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EST-SSR分子标记在水生动物遗传研究中的应用被引量：11: 2010年; 张琼刘小林李喜莲薛姝雯辛静静黄皓相建海; 关键词：水生动物遗传育种分子标记

ADIG诱导牛成肌细胞转分化及相关基因的表达分析被引量：4: 2016年; 旨在通过在牛成肌细胞中过表达ADIG基因,诱导成肌细胞向成脂转分化,探讨该牛脂肪分化转录因子ADIG基因在脂类代谢过程中的功能,为阐明牛脂肪细胞分化转录因子ADIG基因在牛脂肪组织生长发育过程中发挥的作用提供证据。本研究用AD-ADIG腺病毒原液诱导转分化初生荷斯坦牛的成肌细胞,并在诱导分化后第2、4、6、8、10、12、14天进行油红O染色观察诱导成脂情况,同时收集细胞提取总RNA,利用实时荧光定量PCR分别检测ADIG、PPARγ、C/EBPα、SREBPF1、FABP4、FAS、MyoD基因的表达量变化。实时荧光定量PCR检测结果表明,ADIG基因在第2、4、6、8、10、12、14天均有高水平表达,且随着诱导天数增加脂滴明显增多。成脂相关的基因PPARγ、SREBPF1和FAS在后期AD-ADIG组中表达量均高于空白组,成肌相关的基因MyoD相对表达量在初期就显著下降,且AD-ADIG组明显低于对照组。综合脂滴染色和相关基因表达量方面的研究结果,说明ADIG基因在诱导牛成肌细胞分化向成脂转分化过程中发挥着重要作用,而且牛成肌细胞有向脂肪细胞分化的倾向。; 梅楚刚张琼付常振刘扬姜碧杰成功昝林森

枯草芽孢杆菌BS224的16S rDNA序列测定及系统进化分析: 2010年; 利用细菌通用引物,通过PCR的方法,对菌株BS224的16S rDNA基因进行扩增,PCR产物经胶回收试剂盒纯化后测序,测序结果与GenBank上已登录的高同源16S rDNA序列进行比较,并构建系统进化树,结果BS224与Bacillus subtilisstrain ZHA9相似性最高,达到99.38%,与模式菌株Bacillus subtilisstrain 168的相似性也达到98.55%,结合其形态特征、培养特征、生理生化特性的分析结果,可以确定BS224属于枯草芽孢杆菌属。; 刘杰张琼房春红蔡文君; 关键词：RDNA 系统进化分析

凡纳滨对虾EST-SSR标记的筛选及遗传多态性检测被引量：4: 2011年; 为了研究我国海南地区某凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)繁育群体的种质资源多样性,选取14个比利时野生对虾的EST微卫星标记,以240个中国人工选育的凡纳滨对虾个体为研究对象,检测这些标记在该养殖群体遗传多样性评估中的可行性,结果表明,有7个引物可扩增出清晰条带,其中5个引物(CNM-MG 345,CNM-MG 390,CNM-MG 437,CNM-MG 444,CNM-MG 487)具有多态性,共获得12个等位基因,平均等位基因数为2.400 0±0.547 7,平均有效等位基因数为2.060 0±0.327 8,平均观察杂合度为0.533 3±0.233 1,平均期望杂合度为0.505 2±0.082 6,平均多态信息含量为0.4090±0.0862,表明筛选出来的5个EST微卫星标记可以用于海南地区凡纳滨对虾人工繁育品种的遗传多样性分析,研究群体的多态性差异比较显著,遗传多样性处于中度水平。对我国凡纳滨对虾养殖群体和比利时凡纳滨对虾野生群体的遗传差异性进行了探究。两个群体的遗传变异可能受到地理隔离及多代定向选育的影响。研究结果为凡纳滨对虾EST微卫星遗传多样性研究、对虾人工选育及种质利用提供了可靠的科学依据。; 张琼李喜莲薛淑雯刘小林黄皓相建海; 关键词：凡纳滨对虾 EST-SSR

褪黑素通过其受体MT1和MT2调控牛睾丸支持细胞发育与功能: 引言/目的褪黑素是一种吲哚类激素,在哺乳动物中主要通过其高亲和力G蛋白偶联受体MT1和MT2发挥广泛的生理学效应.目前已在多种动物睾丸中检测到褪黑素及其受体表达,且参与睾丸功能的调节,而关于褪黑素对牛睾丸支持细胞发育与...; 杨武才汤克琼付常振张琼昝林森

秦川牛ADIG基因重组腺病毒过表达载体的构建与病毒包装被引量：1: 2015年; 【目的】构建秦川牛ADIG基因的重组腺病毒载体,包装并扩繁病毒,为下一步研究该基因在脂肪细胞分化过程中的分子作用机制和相关信号通路奠定基础。【方法】根据NCBI收录的家牛ADIG基因(NM_001113720.1)mRNA序列设计引物,以秦川牛组织样提取的总RNA反转录而成的cDNA为模板,通过RT-PCR和PCR扩增获得目的基因,将其连接到pMD19-T Simple载体并测序。质粒提取纯化后通过BglⅡ与SalⅠ双酶切,然后胶回收酶切产物,将其连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack/CMV-ADIG。将pAdTrack/CMV-ADIG质粒用PmeⅠ酶切线性化,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAD-ADIG,并用PacⅠ酶切鉴定,提取质粒后转化大肠杆菌Top10进行扩繁。用PacⅠ酶切线性化pAD-ADIG载体并回收质粒大片段,转染293A细胞进行病毒包装,然后完成病毒扩繁和病毒滴度的测定。【结果】PCR扩增获得了399bp ADIG基因CDS区;成功构建了重组穿梭质粒pAdTrack/CMVADIG和重组腺病毒质粒pAD-ADIG。经检测,ADIG重组腺病毒包装成功,扩繁后得到了高滴度的腺病毒(1×108PFU/mL)。【结论】成功构建了秦川牛ADIG基因的重组腺病毒表达载体pAD-ADIG,完成了病毒包装和扩繁。; 张琼姜碧杰成功刘扬昝林森; 关键词：腺病毒同源重组

基于AFLP技术的凡纳滨对虾遗传多样性研究被引量：2: 2010年; 【目的】对凡纳滨对虾(Lito penaeus vannamei)人工繁育养殖群体进行遗传多样性评价,获得家系间和家系内的差异,为凡纳滨对虾遗传育种工作提供技术支持。【方法】采用AFLP分子标记技术,对抽查的凡纳滨对虾35个家系共计350个样品进行遗传多样性分析,统计多态性条带,应用Popgene Version 1.31、Arlequin Version 3.1、Mega 3.1软件,计算各家系的Shannon指数、遗传分化系数Fst及基因流Nm等遗传参数,采用UPGMA法,根据Nei’s遗传距离绘制家系间的聚类分析图。【结果】筛选的10对选择性引物共扩增出312个可用于分析的位点,其中多态性位点162个,占总标记数的51.92%;凡纳滨对虾各个家系的多态位点百分率和Shannon指数分别为12.50%～32.69%和0.0683～0.1817。所有家系中,有36.38%的变异存在于家系间,有63.62%的变异为家系内的遗传变异,遗传分化系数Fst为0.3638,基因流Nm为0.9372。【结论】凡纳滨对虾群体遗传多样性较为丰富,具备一定的选择潜力,在传代过程中已经形成了各自相对独立的遗传体系,可以根据亲缘关系,选择利用其中的个体作为育种材料。; 薛姝雯刘小林李喜莲张琼黄皓相建海; 关键词：凡纳滨对虾 AFLP

枯草芽孢杆菌溶血相关基因yqxC的表达及功能鉴定被引量：3: 2010年; 【目的】确定枯草芽孢杆菌溶血相关基因yqxC的功能。【方法】采用PCR方法,扩增枯草芽孢杆菌溶血相关基因yqxC,构建GST融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用含体积分数5%绵羊血的琼脂平板,检测可溶性融合蛋白GST-YqxC的溶血活性。此外,采用RT-PCR检测yqxC基因在枯草芽孢杆菌中的转录情况。【结果】获得的可溶性融合蛋白GST-YqxC,在绵羊血琼脂平板上显示出较强的溶血活力;通过RT-PCR,检测到yqxC基因可以在枯草芽孢杆菌中转录。【结论】枯草芽孢杆菌yqxC基因编码蛋白YqxC有较强的溶血活性,且能够发生转录,yqxC很可能是引起枯草芽孢杆菌溶血的基因之一。; 刘杰张琼房春红; 关键词：枯草芽孢杆菌

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张琼

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