赵冬梅
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达被引量：1
- 2012年
- 通过RT-PCR从斑点叉尾鮰肝脏中克隆编码hepcidin原前体肽的基因"pIH"。与参考序列相比,显示两个氨基酸残基的变异。通过对编码hepcidin原前体肽的基因添加EcoR I和HindⅢ酶切位点,选择含"trxA"融合头的pET32a(+)作为表达质粒、E.coliBL21(DE3)作为工程菌,成功构建"pET32a-pIH"原核表达系统。阳性克隆经1 mmol.L-1IPTG诱导、在37℃培养12 h后,表达的"trxA-pIH"融合蛋白70%以上可溶。Tricine-SDS-PAGE分析表明,细胞经超声破碎后的上清通过固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化后,可获得高纯度的目的蛋白。
- 赵冬梅陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰
- 斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达
- 参考已经报道的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus) hepcidin的全长cDNA序列，通过RT-PCR从斑点叉尾鮰肝脏中克隆了编码hepcidin原前体肽的基因"pIH".该基因编码...
- 赵冬梅陶妍
- 关键词：斑点叉尾鮰
- 一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术
- 本发明公开了一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术，包括构建融合表达载体pET32a-mCH、构建表达工程菌并发酵培养、融合蛋白TrxA-mCH的纯化、肠激酶处理融合蛋白TrxA-mCH以及目的肽...
- 陶妍赵冬梅
- 文献传递
- 斑点叉尾鮐(ICTALURUS PUNCTATUS)HEPCIDIN抗菌肽的基因工程制备
- 我国为世界水产大国,也是世界上唯一水产养殖产量高于捕捞产量的国家。然而,亟待解决的种质、病害与环境等关键问题日趋严重。由于细菌性感染和细菌性疾病呈上升趋势,为解决这些问题导致大量抗生素的使用,不仅破坏水产养殖动物体内的正...
- 赵冬梅
- 关键词：HEPCIDIN重组表达质粒活性鉴定
- 文献传递网络资源链接
- 基于SOE-PCR的两种鱼类hepcidin基因串联及其在毕赤酵母中的表达被引量：3
- 2015年
- Hepcidin抗菌肽是由生物肝脏细胞表达的一类具有抗菌作用和铁代谢调节功能的碱性小分子肽,它们在机体免疫系统中发挥了重要作用,被认为是抗生素的理想替代品。通过重组DNA表达技术制备抗菌肽无疑是一条良好的途径。为扩大hepcidin的抗菌谱和提高其表达量,通过SOE-PCR将斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus hepcidin成熟肽的c DNA"m CH"与尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus hepcidin成熟肽的c DNA"m TH"进行串联,并在两端分别添加Eco RⅠ和NotⅠ酶切位点,以p PIC9K为真核表达载体,成功构建了"p PIC9K-m CH-m TH"重组表达载体;电转化进毕赤酵母GS115中,经不同浓度G418和选择性培养基筛选以及对酵母基因组DNA的PCR鉴定,得到高拷贝酵母转化子;在30℃、以1%的甲醇诱导表达不同时间后,经Tricine-SDS-PAGE分析,表明发酵培养72 h时目的蛋白的表达量最高,达77 mg/L。发酵上清经SP-Sepharose阳离子交换层析纯化后获得高纯度的目的蛋白。抑菌实验显示含目的蛋白的发酵上清和经纯化后的重组目的蛋白对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌都有良好的抑菌效果。本研究结果为hepcidin抗菌肽的产业化生产奠定了良好的基础。
- 李文婧陶妍赵冬梅徐冰冰
- 关键词：抗菌肽毕赤酵母SOE-PCR
- 斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)hepcidin抗菌肽的基因工程制备
- 我国为世界水产大国,也是世界上唯一水产养殖产量高于捕捞产量的国家。然而,亟待解决的种质、病害与环境等关键问题日趋严重。由于细菌性感染和细菌性疾病呈上升趋势,为解决这些问题导致大量抗生素的使用,不仅破坏水产养殖动物体内的正...
- 赵冬梅
- 关键词：斑点叉尾鮰抗菌肽基因工程重组DNA技术
- 文献传递
