闭兰
- 作品数：65 被引量：58H指数：4
- 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技支撑计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 系列鼠抗CD分子单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和序列分析
- 2002年
- 目的 获取系列鼠抗人CD分子单抗的轻链及重链可变区基因并进行克隆和测序。方法 采用RT－PCR技术，从WuT4、WUT3、WuTac、WuLCA、WuT9杂交瘤细胞总RNA中分别扩增出轻链和重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果 以上几种抗体的轻重链可变区的 PCR产物大小均为 400bp左右，成功构建了pMD18－T－VL和 pMD18－T－VH克隆载体，经限制性酶切分析，其大小与预期结果相符，并按ABI PRLSM BigDye系统测序。结论 经与Kabat、Blast抗体基因同源数据库比较，所获基因片段均为抗体基因。
- 张爱华闭兰王志友张囡左建民赵良沈韬周玉柏孙可芳金玉玲陈敬史良如
- 关键词：CD分子单克隆抗体可变区基因基因克隆
- 采用免疫沉淀研究人SARS免疫球蛋白的特异性反应性
- 目的研究人SAPS免疫球蛋白和单人份SARS恢复期病人血浆与SARS NS-1病毒株裂解产物和转染基因工程重组全长S、缺失S片段裂解产物的特异反应性。方法采用免疫沉淀方法对人SARS特免球蛋白以及10份SAILS恢复期病...
- 张爱华刘俊生闭兰张智赵亚杰李策生方志正杨晓明
- 文献传递
- 人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。
- 黄仕和周志军彭祥兵詹骞张爱华闭兰余模松梁米芳
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原基因工程抗体杆状病毒纯化
- 噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子 ,并进行基因序列分析。方法 采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原 ,对自建的 4× 10 5Fab噬菌体抗体库进行富集筛选 ,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌 ,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后 ,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析。结果 共挑选了 6 0个单克隆菌株 ,其中噬菌体ELISA阳性有 2 7个 ,阳性率为 4 5 % ;PCR鉴定均为相应大小片段 ;限制性内切酶鉴定表明 2 7个阳性克隆菌中有 13个具有约 15 0 0bp的片段 ,其余均为约 75 0bp大小 ;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同 ;选取 5个含约 15 0 0bp片段和 2个含约75 0bp片段的克隆菌株 ,经测序均为人免疫球蛋白基因 ,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族 ,轻链分别属于L5、L6、L8和 0 12 /0 2家族。结论 从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子。表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性。
- 张爱华端义坤闭兰赵亚杰张智阎莹王志友余模松
- 关键词：FAB抗体抗乙型肝炎病毒表面抗原噬菌体展示
- 人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的表达和鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的对人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体A12进行可溶性表达及特异性和中和活性检测。方法表达人源单链抗体A12的菌株,经诱导后进行SDS-PAGE及Western blot检测,用流式细胞仪(FACS)检测表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)检测表达产物的中和活性。结果Western blot显示表达产物与抗C-myc抗体在相对分子质量约30 000处出现强阳性表达带。FACS表明A12与表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染的Vero细胞出现特异性反应。RFFIT表明,A12 ScFv在1∶27倍稀释时能完全中和病毒。结论已获得了A12可溶性表达,表达产物能与狂犬病毒G蛋白特异性结合,并对狂犬病毒具有一定的中和活性。
- 闭兰张爱华孙可芳胡巧玲祝玉桃王志友余模松
- 关键词：单链抗体基因表达可溶性表达
- 龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1生产用菌种库的建立和检定
- 2011年
- 目的建立用于龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1制备的菌种库，并对建立的菌种库进行质量检定。方法将质粒pGJA-P／VAX1转化大肠杆菌DH-Sct，筛选后建立原始菌种库，扩大培养建立主菌种库和工作菌种库。对主菌种库和工作菌种库进行全面检定，包括革兰染色、生化试验、16SrRNA测序、抗生素抗性检测、外源噬菌体检测、质粒传代稳定性检测、质粒酶切分析。结果种子菌的革兰染色、生化试验和16SrRNA测序结果均符合大肠杆菌检定要求，菌种库无噬菌体污染，质粒酶切结果与质粒构建图谱一致。结论主菌种库和工作菌种库的检测结果均符合国家食品药品监督管理局相关指南要求，能用作龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1的生产用菌种。
- 罗丹闭兰赵亚杰张爱华杨晓明
- 关键词：疫苗DNA检定
- 重组卡介苗-BE1726D的鉴定及其免疫原性评价
- 2016年
- 目的鉴定重组卡介苗-BE1726D(rBCG-BE1726D)特异性蛋白的表达,并评价其在小鼠体内的免疫原性。方法将冻干的菌株BCG-SSI和rBCG-BE1726D扩大培养后,超滤浓缩收集上清,超声破碎离心后收获菌体,Western blot法进行特异性蛋白检测。用rBCG-BE1726D和BCG-SSI菌株经腹股沟皮下免疫BALB/c小鼠6周后,分离小鼠脾淋巴细胞,ELISPOT及ELISA法检测脾淋巴细胞干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的分泌水平;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞CD4^+和CD8^+ T细胞的比例。结果菌株rBCG-BE1726D中存在Ag85B、ESAT-6、RV2626c蛋白;菌株BCGSSI中仅存在Ag85B蛋白。经Ag85B刺激后,BCG-SSI组和rBCG-BE1726D组产生的细胞斑点数均明显高于PBST对照组(P<0.05);经PPD刺激后,rBCG-BE1726D组产生细胞斑点数量显著高于BCG-SSI组和PBST对照组(P<0.000 1);各组间ESAT-6、Rv2626c、Rv1733c、RpfD刺激所产生的细胞斑点数差异无统计学意义(P>0.05)。经Ag85B刺激后,BCG-SSI组和rBCG-BE1726D组产生IFNγ的水平显著高于PBST对照组(P<0.05);经PPD刺激后,rBCG-BE1726D组的IFNγ分泌水平与BCG-SSI组差异无统计学意义(P>0.05);各组间ESAT-6、Rv1733c、Rv2626c、RpfD刺激产生的IFNγ分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。rBCG-BE1726D组CD4^+、CD8^+细胞总比例及CD4^+ T/CD8^+ T比值明显低于BCG-SSI组和PBST对照组(P<0.05),CD8^+ T细胞比例明显高于BCG-SSI组和PBST对照组(P<0.05)。结论 rBCG-BE1726D有较强的免疫原性,可明显提高BALB/c小鼠的免疫应答水平,但与BCG-SSI比较,其免疫原性无明显优势,需对疫苗的保护力进行进一步研究。
- 张海峰方习静闭兰
- 关键词：免疫原性结核分枝杆菌
- 荧光素标记抗CD3/CD4/CD8单克隆抗体的质量控制
- 目的：对本室用荧光素标记的抗CD3、CD4和CD8单克隆抗体进行质量控制。
方法：采用流式细胞术，利用其多参数的流式细胞分析技术，对单色、多色荧光标记抗体的偶联率及偶联效果进行分析与评价。
结果: 荧...
- 孙可芳闭兰端义坤赵亚杰张涛张爱华
- 关键词：荧光标记单克隆抗体生物制品
- 文献传递
- 人免疫缺陷病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gp120基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 1998年
- 目的提高人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）包膜糖蛋白ｇｐ１２０基因在原核系统中的表达量。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增出５６０ｂｐ的ＨＩＶ－１ＬＡＶ株ｇｐ１２０Ｎ端基因片段，经ＥｃｏＲⅠ及ＳａｌⅠ酶切后插入高效表达载体ｐＥＴ２８ａ，得到重组质粒ｐＥＴ１２０，并转化表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导高效表达出ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因片段。结果间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验表明，表达产物具有良好的抗原性及特异性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析结果表明，ｇｐ１２０表达量占总菌体蛋白的５０％。
- 闭兰雷小军张为严家新余模松朱家鸿
- 关键词：GP120基因表达HIV-1
- HIV-1 P24截短体与gp41截短体的融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定被引量：1
- 2001年
- 用基因重组技术将截短的HIV 1p2 4基因和gp41基因连接成嵌合基因 ,插入质粒 pGEX 4T3,构建成重组表达质粒pGEX F。将 pGEX F转化大肠杆菌BL2 1。经IPTG诱导表达 ,pGEX F在大肠杆菌BL2 1中获得了高效表达。融合蛋白P2 4 gp41经Glutathione Sepharose4B亲和层析纯化后 ,用间接ELISA和免疫印迹检测HIV抗体阳性血清和正常人血清 ,P2 4 gp41只与HIV抗体阳性血清反应 ,证明获得的融合蛋白P2 4 gp41有很强的抗原特异性和免疫反应性 。
- 陈伟闭兰朱华松李茜余模松
- 关键词：HIV-1P24GP41融合蛋白大肠杆菌免疫诊断试剂
