白永恒
- 作品数：53 被引量：118H指数：7
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- 基于特定基因系统发生树与单核苷酸多态性分析技术进行多瘤病毒基因分型研究
- 洪炜龙林成成白永恒潘晓东王斯璐郑少玲杨亦荣陈必成
- 引物第3位引入突变的扩增阻滞法检测MDR1单核苷酸多态性
- 本发明公开了可用于对MDR1rs1045642与rs2032582单核苷酸多态性(SNPs)进行分型的一组引物、反应程序和聚合酶链反应(PCR)试剂盒。试剂盒包括：试剂A、试剂B、含引物的PCR反应管、单核苷酸多态分型用...
- 周蒙滔陈必成白永恒林成成梁勇郑建建张行刘乐平王斯璐谢洁雅洪炜龙
- 文献传递
- 浙南地区416名肾移植受者KIR基因多态性分析
- 【目的】分析浙江南部地区同种异体肾移植受者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性的分布情况。【方法】采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测浙江南部地区无血缘关系的416名汉族肾移植受者KIR基因型,...
- 吴琦白永恒陈必成潘晓东张岩杨云秀夏鹏郑少玲杨亦荣
- 同时检测人多瘤病毒和巨细胞病毒PCR技术的建立及在肾移植受者中的初步应用
- 目的建立同时检测人多瘤病毒(BKV)和巨细胞病毒(CMV)载量的实时定量荧光PCR技术(FQ-PCR),并探讨其在肾移植术后感染监测中的应用。方法选择BKV和CMV核酸保守性序列作为靶基因,PCR扩增靶片段与质粒pcDN...
- 夏鹏陈必成白永恒张岩陈文伟张行蔡勇郑少玲杨亦荣
- 关键词：巨细胞病毒多瘤病毒荧光定量PCR肾移植
- 文献传递
- 浙南地区416名肾移植受者KIR基因多态性分析
- 目的分析浙江南部地区同种异体肾移植受者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性的分布情况。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测浙江南部地区无血缘关系的416名汉族肾移植受者KIR基因型,并同其他...
- 吴琦白永恒陈必成潘晓东张岩杨云秀夏鹏郑少玲杨亦荣
- 关键词：肾移植多态性
- 文献传递
- 同时检测人多瘤病毒和巨细胞病毒PCR技术的建立及在肾移植受者中的初步应用被引量：2
- 2013年
- 建立同时检测人多瘤病毒(BKV)和巨细胞病毒(CMV)载量的实时定量荧光PCR技术(FQ-PCR),并探讨其在肾移植术后感染监测中的应用。选择BKV和CMV核酸保守性序列作为靶基因,PCR扩增靶片段与质粒pcD-NA3.1(+)连接。通过测序技术对进行克隆筛选。提取质粒并采用10倍梯度稀释(5×103～107拷贝/mL)作为BKV和CMV核酸序列的标准品,并评价其灵敏度;采用对比正常人DNA、BKV阳性质控和CMV阳性质控评价其特异性;通过对标准品DNA分别进行批内和批间各20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。对480例肾移植受者外周血样本,进行FQ-PCR检测BKV和CMV DNA拷贝数,检测FK506血药浓度,并对两者进行相关性分析。重组质粒经测序检测显示含有靶BKV和CMV核酸序列。所建立的FQ-PCR方法,其最低检测下限均为5.0×103拷贝/mL的DNA标准品。正常人DNA的BKV和CMV拷贝数检测为阴性,而阳性对照能够发现荧光值显著变化,证实为针对靶DNA的特异性扩增;重复性检测显示批内差异分别为3.44%(BKV)和2.23%(CMV),批间差异分别为4.98%(BKV)和3.76%(CMV)。肾移植患者CMV感染的阳性率为27.08%(130/480),明显高于BKV的阳性率(13.33%,64/480,P<0.05),并且感染程度与免疫抑制剂FK506用量呈正相关。建立的同时检测BKV和CMV两种病毒载量的FQ-PCR方法具有快速、重复性好、灵敏的优点,可为临床监测肾移植术后病毒感染提供技术平台。
- 张纯武陈孝倩白永恒潘晓东王斯璐蔡勇夏鹏吴存造陈必成
- 关键词：巨细胞病毒多瘤病毒荧光定量PCR肾移植
- 曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。
- 杨云秀胡孙宽叶星照白永恒王斯璐刘彪王本泉陈必成陈宗静
- 关键词：曲古抑菌素A胰腺癌NOTCH通路
- JNK通路参与曲古抑菌素A诱导的胰腺癌PANC-1细胞凋亡被引量：2
- 2013年
- 目的研究JNK通路在曲古抑菌素A(TSA)诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡过程中的激活情况,并探讨其机制。方法 PANC-1细胞经TSA 1.0μmol·L-1与JNK抑制剂(SP600125)20μmol·L-1单独或联合处理24h后,分别用CCK-8法和Hoechst33258染色法检测对PANC-1细胞的生长和细胞凋亡的作用;荧光定量PCR检测c-Jun,c-fos,Elk1,bax和bcl-2 mRNA表达;Western蛋白质印迹法检测p-c-Jun、p-JNK、bax、活性胱天蛋白酶8、bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达。结果 CCK-8结果显示,TSA单独处理,PANC-1细胞的存活率随着TSA浓度的增加而降低,并具有一定的量效关系(r=0.9564,P<0.05)。TSA+SP600125组细胞存活率较TSA单独处理明显增加(P<0.05)。Hoechst33258染色显示,正常对照组、TSA组和TSA+SP600125组凋亡率分别为(1.8±0.4)%,(6.2±1.4)%和(3.9±0.9)%,组间差异具有明显的统计学意义(P<0.05,24h)。与TSA组比较,TSA+SP600125组促凋亡基因bax以及JNK通路相关基因c-Jun和c-fos mRNA表达明显降低,Elk1mRNA表达降低,差异显著(P<0.05);而抗凋亡基因bcl-2mRNA表达明显升高(P<0.05)。TSA作用PANC-1细胞1h后激活JNK通路的相关蛋白c-Jun和JNK,并在2h达到最高峰。与TSA组比较,TSA+SP600125组bax及活性胱天蛋白酶8蛋白的表达明显降低(P<0.05),bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白的表达明显升高(P<0.05)。结论激活JNK通路是TSA诱导PANC细胞凋亡的重要机制之一,可能是通过影响线粒体凋亡途径发挥作用。
- 王本泉张玲黄雪陈宗静白永恒吴存造周蒙滔陈必成
- 关键词：胰腺癌曲古抑菌素AJNK通路细胞凋亡
- 维生素D受体基因型、单体型与乳腺癌发病风险的相关性研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨维生素D受体(VDR)基因型、单体型与乳腺癌发病风险关系。方法选取146例乳腺癌患者和320例非癌女性对照人群为研究对象,应用PCR-RFLP检测VDR基因rs1544410、rs7975232和rs731236点的多态性,采用ELISA检测血浆中1,25(OH)2D3含量,结果用SPSS 13.0软件进行分析。结果 3个位点中仅rs7975232基因型与乳腺癌发病相关。与纯合子GG相比,杂合子基因型TT具有较低的发病风险(P=0.001,OR=0.460,95%CI:0.286～0.740)。但不同的基因型之间1,25(OH)2D3含量并无差异。此外,单体型AGT在病例组分布频率为3.8%,显著高于对照组的分布频率(0.8%,P=0.002);而单体型GTT在病例组的分布则显著低于对照组(19.8%vs 26.7%,P=0.018)。结论 VDR基因与乳腺癌发病存在一定相关;携带单体型GTT的女性具有较低的患乳腺癌风险,而单体型AGT则发病风险较高。
- 黄友泽陆红白永恒陈以勒曾云祥潘贻飞
- 关键词：维生素D受体单体型基因型乳腺癌
- Sonic hedgehog信号通路在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达变化及意义被引量：10
- 2012年
- 目的:探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中的表达变化及意义。方法:将48只SD大鼠随机分为UUO模型组(n=24)和假手术组(n=24),梗阻术3、7和14 d后取其梗阻侧肾脏组织。用HE和Masson染色检测肾间质纤维化程度,免疫组织化学染色检测Shh通路分子Shh、Ptch1、Smo、Gli1及Ⅲ型胶原的蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肾组织中TGF-β1和Shh含量,real-time RT-PCR检测TGF-β1、I和Ⅲ型胶原及Shh通路分子mRNA表达。结果:HE和Masson染色显示,梗阻侧肾组织出现明显的纤维化病变,且随时间延长而加剧。TGF-β1、I和Ⅲ型胶原含量在梗阻肾中表达明显增高(P<0.05)。同时,Shh信号通路分子Shh、Smo和Gli mRNA和蛋白在梗阻肾中表达明显升高(P<0.05),而Ptch1 mRNA和蛋白的表达下调(P<0.01),提示Shh信号被激活。相关分析表明,Shh信号起始信号Shh水平的升高与TGF-β1含量增加呈明显的相关。结论:UUO大鼠诱导肾间质纤维化发生过程中,Shh信号通路分子被激活,推测可能的机制是活化的Shh信号通路诱导TGF-β1表达和释放,导致肾间质纤维化。
- 白永恒陆红周琴林成成梁勇洪炜龙郑少玲陈必成
- 关键词：HEDGEHOG单侧输尿管梗阻转化生长因子Β
