丁鹏 作品数:7 被引量:29 H指数:2 供职机构: 青岛农业大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 山东省自然科学基金 山东省农业科学院高技术自主创新基金 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
猪圆环病毒2型SD2分离株ORF3基因转录分析 被引量:2 2009年 对PCV2 SD2株(DQ478947)进行了序列分析发现,其含有11个开放阅读框,与以往分离株开放阅读框有较大差异。根据GenBank发表的PCV2序列设计特异性引物,扩增ORF3基因,预计扩增片段大小为209 bp。分别在接毒后12、24、364、8 h,用Trizol法自病毒细胞裂解液提取总RNA,然后用DNase I处理,除去残留的病毒DNA,利用醋酸纤维素分离mR-NA,用上述引物进行RT-PCR扩增。在接毒24 h后扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与PCV2 SD2(DQ478947)ORF3基因序列相符。由此证实,PCV2山东分离株ORF3基因可在接毒24 h后于转录水平表达,为ORF3基因的深入研究打下了基础。 丁鹏 李俊 于周 程凯慧 吴家强 王金宝关键词:猪圆环病毒2型 ORF3基因 转录分析 猪流感与公共卫生 被引量:1 2009年 猪流感(Swine influenza,SI)是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道传染病之一。导致猪发病的致病毒株主要有H1N1、H1N2、H3N1、H3N2、H2N3、H5N1和H9N2等亚型流感病毒,特别是从猪体分离H5N1和H9N2亚型流感病毒对禽流感的控制及人类公共卫生有重要意义。针对目前流行的甲型H1N1疫情,对猪流感病毒的分子生物学、临床症状、病理变化及公共卫生意义等方面进行了综述,以期对其有一个较为全面的了解。 时建立 丁鹏 李俊 吴家强关键词:猪流感 分子生物学 公共卫生 猪圆环病毒II型荧光定量PCR检测方法的建立及Rep和Cap蛋白的原核表达 猪圆环病毒(Porcine circovirus)属于圆环病毒科,圆环病毒属。是一种小的,无囊膜的单链负股环状DNA病毒。病毒分为PCV1和PCV2两种,其中PCV1无致病性,PCV2对猪具有致病性,与近年来世界各国普遍... 丁鹏关键词:猪圆环病毒 CAP蛋白 原核表达 REP蛋白 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立 2010年 李俊 丁鹏 时建立 徐绍建 孙文博 吴家强 王金宝 周顺关键词:猪圆环病毒2型 荧光定量PCR检测 SYBR 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救 被引量:6 2009年 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17~20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。 李俊 时建立 于周 徐绍建 丁鹏 程凯慧 王金宝关键词:猪圆环病毒2型 感染性克隆 PCV2ORF1、ORF2截短基因原核表达载体的构建及表达 被引量:2 2010年 采用PCR方法,从PCV2双拷贝DNA感染性克隆中扩增出PCV2 ORF1和ORF2截短基因,与pQE30原核表达载体分别经KpnI和HandIII双酶切,连接,经鉴定后证明成功构建pQE30-ORF1、pQE30-ORF2原核表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE和West-ern-blot检测到目的蛋白表达,为研究蛋白功能和单克隆抗体的研制打下了基础。 时建立 李俊 丁鹏 吴家强 孙文博 丛晓燕 周顺关键词:PCV2 ORF2 副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用 被引量:18 2010年 根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。 于江 吴家强 张玉玉 王兆 李俊 丁鹏 李坤 刘洋 张金强 徐绍建 刘少宁 周顺 王文志 王金宝关键词:副猪嗜血杆菌 SYBR I 荧光定量PCR