杨克恭
- 作品数：61 被引量：93H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 造血干细胞基因治疗研究进展被引量：3
- 2002年
- 近几年来,造血干细胞基因治疗在逆转录病毒载体,动物模型和临床试验等方面取得了明显进展。最近,国外采用该方法临床治疗两名SCID-X1患儿获得成功,这是基因治疗单基因疾病领域的一个重大里程碑。
- 张艳丽杨克恭陈松森
- 关键词：造血干细胞基因治疗逆转录病毒载体动物模型
- 一种新发现的基因表达调控机制——核糖开关被引量：5
- 2005年
- 最近发现 ,某些依赖代谢物调节的基因转录产物的 5′UTR存在特征性结构———核糖开关(riboswitch) .核糖开关可以特异性结合代谢物 ,通过构象变化 ,在转录或翻译水平上调节基因表达 .核糖开关广泛存在于G+ 及G-细菌的代谢相关基因中 ,在真菌、植物中也有发现 .核糖开关调节维生素、氨基酸、核苷酸等基础代谢过程 ,其调节基因表达不需要任何蛋白因子作为中介 ,在进化上可能是RNA世界遗留的分子化石 .核糖开关可用于研究基因功能 ,开发新型药物及基因治疗 .
- 赵谨杨克恭张学
- 关键词：适体核糖开关基因表达调控
- 轻型β地中海贫血的分子基础及临床分析
- 1995年
- 本文对广西３７例轻型β地中海贫血（β地贫杂合子）用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和特异性寡核苷酸（ＡＳＯ）探针斑点杂交技术研究其基因突变类型，有５种类型突变。编码子４１－４２框架位移发生率最高，占５１．３％，有２例未查明原因。
- 黄有文王荣新查丹玉陈松森杨克恭
- 关键词：Β地中海贫血轻型分子基础基因突变类型ASO寡核苷酸
- 人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系
- 2008年
- 目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coliBL21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。
- 罗丝杨克恭刘长征邓艳春苏林孔燕陈松森
- 关键词：趋化活性
- 人造血增效因子在大肠杆菌中的表达及其生物学作用被引量：3
- 2004年
- 目的 研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法 应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果 测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?
- 齐春梅杨克恭陈松森张艳丽邓艳春苏林王亚栋罗丝刘长征罗庆良熊国林
- 关键词：恒河猴CFU-GMCD34^+细胞人造血E.COLI重叠PCR
- 中药治疗儿童β地中海贫血16例被引量：5
- 1995年
- 中药治疗儿童β地中海贫血１８例中国人民解放军第３０３医院（５３００２１）黄有文，王荣新，查丹玉中国中医研究院广安门医院吴志奎，姜葆华，刘凤云我们使用中药补肾生血药治疗儿童β地中海贫血１６例，现报道如下。材料和方法一、一般资料男１０例，女６例，年龄５～...
- 黄有文王荣新查丹玉杨克恭陈松森
- 关键词：地中海贫血儿童中医药疗法
- Humanin——一种新的神经保护性肽
- 2004年
- Humanin(HN)是一种新近发现的神经保护性多肽 ,能够特异且有效地阻断由家族性阿尔茨海默病 (FAD)基因和 β淀粉样肽 (Aβ)引起的细胞死亡。其作用机制可能是HN通过特异地阻断某些细胞死亡的信号通路来起到对细胞的保护作用。这些研究结果为抗阿尔茨海默病 (AD)药物的研发提供了非常有价值的信息。
- 郑亘杨克恭袁建刚
- 关键词：HUMANIN阿尔茨海默病Β淀粉样肽
- 血红蛋白纽约（Hb New York）的临床和实验研究被引量：2
- 1996年
- 在广西进行异常血红蛋白研究时普查６个民族共计１７７０３人，其中有１０个快速异常血红蛋白，全部进行了家系调查，共计４８个成员有与先证者相同的异常Ｈｂ，其电泳行为属于Ｋ组，Ｈｂ稳定性轻度降低，Ｈｂ化学结构分析证实为β链１１３位（Ｇ１５）的缬氨酸被谷氨酸所取代，除１例汉族外，其他９例的苗、毛南、侗、仫佬及京族中的ＨｂＮｅｗＹｏｒｋ是在上述民族中首先发现的变异体。
- 黄有文王荣新张尼佳陈松森杨克恭贾佩臣梁植权
- 关键词：异常血红蛋白
- 噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽被引量：1
- 2011年
- 目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。
- 苏林孔燕刘长征杨克恭陈松森
- 关键词：人干细胞因子模拟肽酶联免疫吸附测定法
- 人FL在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化和生物学活性测定被引量：2
- 2002年
- 建立人FL(humanflt3ligand ,hFL)在大肠杆菌中的高效表达系统 ,分离纯化重组hFL为其功能和应用研究打下基础。根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hFL基因膜外区DNA片段 ,由PCR方法获得的hFL基因膜外区DNA片段 ,经测序证明序列正确。构建表达载体pET30a Trx hFL并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,hFL融合蛋白的表达占菌体总蛋白的 6 0 %以上 ,并以包涵体形式存在。融合蛋白经离子交换层析、分子筛层析纯化 ,并用FXa切割 ,切割效率 >80 %。切割产物经亲和层析纯化。纯化产物进行Westernblot鉴定。纯化的rhFL(recombinanthFL)与GM CSF及TNFα联合作用 ,具有良好的刺激DC增殖活性 ,其增殖能力是GM CSF +TNFα的 2 5倍左右。本文以大肠杆菌为宿主 ,成功地表达了融合蛋白Trx hFL。经纯化的rhFL在体外与GM CSF及TNFα联合使用能有效地刺激人DC的增殖。
- 张友鸿周希亚陈松森娄可佳刘深基杨克恭何维
- 关键词：大肠杆菌FL纯化
