邵正
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
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- 十二指肠钩虫热休克蛋白HSP60基因的克隆及重组表达
- 2013年
- 目的克隆十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduHSP60蛋白。方法以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,PCR扩增AduHSP60基因。将获得的目的基因编码序列连接至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduHSP60。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达、Ni-NTA亲和层析分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达及纯化情况。结果成功扩增到AduHSP60全长编码序列,编码序列长度为1 701bp,编码566个氨基酸。构建了重组表达质粒pETHF/AduHSP60,经诱导表达、分离纯化获得了分子质量单位为60ku的可溶性重组AduHSP60蛋白。结论本研究从十二指肠钩虫中分离获得了HSP60基因,构建的pETHF/AduHSP60重组质粒能在大肠埃希菌中表达重组蛋白,为进一步研究AduHSP60的生物学功能奠定了基础。
- 许琴英邵正邓莉何庆丰彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫热休克蛋白60克隆原核表达
- SV40增强子对奶牛β-酪蛋白启动子活性的影响
- 2013年
- 该文采用重叠PCR方法在奶牛β-酪蛋白启动子(op0)中插入SV40增强子构建重组启动子op0-SV40enh,并分析其活性。首先PCR扩增op0 5′-端2.1 Kb片段、op0 3′-端1 Kb片段和SV40增强子序列,重叠PCR拼接三种片段得到插入SV40增强子的op0-SV40enh启动子并测序鉴定后,酶切连接将其插入pGL3-Basic中的指定克隆位点,构建重组载体pGL3-op0-SV40enh。将重组载体pGL3-op0和pGL3-op0-SV40enh分别瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子op0和op0-SV40enh的相对活性。结果显示,重叠PCR拼接出长度为3.4 Kb的片段,测序结果与预期结果一致,表明成功构建了重组载体pGL3-op0-SV40enh;op0-SV40enh启动子的活性远高于op0启动子的活性,表明奶牛β-酪蛋白启动子中插入SV40增强子序列可显著提高其引导荧光素酶报告基因表达的活性。
- 钟宇邵正江黎明
- 一种简便直观的实验动物血栓动态观察方法研究被引量：1
- 2015年
- 目的利用荧光素钠作为造影剂,建立一种简便、直观的大鼠血栓动态观察方法。方法 66只SD大鼠,雌雄各半,随机分为11组。3组大鼠经尾静脉分别注射荧光素钠2、1、0.5 mg/kg,确定合适荧光剂量;2组大鼠经尾静脉注射合适荧光素钠后,颈总动脉、下腔静脉连续照射1 h,观察荧光激发有无血栓形成;其余6组大鼠,分别为35%Fe Cl3诱导颈总动脉血栓模型组、下腔静脉血栓模型组、相应肝素钠组(520 U/kg)和假手术组。于荧光体视显微镜下观察记录血栓形成过程,并与血管称重和组织病理学观察结果相比较。结果 1 mg/kg剂量荧光钠用于实验效果较好。荧光连续激发1 h均没有引起明显的动静脉血栓形成。血栓模型组血栓形成呈时间依赖关系,而相应肝素钠组血栓明显减少,与血管称重和组织切片观察结果一致。结论荧光素钠作为造影剂,可用于实验动物血栓形成动态观察,并具有安全、简便、直观的优点。
- 司徒永立陈耀哲陈驹邵正邓莉彭礼飞
- 关键词：荧光素钠下腔静脉血栓肝素钠三氯化铁
- Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1的原核表达、纯化及活性研究被引量：7
- 2014年
- 目的:原核表达并制备重组蜱kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1,检测其抗凝血及抑制蛋白酶活性。方法:构建pET32a-sumo/IsKuI-1原核表达质粒,并转入到E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析,在层析柱上用SUMO蛋白酶切割融合伴侣,纯化后得到重组目的多肽rIsKu I-1。用PT及a PTT法检测重组目的多肽的抗凝活性,发色底物法检测rIsKuI-1对丝氨酸蛋白酶的抑制活性。结果:用原核表达系统获得了rIsKu I-1,其无延长PT及aPTT活性,对人中性粒细胞弹性蛋白酶具有较好的抑制活性(IC50=1.83μM),且特异性强。结论:IsKuI-1是一种活性较好的人NE抑制剂。因此为进一步探讨rIsKuI-1的生物学功能及其作为新药开发应用奠定了基础。
- 崔宏娣邵正邓莉司徒永立彭礼飞
- 关键词：原核表达中性粒细胞弹性蛋白酶
- 十二指肠钩虫巨噬细胞迁移抑制因子基因的克隆和表达被引量：3
- 2012年
- 目的克隆、表达十二指肠钩虫巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)AduMIF-1基因。方法设计、合成特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduMIF-1基因。将获得的AduMIF-1编码序列克隆至原核表达载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a/AduMIF-1。重组表达质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达并分离纯化重组AduMIF-1。结果成功扩增到AduMIF-1全长编码序列,完整阅读框长度为360bp,编码119个氨基酸。构建了重组表达质粒pET32a/AduMIF-1,经IPTG诱导表达和分离、纯化,获得了重组AduMIF-1,融和蛋白分子质量单位约为33ku。结论本研究从十二指肠钩虫中分离到MIF基因,并成功进行了重组表达、分离与纯化,为进一步研究AduMIF-1的生物学功能奠定了基础。
- 邵正邓莉何庆丰彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫巨噬细胞迁移抑制因子克隆原核表达
- 冬、夏季6种经济贝类脂肪酸组成被引量：6
- 2009年
- 测定和比较了广东湛江地区6种常见经济贝类冬、夏季19种主要脂肪酸组成,探讨了冬、夏2季气候变化对贝类脂肪酸组成的影响和相应的脂肪酸营养价值。结果表明,检测的6种海洋贝类冬、夏季总脂含量分别为(0.11±0.01)%～(0.19±0.01)%,(0.15±0.00)%～(0.45±0.04)%;饱和脂肪酸(SFA)分别为35.15%～47.29%,41.96%～45.99%;单不饱和脂肪酸(MUFA)分别为9.47%～17.68%,13.62%～18.04%;多不饱和脂肪酸(PUFA)分别为39.35%～48.56%,36.25%～43.15%。通过方差分析,6种贝类冬季SFA、MUFA和PUFA的含量均比夏季高,且具有显著差异;冬季的总脂含量虽然比夏季高,但差异不显著。
- 元冬娟邵正程小广周克元江黎明
- 关键词：海洋贝类脂肪酸组成气相色谱-质谱
- 棘阿米巴角膜炎患者分离株在不同环境中的形态观察被引量：1
- 2015年
- 目的观察棘阿米巴的形态学特点,为探讨棘阿米巴感染的诊断提供依据。方法以棘阿米巴角膜炎患者的送检材料为实验材料,置入不同条件中培养,观察其在不同的p H值（2、4、6、8、10）、温度（20、25、30、35℃）和加大肠埃希菌的条件下对棘阿米巴形态和活力的影响。结果棘阿米巴在不同的条件下形态呈多样性,酸性环境中以滋养体为主,而在碱性环境易形成包囊。p H=6,温度为25~30℃和加有大肠埃希菌的培养条件时,适合棘阿米巴生长,其中大部分的虫体为活动滋养体,并进行大量的繁殖。结论棘阿米巴在不同条件中存在滋养体和包囊转化过程,这为进一步研究其诊断及致病机制奠定了基础。
- 许琴英徐珠锦邵正邓莉
- 关键词：棘阿米巴滋养体包囊形态学
- 十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶AduGST-1基因的克隆和重组表达
- 2012年
- 目的克隆十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶(GST)AduGST-1基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduGST-1。方法设计特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduGST-1基因。将获得的AduGST-1编码序列克隆至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduGST-1。重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达、Ni亲和层析分离纯化重组AduGST-1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达及纯化情况。结果成功扩增到AduGST-1全长编码序列,并登记到GenBank(accession no.JQ812812)。AduGST-1编码序列长度为624bp,编码307个氨基酸残基。成功构建了重组表达质粒pETHF/AduGST-1,在BL21(DE3)中表达并纯化了重组AduGST-1。结论首次报道从十二指肠钩虫中分离到GST基因,该基因可在大肠埃希菌中高效表达,并分离纯化了重组GST蛋白,为进一步研究AduGST-1功能与应用奠定了基础。
- 邵正何庆丰邓莉彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶原核表达
- 十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物Ad-TIMPL-1基因克隆及其原核表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂同源物(TIMPL)Ad-TIMPL-1基因并进行原核表达。方法分别用3’RACE及RT-PCR技术从十二指肠钩虫成虫cDNA中扩增编码Ad-TIMPL-1的cDNA3’末端及5’末端序列;序列经拼接后进行初步生物信息学分析;将Ad-TIMPL-1成熟肽编码序列克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组表达质粒;重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达情况。结果成功克隆获得了编码Ad-TIMPL-1的全长cDNA序列并登记到GenBank(accession no.EF495071);Ad-TIMPL-1完整阅读框为396bp,编码132个氨基酸残基组成的蛋白,含16个氨基酸残基组成的信号肽;成功构建了原核表达重组质粒pET-32a/Ad-TIMPL-1,并在大肠杆菌中得到了表达。结论本研究首先从十二指肠钩虫中克隆到了Ad-TIMPL-1基因并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 邓莉邵正许琴英胡晶晶彭礼飞
- 关键词：十二指肠钩虫金属蛋白酶组织抑制剂克隆原核表达
- 蒜头抑菌能力的调查研究
- 2011年
- 目的：了解湛江市各个菜市场及超市销售蒜头的抑菌能力。方法：制备蒜头提取液,采用琼脂稀释法检测蒜头提取液的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。结果：蒜头的提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的MIC范围分别为8~256μg/mL、8~256μg/mL、16~512μg/mL和4~64μg/mL。MIC的平均值分别为60.5μg/mL,89.5μg/mL、139μg/mL和20.75μg/mL。结论：本地区的蒜头提取液的抑菌能力参差不齐,但都有一定的抑菌能力。
- 刘军杨锦荣李国明徐珠锦邵正
- 关键词：最小抑菌浓度金黄色葡萄球菌绿脓杆菌白色念珠菌
