生与维系BTB功能方面发挥了重要作用。本文通过分析、总结近期研究结果,概述Ⅳ型胶原蛋白NC1片段在睾丸中的作用及其机制,尤其是其在精子发生与BTB中作用的研究进展。 蒋术一 宿文辉关键词:精子发生 睾酮通过抑制Rab13表达影响支持细胞屏障通透性 被引量:2 2014年 探讨Rab13 GTPase对血睾屏障(blood testis barrier,BTB)通透性的调节机制。体外分离培养20 d龄大鼠睾丸支持细胞,睾酮处理后测定跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TER),FITC-鬼笔环肽染色分析F-actin分布,并采用Western印迹检测Rab13在睾酮处理前后的表达变化;si RNA干扰培养支持细胞中Rab13的表达,Western印迹检测沉默效果并检测连接蛋白表达变化;TER测定Rab13沉默前后上皮屏障功能改变,F-actin染色分析Rab13沉默对肌动蛋白丝分布的影响。结果显示,睾酮处理可使体外支持细胞屏障TER值升高,F-actin在膜下聚集增强,且Rab13在睾酮处理后表达量明显降低;Rab13 si RNA处理不影响连接蛋白质的表达,但可引起F-actin在细胞连接处的分布增强,导致体外BTB屏障功能增强。表明Rab13可通过调节F-actin的排布影响体外BTB通透性。 宿文辉 孟晓娜 贾晓宇关键词:血睾屏障 支持细胞