沈海英
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 检测水体日本血吸虫毛蚴PCR方法的建立
- 2010年
- 目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。
- 王廷安沈海英申云侠王文波王本敬梁幼生诸葛洪祥
- 关键词：日本血吸虫毛蚴PCR
- 弓形虫速殖子DNA提取及LAMP检测弓形虫的初步研究
- 目的:/(1/)探讨弓形虫速殖子体外培养、冻存和纯化的方法,为后续开展弓形虫的相关研究提供丰富而纯化的速殖子。/(2/)比较5种常用弓形虫速殖子DNA提取方法,为后续实验弓形虫速殖子DNA提取筛选高效简便的方法。/(3/...
- 沈海英
- 关键词：环介导等温扩增弓形虫DNA提取纯化
- 文献传递
- 5种方法提取弓形虫速殖子DNA的效果比较被引量：2
- 2010年
- 目的用5种方法提取弓形虫速殖子基因组DNA,比较其效果。方法分别以试剂盒法、直接裂解法、煮沸法、酚-氯仿法和盐析法提取10倍系列稀释的弓形虫速殖子DNA,通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR比较其效果。结果酚-氯仿法提取的DNA纯度最高,煮沸法、盐析法、直接裂解法和试剂盒法依次降低;琼脂糖凝胶电泳可检测出由直接裂解法、酚-氯仿法、盐析法提取1×106个速殖子的基因组DNA;试剂盒法、直接裂解法、煮沸法、酚-氯仿法、盐析法提取的DNA经PCR扩增可检测最少速殖子的数量依次为1×104,无目的条带,1×102,1×101,1×103个。结论酚-氯仿提取的DNA纯度高,用于PCR扩增具有较高的敏感性,但操作相对繁琐;煮沸法操作简单,与除酚-氯仿法外其他3种方法相比具有较高的敏感性。其它3种方法提取的DNA纯度不高,用于PCR扩增的效果不如前面2种。
- 沈海英王廷安周永华李冬娜申云侠诸葛洪祥
- 关键词：弓形虫速殖子DNA提取PCR电泳
- 刚地弓形虫速殖子与鼠星形胶质细胞体外共培养的实验观察被引量：5
- 2010年
- 原代培养星形胶质细胞,待其长至培养皿的80%时,将星形胶质细胞与弓形虫速殖子(细胞与虫体的比例为1∶10)共培养0～72h,吉氏染色观察星形胶质细胞和弓形虫速殖子的变化。共培养1h,此时定为0点,再培养0～48h,单磺酰戊二胺染色在荧光显微镜下观察星形胶质细胞内自噬囊泡的变化。结果发现共培养1h时,弓形虫速殖子开始进入星形胶质细胞,并出现荧光颗粒;8h星形胶质细胞内荧光颗粒最多;12h后显著减少,星形胶质细胞开始被破坏;48h星形胶质细胞内荧光颗粒消失;72h大部分星形胶质细胞已被涨破,留下大量增殖的弓形虫速殖子。说明自噬在弓形虫速殖子体外感染星形胶质细胞的过程中是受到抑制的。
- 李冬娜梁幼生周永华张焕相沈海英骆伟龚唯诸葛洪祥
- 关键词：星形胶质细胞弓形虫速殖子自噬
