曾凡一
- 作品数：83 被引量：111H指数：6
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 人羊水祖细胞的分离和基因修饰被引量：1
- 2014年
- 探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。
- 杨辰敏范书玥唐汇祥巩芷娟龚秀丽龚秀丽任兆瑞
- 关键词：血友病B人凝血因子IX基因治疗
- 动物乳腺生物反应器 一种神奇的制药方式
- 2018年
- 人吃五谷杂粮,难免会生病,因此我们的生活离不开医药产业。纵观人类药物发展的历史,经历了三个不同的发展阶段。最初是天然药物,主要是利用中草药或提取中草药中的活性成分加工成中成药,用于疾病的治疗和预防。在这方面,我国中草药为世界医药的发展做出了巨大贡献,拥有绝对的发言权。随着西方科技的发展,化学药物渐成主流,药物合成逐渐兴起,与第一代药物相比,其活性更高、更有效。现在我们广泛使用的各类抗生素大部分属于这一类药物。20世纪70年代重组DNA技术的飞速发展,诞生了基因工程药物。由于基因药物的高产值、高效率、高收益,给制药产业带来了一场革命,推动了整个医药产业的发展。
- 曾凡一薛燕
- 关键词：动物乳腺生物反应器重组DNA技术天然药物药方医药产业基因工程药物
- 如何高效制备生殖系传递的嵌合体小鼠被引量：1
- 2012年
- 目前,嵌合体技术已成为胚胎干细胞(ES细胞)和诱导多能性干细胞(iPS细胞)研究不可或缺的一部分,嵌合体小鼠模型主要用于基因功能、调控机制、致病机理等各方面的研究。要安全可靠地进行ES细胞和iPS细胞的各种应用性研究,首先需要验证细胞在体内向各种组织定向分化的能力,特别是生殖系传递的能力。而高效制备多能性干细胞生殖系传递的嵌合体小鼠,需要在分子水平、细胞水平、动物个体水平以及制备方法等各方面全面综合地分析考虑,才能达到实验设计的最优化。制备嵌合体小鼠主要有注射法和聚集法2种方法,各有利弊,在整个制备过程中,需要考虑不同发育阶段以及不同小鼠品系胚胎的分化潜能、选用远交系和杂交系的胚胎作为受体,同时要考虑ES细胞的遗传背景,选择低代次的远交系和杂交系的ES细胞或者iPS细胞,以及优选KSR培养体系。对于操作者,需根据实际情况,全方位地综合考虑,从而制定出合理的操作方案。
- 杨冠恒施皖生曾凡一
- 关键词：嵌合体
- 供体细胞-受体细胞线粒体DNA相容性对牛异亚种体细胞核移植效率的影响
- 体细胞核移植或称克隆技术已经广泛应用于生物医药的各个领域。在通常情况下,克隆是采用来源于同一物种或亚种的供体细胞与受体卵母细胞进行的,以不同物种或同一物种内不同亚种间来源的供体细胞和卵母细胞所进行的异种或异亚种克隆效率依...
- 颜昊严忠海马晴雯焦飞黄淑帧曾凡一曾溢滔
- 中国遗传学的春天——纪念中国遗传学会成立40周年被引量：1
- 2019年
- 中国遗传学会是1978年10月在南京成立的,40年后的今天我们又回到南京举行中国遗传学会第十次全国会员代表大会,回顾历史,缅怀先辈的丰功伟绩。值此机会,想谈谈中国遗传学。
- 曾凡一曾溢滔
- 关键词：遗传学会员代表
- 用KOSR优化山羊克隆胚的培养体系
- 2012年
- 体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山羊体细胞克隆重构胚胎的体外培养,并比较KOSR与FBS对重构胚的发育效率的影响。结果显示,KOSR组山羊重构胚培养体系的分裂率明显高于FBS组(80.67±0.63%.vs 49.02±4.85%,P<0.01),2组在重构胚重编程过程中的8细胞率具有显著差异(48.89±1.92%vs.28.59±3.13%,P<0.05);2组不同培养体系的受孕率也有明显不同(33.3%vs.10%,P<0.05)。研究结果表明,KOSR培养体系能有效提高山羊重构胚的发育效率,特别是有利于重构胚的早期重编程,为获得健康的转基因克隆山羊奠定了良好的基础。
- 陈威胡伟曹辉李凯王清泉蔡勤蔡琳琳刘宇习书斌李华陈美珏黄英黄淑帧曾凡一
- 关键词：重构胚重编程发育
- 一例囊性纤维化相关疾病的诊断与启示
- 2021年
- 目的对1例以慢性腹泻为主要临床表现的囊性纤维化相关疾病的男童患者进行基因诊断,探讨中国囊性纤维化确诊率低的原因。方法收集10岁患病男童的病史资料和临床表现,分析实验室检查和全外显子测序结果。结果患儿反复腹泻9年伴中度营养不良。腹部CT示胰腺萎缩。全外显子测序结果显示CFTR基因复合杂合变异,分别为已明确的致病性变异c.263T>G和未经报道的c.1514delA移码变异。结论依据囊性纤维化的诊断指南,本例患儿诊断为囊性纤维化相关疾病。该病例丰富了CFTR基因变异谱和表型谱的同时,也表明了中国人建立自有的CFTR基因变异和表型数据库的必要性。
- 王娟任兆瑞任兆瑞
- 关键词：CFTR基因基因变异表型
- 一种IBMI注射胎肝Ficoll分离单细胞悬液以重建造血的方法
- 本发明公开了一种IBMI注射胎肝Ficoll分离单细胞悬液以重建造血的方法。通过胎肝单细胞悬液制备，胎肝HSCs移植的操作步骤，本发明的方法能高效重建血液系统，造血安全、稳定、可靠，且能高质量地对地贫小鼠进行有效治疗，治...
- 曾凡一黄淑帧杨冠恒
- 文献传递
- 牛绝对端粒长度测定及DNA提取造成的影响
- 2023年
- 目的:端粒是真核生物染色体末端的一种高度保守的负责维持染色体稳定的特殊结构,其DNA序列长度即端粒长度,会随着年龄增长或疾病发生发展而逐渐缩短,检测端粒长度可以为评估机体衰老和健康状况提供参考,但目前缺乏测定微量牛DNA样本绝对端粒长度的方法;通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)实现微量牛DNA样本绝对端粒长度的测定并评估DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定结果的影响,为进行端粒长度研究时选择合适的DNA提取方法和端粒长度分析方法提供参考。方法:利用标准曲线对检测样本的端粒和内参Ct值进行转换,通过qPCR测定牛端粒长度绝对值;采用膜吸附法、苯酚-氯仿法和磁珠法3种方法分别提取相同样本的DNA,分别用端粒末端限制性片段(terminal restriction fragment,TRF)分析法和qPCR法分析端粒长度,比较不同DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定的影响。结果:(1)qPCR可以测定纳克级别DNA样本的绝对端粒长度,检测结果重复性良好,并且和“金标准”TRF测定结果的相关性良好。(2)不同方法提取的DNA用TRF分析法和qPCR法测定端粒长度时,结果有显著差异,其中磁珠法提取的DNA在用2种不同方法进行端粒长度测定时,测定结果的一致性最好。结论:qPCR法是较TRF分析法更加灵敏的端粒长度绝对值测定方法,适合微量DNA样本的测定,且方便快捷;DNA提取方法会影响端粒长度的测定结果,在测定时应统一样本的DNA提取方法,磁珠法是相对更优的选择。
- 鲍莉雯蔡勤周一叶许淼舒娟许淼舒娟李华曾凡一
- 关键词：端粒长度TRFDNA提取方法
- piggyBac转座子在哺乳动物中的应用被引量：1
- 2013年
- 转座子(transposon)是存在于生物体基因组中的可移动的DNA片段,能够影响基因的结构和功能,广泛存在于生物演化过程中。转座子通过切离和粘贴机制介导外源基因的插入,是研究基因功能,制备转基因动物及基因治疗的优良载体。目前在哺乳动物中转座活性较高且研究最多的是"睡美人"转座子和piggyBac(PB)转座子。前者是目前临床前基因治疗研究中使用最为广泛的转座子,但存在剂量抑制效应和转座效率低等缺陷。而PB转座子可克服剂量抑制效应,且转座高效,转基因载量大,因此在哺乳动物中的应用越来越广泛。作者就PB转座子的作用机制、影响因素及在哺乳动物中的应用现状等进行报道。
- 杨冠恒曾凡一
- 关键词：PIGGYBAC转座子转基因
