胡嘉欣 作品数:7 被引量:31 H指数:3 供职机构: 中国农业科学院特产研究所 更多>> 发文基金: 公益性行业(农业)科研专项 国家高技术研究发展计划 “十一五”国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
犬瘟热病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量:10 2012年 环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。对反应体系及条件优化,检测特异性、敏感性,扩增产物通过凝胶电泳、显色反应和浑浊度比较进行判定。试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高,操作简便、快速、便于观察,适用于门诊和现场检测。 胡嘉欣 温永俊 霍志云 师新川 杨博超 武华 高维凡关键词:犬瘟热病毒 N基因 牛传染性鼻气管炎病毒VP22基因的克隆及序列分析 被引量:1 2012年 为了研究牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)即Ⅰ型牛疱疹病毒(BoHV-1)VP22基因及其功能,试验采用设计的特异性引物通过PCR法对VP22基因进行扩增,并成功构建了VP22克隆载体,经序列测定后,用DNAStar软件对该序列和已发表的IBRV参考株、5型牛疱疹病毒(BoHV-5)、Ⅰ型人单纯疱疹病毒(HSV-1)、马立克病毒Ⅰ型(MDV-1)和伪狂犬病毒(PRV)的VP22基因序列及氨基酸序列进行比对分析。结果表明:分离自我国的BoHV-1与NCBI上发表的参考株的基因同源性为99.6%,氨基酸同源性为100%;4种疱疹病毒VP22的N端氨基酸相似性不高;BoHV-1和BoHV-5VP22基因和氨基酸序列同源性分别为81.9%和76.4%;BoHV-1 VP22基因的密码子偏嗜性较均一。 霍志云 胡嘉欣 童钦 高维凡 王炜 武华关键词:牛传染性鼻气管炎病毒 克隆 犬瘟热病毒研究概况 被引量:1 2012年 犬瘟热(CD)是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种急性、高度接触性传染病,流行范围广,发病率、致死率高,临床症状多样。CDV感染宿主广泛,所有日龄的犬都有可能感染。CDV属于副黏病毒科麻疹病毒属,有囊膜包裹的单股负链线性RNA病毒。CDV基因组编码6种蛋白:核衣壳(N)蛋白、磷(P)蛋白、基质膜(M)蛋白、融合(F)蛋白、血凝素(H)蛋白和大(L)蛋白。N、P和L蛋白与病毒复制有关;M蛋白与病毒的装配和出芽有关;F、H蛋白在病毒的侵染过程中起到关键作用。近年来,随着我国宠物业、毛皮经济养殖业的迅速发展,CD在我国的发病率有升高的趋势。论文对CDV分子生物学研究进展进行归纳总结。 胡嘉欣 温永俊 霍志云 武华 高维凡关键词:犬瘟热病毒 分子生物学 致病机理 高致病性PRRSVNsp2基因RNA干扰对病毒复制的影响 被引量:4 2012年 旨在构建针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株Nsp2基因的siRNA的表达载体,研究Nsp2基因的表达抑制对PRRSV复制的影响。设计并合成针对PRRSV TJ株Nsp2基因的3对优势小发卡RNA(shRNA),连接到pRNAT-U6.1/Neo,构建shRNA表达载体,将鉴定正确的载体质粒转染Marc-145细胞,6 h后接毒,每日观察CPE;在接毒PRRSV TJ株后不同时间点取上清样品,测定样品TCID50;并以β-actin为内参,RT-PCR对PRRSV Nsp2 mRNA进行半定量。结果表明,选取的3条Nsp2基因的优势siRNA均能够抑制PRRSV TJ株在Marc-145细胞上增殖,其中shRNA载体S-1和S-2抑制效果明显,与空载体相比较差异极显著。本研究构建的PRRSV Nsp2基因特异性shRNA载体能够有效抑制PRRSV的复制,可使病毒滴度TCID50最多降低103.38。 王凤雪 师新川 温永俊 胡嘉欣 刘准 武华关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 RNA干扰 Ⅰ型牛疱疹病毒潜伏感染机制研究进展 被引量:3 2012年 Ⅰ型牛疱疹病毒(BoHV-1)主要引起牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)、母牛传染性脓疱性外阴阴道炎(infectious pustular vulvovaginitis,IPV)、公牛传染性脓疱性龟头包皮炎(infectious pustular balanoposthitis,IPB)。病毒形成潜伏感染是病毒的生存策略,尽管机体对病毒感染能形成显著的免疫反应, 霍志云 胡嘉欣 童钦 高维凡 武华 王炜关键词:疱疹病毒 母牛 性外阴阴道炎 龟头包皮炎 传染性 貂源铜绿假单孢菌的分离鉴定及其致病性研究 被引量:1 2012年 为确定山东威海某养殖场发病水貂的病原菌,从发病水貂肺中分离并纯化细菌,根据其形态特征、培养特性、生化试验结果及PCR鉴定,确定其为铜绿假单孢菌。致病性试验中,将8.0×1010CFU/mL的菌液10倍系列稀释后,感染60日龄健康昆明系小鼠,半数致死量和最小致死量分别为1.4×107 CFU/mL和8.0×106 CFU/mL。剖检死亡小鼠可见皮下和肺出血,并能从死亡小鼠的肺中分离出与感染菌株形态特征完全一致的菌落。药敏试验结果显示,该分离菌株对庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星、头孢哌酮等较为敏感,而对青霉素、链霉素不敏感。系统发育分析结果表明,该分离菌株与从小麦中分离的铜绿假单孢菌的亲缘关系最近,据此怀疑该发病水貂有可能是食用了污染的饲料引起的。 孙见 谭斌 温永俊 张淑琴 胡嘉欣 师新川 武华关键词:铜绿假单孢菌 药敏试验 牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量:11 2012年 本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性检测的RT-LAMP方法。在Bst DNA聚合酶作用下,63℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物通过浑浊度比较、凝胶电泳和肉眼可视化进行判定。结果表明,该方法比RT-PCR敏感度更高,最低检出量可达0.069fg/μL。该方法可用于牛副流感病毒3型的实验室检测和临床初步诊断。 师新川 温永俊 王凤雪 胡嘉欣 杨博超 王炜 宋妮 程世鹏 武华关键词:N基因