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排序方式：

猪圆环病毒2型SD2分离株ORF3基因转录分析被引量：2: 2009年; 对PCV2 SD2株(DQ478947)进行了序列分析发现,其含有11个开放阅读框,与以往分离株开放阅读框有较大差异。根据GenBank发表的PCV2序列设计特异性引物,扩增ORF3基因,预计扩增片段大小为209 bp。分别在接毒后12、24、364、8 h,用Trizol法自病毒细胞裂解液提取总RNA,然后用DNase I处理,除去残留的病毒DNA,利用醋酸纤维素分离mR-NA,用上述引物进行RT-PCR扩增。在接毒24 h后扩增出的目的片段大小与预计扩增片段大小相符合,测序结果表明扩增片段与PCV2 SD2(DQ478947)ORF3基因序列相符。由此证实,PCV2山东分离株ORF3基因可在接毒24 h后于转录水平表达,为ORF3基因的深入研究打下了基础。; 丁鹏李俊于周程凯慧吴家强王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF3基因转录分析

猪流感与公共卫生被引量：1: 2009年; 猪流感(Swine influenza,SI)是目前危害全世界养猪业的重要呼吸道传染病之一。导致猪发病的致病毒株主要有H1N1、H1N2、H3N1、H3N2、H2N3、H5N1和H9N2等亚型流感病毒,特别是从猪体分离H5N1和H9N2亚型流感病毒对禽流感的控制及人类公共卫生有重要意义。针对目前流行的甲型H1N1疫情,对猪流感病毒的分子生物学、临床症状、病理变化及公共卫生意义等方面进行了综述,以期对其有一个较为全面的了解。; 时建立丁鹏李俊吴家强; 关键词：猪流感分子生物学公共卫生

猪圆环病毒II型荧光定量PCR检测方法的建立及Rep和Cap蛋白的原核表达: 猪圆环病毒(Porcine circovirus)属于圆环病毒科，圆环病毒属。是一种小的，无囊膜的单链负股环状DNA病毒。病毒分为PCV1和PCV2两种，其中PCV1无致病性，PCV2对猪具有致病性，与近年来世界各国普遍...; 丁鹏; 关键词：猪圆环病毒 CAP蛋白原核表达 REP蛋白

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立: 2010年; 李俊丁鹏时建立徐绍建孙文博吴家强王金宝周顺; 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测 SYBR 猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒

猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救被引量：6: 2009年; 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。; 李俊时建立于周徐绍建丁鹏程凯慧王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆

PCV2ORF1、ORF2截短基因原核表达载体的构建及表达被引量：2: 2010年; 采用PCR方法,从PCV2双拷贝DNA感染性克隆中扩增出PCV2 ORF1和ORF2截短基因,与pQE30原核表达载体分别经KpnI和HandIII双酶切,连接,经鉴定后证明成功构建pQE30-ORF1、pQE30-ORF2原核表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE和West-ern-blot检测到目的蛋白表达,为研究蛋白功能和单克隆抗体的研制打下了基础。; 时建立李俊丁鹏吴家强孙文博丛晓燕周顺; 关键词：PCV2 ORF2

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用被引量：18: 2010年; 根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。; 于江吴家强张玉玉王兆李俊丁鹏李坤刘洋张金强徐绍建刘少宁周顺王文志王金宝; 关键词：副猪嗜血杆菌 SYBR I 荧光定量PCR

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丁鹏