詹峰
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。
- 詹峰曾晓燕张晓周顺徐言张建平焦永军
- 关键词：GDF15单克隆抗体HCC
- 结缔组织生长因子ELISA定量检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2011年
- 目的:建立定量检测人结缔组织生长因子(CTGF)双抗体夹心ELISA方法,并应用此方法检测人血清中CTGF含量。方法:利用简易过碘酸钠法对纯化的抗CTGF单克隆抗体(mAbs)进行HRP标记后,行抗体配对实验;通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度;以纯化的CTGF抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。用该方法初步对正常人、HBsAg阳性非肝癌患者及HBsAg阳性肝癌患者血清中的CTGF水平进行检测。结果:最佳配对组合为抗CTGFmAb3H5和HRP标记的抗CTGFmAb4C5,最适工作浓度分别为40μg/ml和1/4000,该方法的平均批内、批间变异系数分别为4.59%和5.70%,灵敏度达1.46 ng/ml,平均回收率为(98.73±4.84)%。用本方法测定35例HBsAg阳性肝癌患者、76例HBsAg阳性非肝癌患者和40例正常人血清CTGF水平,与正常对照组[2.65(2.16～3.18)ng/ml]比较,HBsAg阳性非肝癌组[5.53(2.74～8.23)ng/ml]和HBsAg阳性肝癌组[8.27(4.81±13.65)ng/ml]血清CTGF水平均显著升高(P<0.001);且HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阳性非肝癌组比较也明显升高(P=0.014)。结论:建立了一种可用于检测人CTGF的双抗体夹心ELISA方法。初步应用结果表明CTGF水平在HBsAg阳性肝癌患者血清中较HBsAg阳性非肝癌患者、正常人异常升高,提示CTGF分子有望成为HBsAg阳性肝癌早期预警标志物。
- 詹峰曾晓燕张晓徐言张建平焦永军
- 关键词：肝细胞性肝癌结缔组织生长因子ELISA标志物
- Ⅱ型志贺毒素单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的表达和功能鉴定
- 2010年
- 目的从分泌抗肠出血性大肠埃希菌Ⅱ型志贺毒素中和单克隆抗体杂交瘤细胞株S2C4中克隆抗体可变区基因，构建单链抗体（ScFv），进行原核表达，并对其功能进行鉴定。方法从杂交瘤细胞株S2C4中提取总RNA，逆转录成cDNA。在cDNA3’-OH末端添加poly．G。PCR扩增包括5’非翻译区和信号肽序列在内的抗体重、轻链可变区基因VH和VL,PCR产物装入T—A载体测序。根据测序结果，设计引物分别扩增VH和VL编码区，再通过重叠PCR，在VH和VL．编码区基因之间引入连接链，构建Scn基因，并克隆到表达载体pComb3xSS中。重组载体导入E．coliTop10F’进行表达，重组蛋白经纯化后，分别用ELISA和动物保护性实验鉴定其生物学活性。结果VH和VL编码区基因全长分别为396bp和378bp，ScFv基因能在大肠埃希菌中高效表达，表达产物的分子量为34000，用NiSO4亲和层析柱成功纯化。功能性实验表明纯化的重组蛋白可以与Stx2毒素有效结合，能保护动物抵御毒素分子的攻击。结论成功地克隆S2C4单抗可变区基因，并构建、表达其单链抗体ScFv，为下一步进行该抗体人源化奠定实验基础。
- 郭喜玲吴涛曾晓燕张晓陈银史智扬詹峰金秋焦永军
- 关键词：单克隆抗体单链抗体
- 抗GDF15单克隆抗体制备及功能鉴定
- 原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国第二大恶性致死肿瘤,其发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。肝癌的发病十分隐匿,导致发现晚,预后差。提高肝癌患者存活率的重要措施就是“早发现、早诊断、...
- 詹峰
- 关键词：GDF15单克隆抗体HCC免疫组化
- 上皮间质转化相关蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达鉴定及其小分子RNA表达谱的研究被引量：10
- 2011年
- 目的检测E-钙黏蛋白（E—cadhenn）和波形蛋白（vimentin）及其相应小分子RNA（miRNA）在原发性肝细胞肝癌（HCC）中的表达。方法免疫组织化学检测32例HCC组织中E-cadherin和vimentin的表达，分析其与临床病理资料的关系。应用miRNA芯片筛选HCC转移相关差异表达miRNAs。选取部分差异表达miRNAs以实时定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法进行验证，利用在线靶基因预测软件对其靶基因进行预测。结果E—cadhefin在转移、低分化／未分化、大于3cm组中的阳性表达率分别为25．0％（2／8）、35．7％（5／14）、52．9％（9／17），vimentin在上述三组的阳性表达率分别为87．5％（7／8）、71．4％（10／14）、52．9％（9／17）。E—cadhefin表达下调、vimentin表达上调与HCC分化（低分4L／未分化）和转移明显相关（P〈0．05），而与其大小无关。miRNA芯片筛选获得36个HCC转移相关miRNAs（8个上调，28个下调）。在E—cadhefin（-）／vim—entin（＋）转移HCC中，miR-21、miR-221的表达（2．22±1．79、2．36±1．05）明显高于E—cadhefin（＋）／vimentin（-）无转移HCC（4．35±1．90、3．90±1．23，P〈0．05）；miR-199a、miR-126的表达（4．424-0．61、3．62±0．54）明显低于E—cadhefin（＋）／vimentin（-）无转移HCC（2．43±0．85、2．54±1．10，P〈0．05）。结论E-cadhefin（-）／vimentin（＋）转移HCC与E-cadherin（＋）／vimentin（-）无转移HCC的miRNA明显差异表达，其中部分差异表达miRNAs可能通过调控上皮间质转化相关分子的表达参与HCC的转移。
- 周顺贾筱琴喻春钊詹峰冯振卿张建平
- 关键词：肝细胞小分子RNA实时定量PCR
- 胰腺神经内分泌肿瘤的非手术诊疗进展被引量：1
- 2023年
- 胰腺神经内分泌肿瘤(pNET)是一种较为罕见的、具有高度异质性的内分泌肿瘤,占胰腺恶性肿瘤的约9.9%。然而由于其早期症状隐匿,多数患者临床就诊时已出现远处转移。因此,早发现、早干预尤为重要。目前,手术切除依然是治愈pNET的唯一方式,传统治疗方式如放、化疗虽然可以有效杀伤肿瘤细胞提高患者生存期,但是其治疗效果始终不如人意。近年来,随着一些新治疗方式如靶向治疗、免疫治疗、表观遗传药物治疗等手段的出现,让许多无法手术且对传统治疗方法不敏感的患者从中获益。笔者围绕pNET近年诊断、非手术治疗方面的研究进展展开综述。
- 张梓桐詹峰
- 关键词：胰腺肿瘤
- STF-083010在硫代乙酰胺诱导的小鼠肝损伤中的作用研究
- 由毒素或药物引起的急性肝损伤是威胁患者生命的常见疾病。在西方国家，药物性肝损伤(Drug induced liver injury，DILI)是急性肝衰竭和肝脏移植的重要原因之一。内质网应激(endoplasmic re...
- 詹峰
- 关键词：急性肝损伤内质网应激氧化应激炎症反应
