潘林鑫
- 作品数：23 被引量：20H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达
- 2014年
- 目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原核表达载体pGEX-5X-3-CLIC3,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白GST-CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3在COS7细胞质和细胞核中均有分布;Western blot结果显示CLIC3在HEK-293T细胞中能有效表达;考马斯亮蓝染色结果表明融合蛋白GST-CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BL21菌株均能有效表达,为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定的基础。
- 李春雨潘林鑫刘晓颖范礼斌
- 关键词：细胞定位蛋白表达
- 人RB1及其突变体的表达与定位被引量：6
- 2013年
- 目的研究人RB1及其缺失突变体蛋白在细胞内的表达与定位。方法以含人RB1全长cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法分别扩增出RB1全长及其三段缺失突变体序列,然后分别构建其表达载体,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞株中的表达与定位。结果成功构建了pCDNA3.1-FLAG-RB1及其缺失突变体的表达载体,Western blot法结果证明其在细胞中都能有效地表达,免疫荧光的结果显示了RB1主要分布在细胞核,但其缺失突变体在细胞质中也有分布。结论人RB1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在细胞核内,其缺失突变体在胞质中也有分布,这为进一步了解人RB1的功能提供了一定的基础。
- 潘林鑫李新颖徐南李克娟乔正耿慧武刘晓颖范礼斌
- 关键词：RB1转染基因表达细胞定位
- FKBP25缺失突变体在细胞中的表达与定位
- 2014年
- 目的研究FKBP25缺失突变体蛋白在细胞内的表达和定位。方法以人FKBP25全长cDNA序列的质粒为模板,PCR方法分别扩增出FKBP25缺失突变体序列,然后插入真核表达载体pcDNA3.1中,通过Western blot方法和免疫荧光方法检测其在细胞株中的表达和定位。结果成功构建了FKBP25缺失突变体的真核表达载体,经Western blot检测FKBP25缺失突变体在HEK 293T细胞中能够有效表达,免疫荧光显微镜结果显示FKBP25缺失突变体在COS7细胞中分布于细胞核和细胞质。结论 FKBP25缺失突变体在HEK 293T、COS7细胞中能够表达,为了解FKBP25缺失突变体的功能提供了一定基础。
- 张姗靖王蓓华龚芮潘林鑫耿慧武刘晓颖邓松华范礼斌
- 关键词：基因表达免疫荧光细胞定位
- MSI2对DHT诱导的KGN细胞增殖凋亡失衡的影响
- 2023年
- 目的探究Musashi-2(MSI2)过表达对二氢睾酮(DHT)诱导的人卵巢颗粒细胞系(KGN)细胞增殖和凋亡失衡的影响。方法对人卵巢颗粒细胞(GCs)原代培养进程中的基因表达谱进行统计分析,筛选其中的差异表达基因。构建pc DNA3.1-MSI2真核表达质粒,瞬时转染至KGN细胞中,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术检测MSI2的过表达效果。在DHT诱导的KGN细胞中过表达MSI2后,然后分别利用四唑盐(MTT)比色法和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)染色法检测各组细胞的增殖情况,并进一步利用流式细胞术(FCM)检测各组细胞的凋亡情况。结果MSI2的mRNA表达水平在人卵巢GCs原代培养过程中逐渐下降。成功构建pc DNA3.1-MSI2真核表达质粒,转染至KGN细胞中能够提高MSI2的mRNA和蛋白表达水平。MTT、Ed U和FCM结果显示与空白组相比,DHT诱导能够明显降低KGN细胞的增殖率,同时提高其凋亡率(P<0.05),而在MSI2过表达后,KGN细胞增殖率又有所提高,且凋亡率也有所降低(P<0.05),均接近于空白组。结论MSI2过表达能够有效缓解DHT诱导的KGN细胞增殖凋亡失衡现象,表明其在GCs生长和卵泡发育过程中发挥着重要作用。
- 杜悠雯石海涛韩帅龙张淑敏管超奇王田娟潘林鑫
- 关键词：二氢睾酮颗粒细胞细胞增殖细胞凋亡
- 一种过表达ZEB2基因质粒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种过表达ZEB2基因质粒，由ZEB2基因CDS序列与pEGFP‑C2真核表达载体的重组构建而成；其核苷酸如序列表SEQ ID NO:1，位于ZEB2基因的第134‑3778位；氨基酸序列如序列表SEQ ID...
- 张磊徐涛王啸潘林鑫丁琪汪洋
- 文献传递
- 人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究被引量：1
- 2016年
- 目的 研究人EB病毒诱导的基因3（EBI3）及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法 基于NCBI数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3.1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白（FN3）结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3.1-EBI3（1~135）-FLAG和pcDNA3.1-EBI3（125~230）-FLAG以及第210位天冬氨酸（Asp）点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3.1-EBI3-D210A-FLAG;Westernblot方法检测EBI3及其突变体在HEK293T细胞中的表达;免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在COS7细胞中的定位。结果 成功构建了下游携带FLAG标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒;Westernblot结果显示重组蛋白均能在HEK293T细胞中稳定表达;经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论 人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK293T、COS7细胞中成功表达;人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用;EBI3蛋白的第210位Asp的突变影响了其在细胞内的定位。
- 邢雪梅耿慧武潘林鑫刘泽宇姚亮邓欢欢刘晓颖范礼斌
- 关键词：质粒构建WESTERNBLOT免疫荧光
- RACK1突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位研究
- 2016年
- 目的根据活化蛋白激酶C受体1(RACK1)的蛋白结构,构建其缺失突变体的真核表达质粒,研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达及定位改变。方法根据RACK1蛋白的结构域特点,以pc DNA3.1-RACK1-FLAG为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG;Western blot检测上述重组质粒在HEK 293T细胞中的表达;免疫荧光技术检测RACK1的各缺失突变体在COS7细胞中的定位情况。结果成功构建了RACK1各缺失突变体的真核表达质粒;Western blot结果表明,除pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG外,其余缺失突变体在HEK 293T细胞中均有效表达;免疫荧光实验表明RACK1缺失突变体在COS7细胞中主要定位在胞质,细胞核中也有少量分布。结论成功构建了RACK1缺失突变体真核表达质粒,并在HEK 293T和COS7细胞中成功表达;在COS7细胞中不同缺失突变体的表达定位均有差异,与野生型的RACK1相比也有所不同,表明缺失不同的结构域后其在细胞中的定位表达也发生了改变。这为研究RACK1各结构域的功能提供了重要依据。
- 朱亮亮韩卢王蓓华耿慧武潘林鑫刘晓颖范礼斌
- 关键词：突变体质粒构建免疫荧光WESTERNBLOT
- 细胞内氯离子通道蛋白2的定位与表达被引量：1
- 2013年
- 目的研究细胞内氯离子通道蛋白2(CLIC2)在细胞中的定位与表达。方法以含人CLIC2全长cDNA序列的菌液为模板,PCR法构建CLIC2真核表达载体,利用免疫荧光和Western blot法检测其在细胞株中的定位与表达。结果细胞免疫荧光结果显示CLIC2在细胞质、细胞核中均有分布;Western blot的结果证明其在细胞中能有效地表达。结论 CLIC2蛋白在细胞质和细胞核中均大量分布,为进一步了解CLIC2的功能奠定了基础。
- 徐南潘林鑫耿慧武李春雨刘晓颖范礼斌
- 关键词：免疫荧光蛋白表达
- CLIC1及其点突变体与Sedlin蛋白的共定位研究被引量：1
- 2016年
- 目的构建胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)点突变体的真核表达质粒,进行CLIC1突变体的表达、定位及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)的共定位研究,为进一步揭示其功能奠定基础。方法以CLIC1全长c DNA序列为模板,构建3个真核表达质粒即pc DNA3.1-CLIC1(C24A)-FLAG、pc DNA3.1-CLIC1(C59A)-FLAG、pc DNA3.1-CLIC1(C24A-C59A)-FLAG;Western blot法检测CLIC1及其点突变体在HEK 293T细胞中的表达;免疫荧光技术了解CLIC1及其点突变体蛋白在COS7细胞中的定位及与Sedlin的共定位情况。结果成功构建了CLIC1点突变体的真核表达质粒;Western blot结果显示3个点突变体蛋白在HEK293T细胞中均能表达,突变体的分子量低于野生型的;免疫荧光实验表明CLIC1蛋白在细胞质和细胞核都有表达,但主要在细胞核。CLIC1点突变体蛋白定位在胞质中,细胞核中无分布,与Sedlin蛋白在胞质存在共定位。结论CLIC1的3种点突变体均能在哺乳动物细胞中有效表达;CLIC1及其点突变体与Sedlin蛋白均存在共定位,提示两种蛋白之间可能存在相互作用。
- 沙启飞潘林鑫耿慧武王梦媛印叶盛李子剑刘晓颖范礼斌
- 关键词：质粒构建免疫荧光WESTERNBLOT
- 肌营养不良蛋白及其衍生物的表达与定位的研究被引量：3
- 2015年
- 目的研究肌营养不良蛋白(DG)及其衍生物α-DG、β-DG在真核细胞内的表达与定位。方法构建pcDNA3.1-DAG1-FLAG、pcDNA3.1-DAG1α-FLAG和pcDNA3.1-DAG1β-FLAG 3个真核表达质粒,并分别转染至HEK 293T细胞中;提取总蛋白,Western blot检测表达情况;分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察细胞定位情况。结果成功构建了带有DAG1、DAG1α、DAG1β基因的真核表达载体,且在HEK 293T细胞中都能有效表达,在COS7细胞中主要分布于细胞质。结论DG及其衍生物α-DG、β-DG在HEK293T、COS7细胞中均有表达,主要分布在细胞质内,为进一步了解DAG1的功能提供了细胞学基础。
- 钱成王蓓华徐雪琴潘林鑫李新颖刘晓颖范礼斌
- 关键词：转染基因表达
