胡威
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目徐州市科技计划项目江苏省“青蓝工程”资助基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- C端截断的HBX突变体通过上调DR4和DR5表达促TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡被引量：1
- 2016年
- 目的探讨不同的HBX截断突变体对TRAIL-R1（DR4）和TRAIL-R2（DR5）表达的影响,以及DR4和DR5在HBX截断突变体增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡中的作用。方法构建HBX的1~120 aa（C端截断）、51~120 aa（C端和N端共同截断）和51~155 aa（N端截断）的突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3;在HepG2和Huh-7肝癌细胞中,Real-time PCR和Western blot检测稳定转染HBX不同突变体的DR4和DR5的表达;Western blot检测RNA小干扰载体（DR4-siRNA和DR5-siRNA）的HBX突变体的DR4和DR5表达情况,流式细胞术检测TRAIL（200 ng/ml）诱导的肝癌细胞凋亡情况。结果经PCR扩增和双酶切鉴定,3种突变体表达载体HBX1、HBX2和HBX3重组质粒构建成功,测序检测目的基因序列正确;Real-time PCR和Western blot表明,HBX1能显著增加2种肝癌细胞系中的DR4和DR5基因和蛋白的表达;而HBX2和HBX3对DR4和DR5基因和蛋白的表达无显著影响;在Hep G2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞中,与对照组相比,DR4-siRNA和DR5-siRNA显著降低了DR4、DR5的表达;流式细胞术检测结果显示HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率较对照组细胞均显著提高;RNA小干扰抑制DR4和DR5的表达后,HepG2-HBX1和Huh-7-HBX1细胞的凋亡率下降。结论成功构建了3种不同HBX突变体的真核表达载体;HBX基因C端截断（1~120 aa）的突变体能够上调DR4和DR5的表达,且能够上调DR4和DR5的表达促进TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡。
- 胡威魏肖周凯孔凡运寇艳波房贤达李向阳尤红娟郑葵阳汤仁仙
- 关键词：肝癌细胞DR4DR5
- 人可溶性TRAIL蛋白表达及纯化条件优化
- 2014年
- 目的：优化人可溶性TRAIL蛋白生产菌发酵及纯化条件，从而提高TRAIL的产量及活性。方法①探索6种不同培养液、培养液pH值、异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导浓度及时间，选择最佳发酵条件；②联合镍离子亲和层析及超滤法纯化人可溶性TRAIL蛋白。结果①人可溶性TRAIL的最佳发酵条件为pH7．4的YPD培养液，所用IPTG的最佳浓度为0．2 mmol/L，最佳诱导时间为6 h；②经镍离子亲和层析和超滤联合作用可得纯度极高的蛋白。结论成功完成了人可溶性TRAIL发酵及纯化条件的优化，为今后大量提取TRAIL蛋白奠定了基础。
- 赵金金徐志辉胡磊罗文雅胡威尤红娟李向阳颜超郑葵阳汤仁仙
- 关键词：TRAIL原核表达纯化
- 人肝癌细胞LASP1启动子的克隆及其核心调控区域的初步鉴定
- 2016年
- 目的:克隆人肝癌细胞的LASP1基因的启动子区域并找出该基因启动子的核心调控区域。方法:提取肝癌Hep G2细胞总DNA,PCR扩增不同长度的LASP1启动子片段,克隆至PGL3-Basic载体中构建重组表达载体PGL3-P1(2059 bp)、PGL3-P2(1123bp)、PGL3-P3(909 bp)、PGL3-P4(574 bp)和PGL3-P5(159 bp),转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α中,提取质粒经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆并测序。将构建的重组表达载体、PGL3-Basic载体分别与内参质粒PRL-Tk共转染Hep G2细胞,48 h后经双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性。结果:PCR结果、双酶切结果以及DNA测序结果表明成功构建了LASP1启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与PGL3-Basic组相比,重组载体PGL3-P1、PGL3-P2、PGL3-P3、PGL3-P4均具有较强的启动子活性(P<0.01),其中,PGL3-P4的活性最强。结论:成功构建了人肝癌细胞不同截断长度的LASP1基因启动子荧光素酶报告基因载体,确定了LASP-1基因启动子的核心区域(-581 bp^-8 bp),为进一步研究LASP1基因在肝癌细胞中表达的关键调节因素及分子机制奠定了基础。
- 胡磊罗文雅胡威尤红娟孔凡运李向阳郑葵阳汤仁仙
- 关键词：启动子荧光素酶报告基因
