程剑松
- 作品数：13 被引量：5H指数：2
- 供职机构：南开大学更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 仿生内皮细胞功能的融合蛋白及其应用
- 本发明提供了一种仿生内皮细胞功能的融合蛋白及其应用，涉及生物活性物质技术领域。本发明提供了仿生内皮细胞的融合蛋白、重组表达载体、重组大肠杆菌以及在修饰心血管植入/介入材料中的应用。本发明将利用所述融合蛋白修饰心血管植入/...
- 赵强程剑松卫永禛王贺
- 一种低聚半乳的唾液酸衍生物及其合成方法
- 本发明公开了一种低聚半乳的唾液酸衍生物及其合成方法与应用，HMO是人乳中低聚糖中的主要成分。本方法利用低聚半乳糖GOS和唾液酸（N-Acetylneuraminicacid，Sia）通过CMP-Sia合成酶和唾液酸转移酶...
- 程剑松王鹏王园明
- 文献传递
- 利用原核表达系统一步法制备生物素标记蛋白质被引量：1
- 2014年
- 传统的蛋白质生物素标记多采用体外化学修饰法,涉及生物素和蛋白质的活化、透析和纯化等多种处理,该方法步骤繁琐,且对目的蛋白的损失较大。本实验利用原核共表达质粒pCDFDuet-1,将含有6个组氨酸标签的人己糖苷酶D(hexosaminidase D,HexD)的cDNA与生物素受体多肽(biotin acceptor peptide,BAP)DNA进行PCR拼接,连入pCDFDuet-1的多克隆位点1(multiple cloning site1,MCS1);将以大肠杆菌Trans5α基因组为模板克隆得到的生物素连接酶(biotin ligase,BirA)基因连入MCS2,构建重组质粒pCDFDuet-hexD-BAP-birA。初步验证后将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,利用0.1 mmol/L的IPTG和80μmol/L的生物素进行诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析和超滤对HexD进行纯化,SDS-PAGE检测分子量的大小(60 kDa)和纯度(90%以上)。以anti-HexD和链霉亲和素-HRP为抗体,Western blot检测发现,HexD-BAP表达正确,且被生物素标记;同时以4-MU-O-GalNAc为荧光底物,检测到生物素化标记HexD的糖苷酶活性为3.6 nmol/(min·μg),与未标记HexD的活性(3.06 nmol/(min·μg))相当。结果表明,可以利用BirA及其受体多肽,通过共表达质粒pCDFDuet-1,一步转化、表达和纯化,在大肠杆菌中进行外源蛋白的表达和生物素标记,且不改变目的蛋白的生物活性,可应用于免疫标记、互作蛋白的捕获等生物学研究。
- 谢小丽程剑松王晓敏梅香寒刘琳李静
- 关键词：原核表达生物素标记
- 仿生内皮细胞功能的融合蛋白及其应用
- 本发明提供了一种仿生内皮细胞功能的融合蛋白及其应用，涉及生物活性物质技术领域。本发明提供了仿生内皮细胞的融合蛋白、重组表达载体、重组大肠杆菌以及在修饰心血管植入/介入材料中的应用。本发明将利用所述融合蛋白修饰心血管植入/...
- 赵强程剑松卫永禛王贺
- 一种嗜热碱性α－淀粉酶及其编码基因
- 本发明涉及一种α－淀粉酶及其编码基因。该酶具有嗜热碱性，其最适反应温度约为60℃，最适反应pH值约为10，该酶能水解淀粉为相应的单糖和寡糖，在发酵、纺织、制药品食品加工等方面具有重要的应用价值。
- 冯露王磊刘雪倩程剑松任一
- 文献传递
- 大肠杆菌O11 O-抗原基因簇序列的破译及特异分子标识的鉴定被引量：3
- 2006年
- 大肠杆菌O11是一种可在人畜间交叉传染的强致病菌,具有潜在流行性爆发的危险。现完成了O11 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定了多种特异分子标识,并实现了对大肠杆菌O11的快速、灵敏和准确的分子分型检测。利用鸟枪法测定大肠杆菌O11 O-抗原基因簇的序列全长为14180bp,生物信息学方法分析序列结构,共发现12个基因:GDP-L型岩藻糖合成途径基因(gmd,fcl,gmm,manC,manB)、UDP-N乙酰葡萄糖C4异构酶基因(gne)、O-抗原转运酶基因(wzx)、O-抗原聚合酶基因(wzy)和4个糖基转移酶基因;用PCR方法筛选出2个针对大肠杆菌O11的特异基因和4对特异引物,并进行环境样品检测实验鉴定了该PCR检测方法的灵敏度;设计并筛选出8条针对大肠杆菌O11的特异探针。
- 王威彭霞王荃程剑松王磊
- 关键词：O-抗原基因簇分子分型特异基因
- 大肠杆菌O23 O-抗原基因簇序列的破译及UDP-N-乙酰葡萄糖-C4异构酶的鉴定被引量：2
- 2006年
- 采用鸟枪法破译大肠杆菌O23标准株的O-抗原基因簇序列,并用生物信息学的方法进行了基因注释和分析;采用基因缺失和互补的方法鉴定了O23的UDP-GlcNAc C4异构酶(Gne);用同源建模的方法构建了O23 Gne的高级结构并对其活性位点进行了分析;分析了不同血清型大肠杆菌O-抗原基因簇中gne基因的多样性;根据O23O-抗原基因簇中的特异基因筛选出了可用于大肠杆菌O23快速检测的特异DNA序列。
- 程剑松王威王荃高春绪王磊彭霞
- 关键词：大肠杆菌O-抗原基因簇基因缺失
- 参见罕见单糖合成的细菌基因的鉴定及其功能研究
- 冯露郭宏杰王颖徐艳丽程剑松王荃齐渊源
- 该课题通过破译两种O抗原基因簇，运用生物信息学的方法预测了三种罕见单糖的合成途径，并将这些罕见单糖合成基因克隆，在大肠杆菌中进行了高效表达和纯化。通过体外反应，运用毛细管电泳，高效液相色谱，质谱分析以及核磁鉴定等方法，对...
- 关键词：
- 大肠杆菌O138 O-抗原基因簇的破译及Gne的生物信息学鉴定被引量：1
- 2004年
- 利用鸟枪法对大肠杆菌E .coliO138O 抗原基因簇进行测序 ,序列全长 14 139bp ,用生物信息学的方法进行序列分析 ,共发现 11个基因 ,分别为鼠李糖合成酶基因 (rmlB ,rmlD ,rmlA ,rmlC)、UDP GalNAcA合成酶基因 (gne ,gna)、糖基转移酶基因 (3个 )、O 抗原转运酶基因 (wzx)和O 抗原聚合酶基因 (wzy)。发现一种稀有单糖UDP Gal NAcA的合成途径 ,对合成该糖的第一种酶Gne进行了生物信息学鉴定 。
- 孔庆科程剑松赵广王磊郭宏杰郭玺
- 关键词：O-抗原特异基因UDP-GLCNAC
- 大肠杆菌O141 O-抗原基因簇的破译及进化分析
- 2004年
- 对大肠杆菌O14 1O 抗原基因簇进行测序 ,序列全长 15 6 0 1bp ,用生物信息学的方法进行序列分析 ,共发现 12个基因 :鼠李糖合成酶基因 (rmlB ,rmlD ,rmlA ,rmlC)、甘露糖合成酶基因 (manB ,manC) ,糖基转移酶基因(orf 6 ,orf 7,orf 9,orf 10 )、O 抗原转运酶基因 (wzx)和O 抗原聚合酶基因 (wzy)。用PCR的方法筛选出了针对大肠杆菌O14 1的特异基因 ,可以用于基因芯片或PCR方法对大肠杆菌O14 1的快速检测。通过对大肠杆菌O14 1的O 抗原基因簇及甘露糖和鼠李糖合成酶基因的进化分析发现 :大肠杆菌O14 1O 抗原基因簇是低GC含量的片段 ,仅O 抗原特异的基因才出现在O 抗原基因簇 ;并且这些基因可能介导了O 抗原基因簇间的重组及以O14 1O
- 孔庆科郭宏杰赵广郭玺程剑松王磊
- 关键词：大肠杆菌O-抗原特异基因鼠李糖
