詹媛
- 作品数：36 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 鸡高迁移率蛋白1双抗体夹心ELISA方法的建立
- 2018年
- 为建立鸡高迁移率族蛋白1(chHMGB1)蛋白酶联免疫定量分析方法,本研究原核表达重组ch HMGB1蛋白(rchHMGB1)。以纯化的rchHMGB1作为免疫原分别免疫BABL/c小鼠和新西兰大白兔以分别制备针对rchHMGB1的鼠单克隆抗体(MAb)和兔多克隆抗体(PAb),并对兔PAb进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以鼠抗rchHMGB1 MAb做为包被抗体,HRP标记兔PAb为检测抗体,建立了定量测定rchHMGB1的双抗体夹心ELISA方法。对该方法进行了特异性、检测限和稳定性等试验。结果显示,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为1∶500稀释,抗原浓度在72.5 ng/mL^75μg/mL范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.99。该方法可以特异性检测rchHMGB1,最低检测限为36.25 ng/mL,连续6 d检测抗原绘制的标准曲线稳定性良好。本实验建立的rchHMGB1双抗体夹心ELISA方法,灵敏度较高,重复性好,为进一步研究chHMGB1在疾病感染过程中发挥的病理学机制奠定基础。
- 曲昱蓉詹媛仇旭升丁铲
- 关键词：单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究被引量：2
- 2015年
- 为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。
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- 关键词：新城疫病毒EIF4E
- 新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究
- 引言新城疫(NewcastleDisease,ND)是由新城疫病毒(NDV)强毒株引起的一种急性、烈性、高度接触传染性禽传染病,严重危害世界养禽业的健康发展。目前已有报道表明,NDV感染可以激活Akt、mTOR以及p70...
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- 文献传递
- 新城疫病毒M基因片段的表达纯化及其多克隆抗体的制备
- 2017年
- M蛋白是新城疫病毒(NDV)的一个多功能结构蛋白。为了制备针对M蛋白的多克隆抗体,本研究通过克隆M蛋白部分基因片段至原核表达载体,重组蛋白在大肠杆菌中表达后进行了纯化。免疫新西兰大白兔获得血清并纯化后得到抗M蛋白多克隆抗体。Western-blot分析结果显示,该抗体具有良好的特异性。本试验成功制备的抗M蛋白多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了良好的基础。
- 曲永星王新詹媛茅翔丁铲唐兆新
- 关键词：新城疫病毒原核表达M蛋白多克隆抗体
- ClassⅠ新城疫病毒强毒株融合蛋白的表达时相分析被引量：1
- 2010年
- 根据ClassⅠ新城疫病毒分离株9a5b编码序列,设计特异性引物扩增融合蛋白(F)基因截短片段(199～1 500 nt),利用原核表达获得重组蛋白,切胶免疫Balb/c小鼠,制备特异性多抗血清,利用制得的血清进行F蛋白表达时相分析。结果表明:NDV 9a5b病毒按5M.O.I(multiplicity of infection,多重感染复数)感染量接种DF1单层细胞,经IFA检测,在感染6 h时,F蛋白开始出现,主要分布于细胞浆内;12～16 h胞浆中的F蛋白含量逐渐增多,形成包涵体,开始在细胞膜上分布;当病毒感染24h后,F蛋白在细胞膜上形成明显的膜周染色;至感染36h后,出现多个细胞融合的包涵体,细胞已基本崩解。此时,F蛋白也散在分布于包涵体中。这为深入开展F蛋白与该病毒的毒力演化机制研究工作奠定了基础。
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- 关键词：CLASSI融合蛋白
- 新城疫classI强毒株9a5b-D5C1的拯救
- 新城疫（Newcastle Disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,严重危害世界养禽业,已造成了巨大的经济损失。目前已报道的大...
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- 关键词：新城疫病毒
- 文献传递
- 新城疫病毒CLASS Ⅰ强毒株磷蛋白的表达及细胞内定位
- 根据Class Ⅰ新城疫病毒分离株9a Sb编码序列设计特异性引物扩增P基因，原核表达后利用纯化的蛋白免疫Balb／c小鼠制备单克隆抗体，经二次亚克隆后筛选到4株针对P蛋白的单克隆抗体，利用所得单抗进行P蛋白在细胞内定位...
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- 关键词：新城疫病毒磷蛋白细胞内定位蛋白表达
- 新城疫病毒CLASSI强毒株磷蛋白的表达及细胞内定位
- 根据ClassI新城疫病毒分离株9a5b编码序列设计特异性引物扩增P基因,原核表达后利用纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体,经二次亚克隆后筛选到4株针对P蛋白的单克隆抗体,利用所得单抗进行P蛋白在细胞内定位分析...
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- 关键词：新城疫病毒磷蛋白细胞内定位
- 文献传递
- DF-1细胞中泛素-蛋白酶体系统对新城疫病毒复制的影响
- 2017年
- 为研究DF-1细胞的泛素-蛋白酶体系统(UPS)是否参与新城疫病毒(NDV)在细胞中复制的过程。使用Western-blot检测感染NDV Herts/33毒株的细胞样品以判断细胞内泛素化蛋白水平的变化,并检测NDV感染对细胞26S蛋白酶体水解活性的影响。检测泛素-蛋白酶体系统抑制剂对NDV感染后细胞上清中病毒滴度的影响,以及抑制剂MG-132对NDV在细胞中生长状况的影响。结果显示,虽然感染NDV后DF-1细胞内泛素化蛋白水平并未发生明显变化,但26S蛋白酶体的活性显著升高;使用泛素-蛋白酶体系统抑制剂可以抑制NDV在DF-1细胞中的复制。本研究结果证明DF-1细胞内泛素-蛋白酶体系统参与了NDV在DF-1细胞中的复制过程。
- 曲昱蓉詹媛仇旭升谭磊孙英杰宋翠萍孟春丁铲
- 关键词：新城疫病毒泛素-蛋白酶体系统抑制剂
- 新城疫病毒感染过程中基质蛋白的动态分布被引量：2
- 2011年
- 本研究利用原核表达产物制备的多抗血清进行M蛋白在细胞内的定位分析,NDV 9a5b病毒按5个感染复数（m.o.i）感染量接种DF1单层细胞,当PI=6 h时,M蛋白主要分布于细胞浆内,并未到达细胞膜内侧;到PI=8 h时,粗面内质网周围的M蛋白逐渐增多;PI=12 h时,M蛋白已开始聚集于细胞膜的内侧,而当感染后16 h开始形成合胞体时,M蛋白在细胞膜内侧形成明显的斑点状聚集;当感染至24 h时,逐渐出现5~10个细胞膜融合的包涵体,M蛋白存在于包涵体融合膜的内层,且荧光强度已逐渐减弱。这为深入开展M蛋白与病毒增殖、宿主相互作用机制的研究工作奠定了基础。
- 孙英杰陈鸿军詹媛于洋仇旭升宋翠萍于圣青丁铲
- 关键词：新城疫病毒基质蛋白
