冯锐成
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 胰腺干细胞负向筛选分子的鉴定
- 2013年
- 背景:利用胰腺干/祖细胞体外增殖分化形成β细胞是细胞替代疗法治疗糖尿病的潜在细胞来源之一。由于缺少有效的筛选分子,胰腺干细胞的分离及特性研究进展缓慢。目的:观察植物凝集素花生凝集素、菜豆凝集素和热稳定抗原对胰腺细胞的标记情况,以期找到胰腺干细胞的负向筛选分子。方法:采用荧光组织化学方法对植物凝集素(花生凝集素、菜豆凝集素)和细胞表面分子热稳定抗原抗体在成体小鼠胰腺、胚胎胰腺及切除后再生胰腺组织中进行化学及荧光组织化学检测;流式细胞仪分析负向筛选分子对胰腺细胞分群情况的影响;应用细胞培养方法对不同群细胞进行体外培养和观察。结果与结论:花生凝集素对胚胎胰腺中分化的腺泡细胞能较好标记,但不标记未分化的胰腺干/祖细胞及前体细胞;菜豆凝集素对未分化和分化的胚胎期胰腺细胞均有标记,热稳定抗原能标记正在分化的胚胎胰腺祖细胞、前体细胞和已分化胰腺细胞。在成体胰腺中,花生凝集素和菜豆凝集素均能标记胰腺腺泡和部分导管细胞,但不能标记胰岛细胞;热稳定抗原能特异标记腺泡细胞、导管细胞、血管内皮细胞、血细胞及再生胰腺新生区的导管样结构。PNA-/lowHSA-/low细胞占总细胞量的1.6%,对其培养观察发现,其中富含体积较小、三角形或多角形的上皮细胞,这些细胞可连续传代。提示协同使用花生凝集素与热稳定抗原可以筛除大部分分化的胰腺细胞及部分非胰腺细胞,从而富集胰腺干细胞。
- 冯锐成郎延贺梁洋吴莹滕春波
- 关键词：干细胞植物凝集素花生凝集素胰腺干细胞标志分子
- Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞增殖分化的调控研究
- Laminin和Fibronectin是两种重要的细胞外基质组分,通过结合到细胞表面integrin受体激活下游信号通路,调节细胞增殖、存活、分化或迁移.Fibronectin和laminin对胰腺祖细胞的调控还不清楚,...
- 冯锐成张振武梁杰梁洋滕春波
- 关键词：FIBRONECTIN增殖分化
- 通过G418处理离体纯化小鼠胰腺上皮细胞被引量：4
- 2011年
- 目的:探索一种能有效去除成纤维细胞,筛选有较强增殖能力上皮细胞的方法。方法:本研究利用成纤维细胞对G418敏感的特性,在成体小鼠胰腺细胞分离后,采用悬浮细胞直接接种到含30μg/mL G418的培养基中,或细胞贴壁生长汇合至50-70%后用30至100μg/mL之间不同浓度G418处理24h、48h或72h两种方案进行上皮细胞的纯化。结果:在直接接种法培养处理中,存活的大部分细胞为成纤维细胞,上皮细胞的生长受到抑制,无法得到纯化的胰腺上皮集落;而在细胞贴壁生长汇合至50-70%后经G418处理,成纤维细胞随着处理浓度的增加死亡率也在逐渐上升,其中50μg/mL G418处理72小时对去除成纤维细胞效果最佳。结论:G418处理能够有效去除成纤维细胞,分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大上皮细胞集落的细胞。该分离纯化方法为今后进一步研究成体胰腺干/祖细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。
- 李丹冯锐成张丽新郭方琪梁洋滕春波
- 关键词：G418成纤维细胞
- 通过整体消化法分离具有集落形成能力的胰腺上皮样细胞
- 2014年
- 目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体消化的方法,将成体小鼠整个胰腺取下,摘除系膜及大的血管,置于胶原酶中消化20min,用PBS吹打胰腺组织,得到的细胞悬液,离心后去除上清与细胞碎片,用培养基重悬实质细胞,接种于6 cm培养皿中,培养7-10天后得到单细胞集落。结果:整体消化法不剪碎胰腺组织,从而避免多种胰腺细胞的参与,得到较为纯净的胰腺上皮细胞悬液,细胞总体数量小于部分消化法,但是单细胞比率远远高于部分消化法,得到的细胞集落更纯净,不需要去除成纤维细胞,方便筛选及进一步扩大培养。结论:整体消化法能够分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大的上皮样集落的细胞。该分离方法方便、快捷,为今后进一步研究成体胰腺干细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。
- 梁杰孔德麟梁洋李丹冯锐成滕春波
- 关键词：成纤维细胞
- Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞增殖及分化的调控研究
- 糖尿病是一类常见的代谢疾病，主要包括Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。Ⅰ型糖尿病是由于胰腺β细胞自身免疫损伤造成胰岛素分泌不足，患者需要注射外源胰岛素维持血糖在正常水平。胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的一种有效方法，但是由于供体不足，限...
- 冯锐成
- 关键词：纤连蛋白层粘连蛋白
- 文献传递
- 利用胰蛋白酶冷消化法高效制备胰腺单细胞悬液
- 胰腺是一个较为特殊的器官,现有分离方法不能理想地分散胰腺组织获得大量胰腺单细胞,从而阻碍了利用流式细胞术对胰腺细胞进行分析和分选.本研究利用胶原酶和胰酶在不同条件下分离小鼠胰腺组织,摸索建立了利用胰蛋白酶冷消化分离制备胰...
- 李丹冯锐成张振武李璐滕春波
- 关键词：诱导分化胰岛素分泌
