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PCR衍生技术在致病菌鉴定中的应用: 2006年; PCR技术的发展为致病菌的检测鉴定提供了快速、灵敏、准确的检测手段。该文着重介绍致病菌检测鉴定过程中选择PCR目标基因的3种常用方法:依赖于核糖体RNA基因、依赖于蛋白质基因和依赖于重复序列基因;同时介绍一些常用的PCR衍生检测技术。; 王建春高博刘静叶林柏; 关键词：聚合酶链反应细菌微生物学技术

毕赤酵母表达的HBV全长Pres蛋白的分离纯化被引量：2: 2005年; 巴斯德毕赤酵母工程菌株GS115PreS经发酵在甲醇诱导下可高效表达分泌型全长PreS蛋白。Westernblot证明发酵液中存在着可溶性的分子量为48kD的PreS蛋白和蛋白质颗粒,蛋白质颗粒主要成分为48kD的全长Pres蛋白和28kD的S蛋白,电镜观察发现蛋白质颗粒直径为30nm。发酵液经过脱盐、浓缩处理后,上清液经DEAESFF阴离子交换柱得到纯化的PreS蛋白;超速离心和蔗糖密度梯度离心得到蛋白颗粒。该颗粒的主要组分为全长PreS蛋白(PreS1+PreS2+S),还有少量的主蛋白(S)。ELISA检测证明全长PreS蛋白和蛋白颗粒有着良好的抗原性,PN显示蛋白颗粒的抗原性比PreS蛋白的抗原性高。; 韩雪叶林柏李宝宗佘应龙叶力郑竑高博郜金荣吴正辉; 关键词：发酵分离纯化免疫原性

HBV X基因的表达及在真核细胞中对内质网压力的作用被引量：1: 2006年; 运用PCR技术获得HBx基因,分别克隆到原核表达载体pET-his和真核表达载体pcDNA3.1(-)上。重组质粒pET-his-HBx转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,利用Ni柱纯化后的蛋白免疫家兔,获得特异性的抗-HBx兔抗血清。重组质粒pcDNA3.1(-)-HBx分别转染HepG2和Hep3B细胞系后,经RT-PCR和Westernblot检测,证明HBx可以在这两种细胞系中表达。通过报告基因的表达研究了HBx对XBP1和GRP78启动子的激活活性,结果表明瞬时转染HBx的细胞系中,XBP1和GRP78启动子介导的荧光素酶活性比相应的对照细胞增加了3～7倍。通过RT-PCR分析证明,转染了HBx的细胞中XBP1mRNA发生了剪切。因此,可以初步推断HBx在HepG2和Hep3B细胞中的表达可以引起内质网压力反应,为进一步阐明HBx表达对内质网的影响和肝脏病原发生机制奠定了基础。; 高博李宝宗韩涛叶林柏王薇曾莹春孔令保郑竑韩雪吴正辉佘应龙叶力; 关键词：乙型肝炎病毒 HBX蛋白

聚合酶链反应结合地高辛标记寡核苷酸杂交检测肠道致病菌的应用被引量：2: 2006年; 16S rDNA是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列,既保守又相对,呈现出保守区和可变区交错排列的状态.根据这些特点,我们在16S rDNA保守区设计聚合酶链反应（PCR）引物,用一对通用引物在适宜的PCR反应条件下就可以将所有细菌的相应基因片段全部扩增出来,同时利用可变区设计地高辛标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物进行斑点杂交而区分不同细菌.现报告如下.; 王建春高博黄文红张秀岭叶林柏梅国华刘静; 关键词：寡核苷酸探针地高辛标记肠道致病菌杂交检测通用引物

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B抑制IFN介导的抗病毒反应被引量：2: 2006年; 丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)非结构蛋白NS4B的功能仍不很清楚。本实验旨在研究NS4B对干扰素介导的抗病毒反应的影响。建立稳定表达NS4B的细胞系后,用空斑实验研究NS4B在不同浓度的IFN_α下对水泡口炎病毒(VSV)的影响,利用代表2308个信号传导相关的基因的微点阵研究其对细胞基因表达的影响,和流式细胞仪分析IFNGR1的荧光强度。结果显示HCV_NS4B能微弱地抑制IFN_α介导的抗病毒反应,可能原因是HCV_NS4B抑制一些与免疫反应相关的基因的表达,特别是与IFN_γ信号传导有关的基因。因此,NS4B对HCV耐受干扰素治疗起一定的作用。; 郑义罗海波高博黄来强; 关键词：丙型肝炎病毒

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B诱导细胞非折叠蛋白反应被引量：13: 2005年; 用RT-PCR和免疫印迹的方法检测稳定表达NS4B的HeLa细胞中的XBP1;通过RT-PCR的方法在表达NS4B的HeLa和Huh-7细胞中检测ATF6,Grp78和caspase-12的转录,并且通过报告基因的方法分析XBP1和Grp78启动子活性。实验结果表明:在表达NS4B的HeLa细胞中检测到XBP1的两种形式(剪接和未剪接),此外,在细胞中ATF6、Grp78的转录水平和XBP1、Grp78启动子的荧光素酶活性较没有表达NS4B的HeLa和Huh-7细胞中的量有所增加;通过染色质免疫沉淀实验(ChIP)分析,这些增加可能是由于XBP1结合到了这些基因的启动子上引起的。总之,实验结果可提示HCVNS4B通过ATF6或XBP1途径引起内质网压力,导致UPR反应。NS4B可能在HCV的致病性中起着重要的作用,特别是在慢性肝炎,甚至肝细胞癌中。; 郑义高博景维孔令保杨晓俊吴正辉叶林柏; 关键词：丙型肝炎病毒

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高博