张爱华
- 作品数：52 被引量：88H指数：4
- 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 系列鼠抗CD分子单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆和序列分析
- 2002年
- 目的 获取系列鼠抗人CD分子单抗的轻链及重链可变区基因并进行克隆和测序。方法 采用RT－PCR技术，从WuT4、WUT3、WuTac、WuLCA、WuT9杂交瘤细胞总RNA中分别扩增出轻链和重链可变区基因，进行克隆并作核苷酸序列分析。结果 以上几种抗体的轻重链可变区的 PCR产物大小均为 400bp左右，成功构建了pMD18－T－VL和 pMD18－T－VH克隆载体，经限制性酶切分析，其大小与预期结果相符，并按ABI PRLSM BigDye系统测序。结论 经与Kabat、Blast抗体基因同源数据库比较，所获基因片段均为抗体基因。
- 张爱华闭兰王志友张囡左建民赵良沈韬周玉柏孙可芳金玉玲陈敬史良如
- 关键词：CD分子单克隆抗体可变区基因基因克隆
- SARS病毒NS-1株三级毒种库的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立SARS病毒NS1株三级毒种库。方法SARS病毒NS1株在Vero细胞上传代扩增,并经各项检定合格后,建立SARS病毒NS1株三级毒种库。结果工作种子批病毒滴度均在8.2LgCCID50ml以上;无菌试验、支原体检查均合格;鉴别试验中,经与SARS病人恢复期高效价血清中和,中和指数均在955以上;外源因子检查中,小鼠和乳鼠存活率均在86%以上;血吸附和非血吸附检查均为阴性;免疫原性检查中,病毒原液和1∶5倍稀释病毒液免疫小鼠,其血清中和效价分别达1∶54和1∶15。结论SARS病毒NS1株各项指标均符合《SARS病毒灭活疫苗临床前研究技术要点》和《中国生物制品规程》2000年版要求,可作为SARS灭活疫苗生产用毒种。
- 李萍萍杨晓明张爱华易玲刘俊生吴杰鲁建忠郑新雄方志正
- 关键词：SARS病毒病毒滴度免疫小鼠种子批乳鼠毒种
- 人SARS特异性免疫球蛋白生物学活性的研究
- 2005年
- 目的研究人SARS特异性免疫球蛋白的生物学活性。方法采用病毒终点法中和试验、酶联免疫及Westernblot等方法对人SARS特异性免疫球蛋白体外中和NS1SARS病毒株的中和指数、中和效价、抗体滴度以及与NS1SARS病毒株灭活疫苗的反应性进行研究。结果8份用于生产人SARS特异性免疫球蛋白的恢复期病人血清的中和指数均在186～112200之间;8份混合原料浆和SARS特异性免疫球蛋白的中和效价分别为1∶200和1∶1000;ELISA效价分别为1∶8和1∶64;与NS1SARS灭活疫苗的Westernblot在相对分子质量约210000、120000和47000处有明显的条带。结论人SARS特异性免疫球蛋白能有效中和SARS病毒,且与灭活SARS疫苗具有强反应性。
- 杨晓明李策生张爱华刘俊生李萍萍方志正
- 关键词：免疫球蛋白生物学活性特异性SARS病毒BLOT病毒株终点法
- 治疗性疫苗的研究进展被引量：3
- 2011年
- 治疗性疫苗不仅具有预防性疫苗的间接靶向特异性和长效性等特点,而且还具有治疗性药物的疗效,尤其对一些目前尚无特效治疗药物的传染性疾病及肿瘤等可以起到治疗作用。近年来,治疗性疫苗的研究已取得了全面的进展。本文就治疗性疫苗的意义、作用机理及研究进展作一综述。
- 鲁晓伍张爱华
- 关键词：治疗性疫苗免疫治疗慢性感染性疾病肿瘤
- 抗人CD25嵌合抗体基因的构建及其瞬时表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的:构建抗人CD25嵌合抗体基因并在哺乳动物细胞中进行瞬时表达和初步鉴定。方法:采用RLM-RACE法克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并利用基因拼接法构建嵌合抗体基因。用脂质体法瞬时转染三种哺乳动物细胞,并使用ELISA、FCM、WB、Dot blot和免疫荧光法进行检测。结果:成功克隆WuTac抗体可变区和信号肽序列,并构建了抗人CD25嵌合抗体表达质粒。瞬时转染结果表明所表达的嵌合抗体保留了亲本抗体WuTac的抗原结合力。结论:成功构建了抗人CD25嵌合抗体基因,为其进一步研究打下基础。
- 胡迪超张爱华潘勇兵詹珊珊杨晓明
- 关键词：CD25基因拼接嵌合抗体
- 人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。
- 黄仕和周志军彭祥兵詹骞张爱华闭兰余模松梁米芳
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原基因工程抗体杆状病毒纯化
- 噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子 ,并进行基因序列分析。方法 采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原 ,对自建的 4× 10 5Fab噬菌体抗体库进行富集筛选 ,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌 ,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后 ,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析。结果 共挑选了 6 0个单克隆菌株 ,其中噬菌体ELISA阳性有 2 7个 ,阳性率为 4 5 % ;PCR鉴定均为相应大小片段 ;限制性内切酶鉴定表明 2 7个阳性克隆菌中有 13个具有约 15 0 0bp的片段 ,其余均为约 75 0bp大小 ;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同 ;选取 5个含约 15 0 0bp片段和 2个含约75 0bp片段的克隆菌株 ,经测序均为人免疫球蛋白基因 ,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族 ,轻链分别属于L5、L6、L8和 0 12 /0 2家族。结论 从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子。表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性。
- 张爱华端义坤闭兰赵亚杰张智阎莹王志友余模松
- 关键词：FAB抗体抗乙型肝炎病毒表面抗原噬菌体展示
- 人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体的表达和鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的对人源抗狂犬病毒G蛋白单链抗体A12进行可溶性表达及特异性和中和活性检测。方法表达人源单链抗体A12的菌株,经诱导后进行SDS-PAGE及Western blot检测,用流式细胞仪(FACS)检测表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)检测表达产物的中和活性。结果Western blot显示表达产物与抗C-myc抗体在相对分子质量约30 000处出现强阳性表达带。FACS表明A12与表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染的Vero细胞出现特异性反应。RFFIT表明,A12 ScFv在1∶27倍稀释时能完全中和病毒。结论已获得了A12可溶性表达,表达产物能与狂犬病毒G蛋白特异性结合,并对狂犬病毒具有一定的中和活性。
- 闭兰张爱华孙可芳胡巧玲祝玉桃王志友余模松
- 关键词：单链抗体基因表达可溶性表达
- 龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1生产用菌种库的建立和检定
- 2011年
- 目的建立用于龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1制备的菌种库，并对建立的菌种库进行质量检定。方法将质粒pGJA-P／VAX1转化大肠杆菌DH-Sct，筛选后建立原始菌种库，扩大培养建立主菌种库和工作菌种库。对主菌种库和工作菌种库进行全面检定，包括革兰染色、生化试验、16SrRNA测序、抗生素抗性检测、外源噬菌体检测、质粒传代稳定性检测、质粒酶切分析。结果种子菌的革兰染色、生化试验和16SrRNA测序结果均符合大肠杆菌检定要求，菌种库无噬菌体污染，质粒酶切结果与质粒构建图谱一致。结论主菌种库和工作菌种库的检测结果均符合国家食品药品监督管理局相关指南要求，能用作龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1的生产用菌种。
- 罗丹闭兰赵亚杰张爱华杨晓明
- 关键词：疫苗DNA检定
- 银屑病自然免疫噬菌体单链抗体库的构建及初步验证
- 2011年
- 目的构建银屑病自然免疫噬菌体展示全人源单链抗体库,并对其进行抗人肿瘤坏死因子α(Humantumornecros-is factorα,hTNFα)单链抗体的富集筛选。方法采用间接ELISA法对33例银屑病患者血清进行抗hTNFαIgG分析;利用噬菌体展示技术,以分离的PBLs构建银屑病患者的pComb3X_scFv抗体库,并对其库容量、正确性和多样性进行鉴定;以rhTNFα包被酶标板,经4轮常规的"吸附-洗脱-扩增"进行特异性hTNFα抗体的固相生物淘选。结果与健康个体相比,银屑病患者具有明显增高的血清抗hTNFα自身抗体(P<0.01);以此抗体基因资源成功构建出多样性良好的单链可变区噬菌体抗体库,库容量约为4×106,重组率>90%;经rhTNFα筛选获得了特异性噬菌体抗体的富集。结论利用构建的银屑病自然免疫噬菌体抗体库可筛选到抗hTNFα特异性单链抗体。
- 张银川张爱华潘勇兵余玲姜功平方志正
- 关键词：银屑病噬菌体抗体库单链抗体肿瘤坏死因子Α
