常亮
- 作品数：14 被引量：50H指数：4
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学交通运输工程轻工技术与工程更多>>
- 实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌方法的试验研究被引量：14
- 2010年
- 目的建立金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR的快速检测方法,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据金黄色葡萄球菌femB基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色葡萄球菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌的方法。结果成功构建了金黄色葡萄球菌重组质粒标准品和金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR方法;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性试验,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;将模拟标本与分离培养对比,两者符合率为100%。结论金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为金黄色葡萄球菌感染诊断及食源性金黄色葡萄球菌污染的快速检测提供依据,可用于临床感染诊断及食品卫生监管、商品检验检疫等。
- 苏明权杨柳马越云常亮肖凤静郝晓柯
- 关键词：聚合酶链反应葡萄球菌感染
- 荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌方法的建立被引量：11
- 2011年
- 目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。
- 杨柳苏明权马越云焦刚常亮肖凤静李明彭年才郝晓柯
- 关键词：沙门氏菌实时荧光定量PCR
- CREB及p-CREB在前列腺癌细胞增殖中的作用被引量：6
- 2016年
- 目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用。方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CREB的表达水平;免疫荧光及Western blotting检测人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap中CREB及p-CREB的表达水平;构建重组人源CREB质粒,并转染PC3及LNCap细胞,Western blotting及CCK-8试剂盒检测转染效率及细胞增殖水平的变化。结果:CREB及p-CREB在前列腺癌组织中表达率明显高于正常前列腺(96%vs 50%,88%vs 40%,P<0.05)和前列腺增生组织(96%vs 80%,88%vs 60%,P<0.05);CREB及p-CREB蛋白水平在前列腺癌PC3及LNCap细胞中表达量显著高于正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1[PC3细胞:(5.10±0.62)vs(2.31±0.40)、(4.31±0.54)vs(2.02±0.38);LNCap细胞:(7.5±0.83)vs(2.31±0.40)、(6.15±0.69)vs(2.02±0.38),均P<0.05)];转染重组质粒CREB可上调前列腺癌细胞PC3及LNCap中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达(均P<0.05),且转染后的PC3及LNCap细胞增殖水平明显增加(P<0.05)。结论:CREB及p-CREB在前列腺癌组织、体外培养前列腺癌细胞PC3及LNCap中高表达,并可上调PC3及LNCap中增殖相关基因PCNA的表达,提高细胞增殖水平。
- 唐海斌马越云苏明权李蕊常亮高萌付晓蕊杨玉琪郝晓柯
- 关键词：前列腺癌增殖
- 实时荧光定量PCR检测阪崎肠杆菌方法的建立和应用
- 目的建立阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR检测方法,探讨在阪崎肠杆菌感染诊断以及食源性污染监测中的应用。方法采用阪崎肠杆菌全基因序列设计特异引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测阪崎肠杆菌的诊断方法,以基因重组方法构建重组质粒...
- 杨柳苏明权马越云常亮肖凤静郝晓柯
- 文献传递
- PCR-反向点杂交法对丙型肝炎病毒基因型别的研究
- 李金洁杨柳常亮李蕊李艳华王娟苏明权马越云郝晓柯
- PCR-反向点杂交法对陕西地区丙型肝炎病毒基因型别的研究
- 李金洁杨柳常亮李蕊李艳华王娟杨静李宏伟马越云郝晓柯
- 全国首例子宫移植者术后淋巴细胞亚群变化
- 李蕊杨柳李金洁常亮杨静王娟苏明权马越云郝晓柯
- 实时荧光定量PCR检测阪崎肠杆菌方法的建立和应用
- 杨柳苏明权马越云常亮肖凤静郝晓柯
- 结核分枝杆菌肝素结合血凝素对巨噬细胞极化的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝素（HBHA）对小鼠骨髓来源巨噬细胞和小鼠巨噬细胞系Raw264．7细胞极化的影响。方法在应用免疫荧光法确认HBHA进入巨噬细胞的基础上，对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）和Raw264．7细胞分别施加LPs（100ng/m1）＋IFN-γ（2．5ng／ml）、IL4（20ng/m1）、不同浓度的HBHA（1μg/ml，3μg／ml，6μg／ml，10μg/m1）和ESAT-6（5μg／m1）。以ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α。通过RT-PCR方法检测M1型极化分子标志诱导型一氧化氮合酶（iN0s）和TNF-α等，以及M2型极化分子标志精氨酸酶1（Arg-1）和CD206。最后westernb10t检测细胞iN0s和Arg-1蛋白表达水平。结果结核分枝杆菌HBHA处理BMDM细胞后，培养上清中IL-6、IL-12、TNF-α细胞因子分泌明显增加．iNOS和TNF-α基因表达升高；处理后的Raw264．7细胞中，IL-6分泌量增多，TNF-α表达上调，与EsAT-6对小鼠巨噬细胞的作用结果一致。HBHA和ESAT_6处理小鼠骨髓来源巨噬细胞不能增加M2极化分子标志Arg-1的蛋白表达，但都能诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞和Raw264．7细胞iN0s生成增加。结论结核分枝杆菌HBHA可诱导小鼠巨噬细胞向M1极化。
- 范琳琳郑青杨柳周磊李蕊常亮郝晓柯马越云
- 关键词：巨噬细胞极化肝素结合血凝素ESAT-6
- 实时荧光定量PCR检测志贺氏菌方法的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的建立志贺氏菌实时荧光定量PCR快速方法，探讨在志贺氏菌感染检测和食源性污染监测中的应用价值。方法根据志贺氏菌ipaH基因设计引物和探针，建立实时荧光定量PCR检测志贺氏菌的诊断方法；通过特异度、敏感度、稳定性和重复性，以验证方法的可行性。结果成功构建了志贺氏菌重组质粒标准品，为方法学建立奠定基础；通过特异度、敏感度、稳定性和重复性验证，结果表明具有较好的特异度，最低检测限为10^3 copies／ml，相当于100cfu／ml的菌细胞，并具有良好的稳定性和重复性。结论利用实时荧光定量PCR方法检测志贺氏菌，可直接用于临床粪便中沙门氏菌的快速检测，也可用于分离菌株的鉴定，以及食品、乳品等的检测．对志贺氏菌感染诊断，提高食（乳）品安全的卫生监督检测具有重要的意义。
- 苏明权杨柳马越云岳乔红常亮肖凤静郝晓柯
- 关键词：志贺氏菌实时荧光定量PCR
