夏振雄
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HLA-G1抑制人自然杀伤细胞杀伤猪血管内皮细胞的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究HLA G1基因抑制人自然杀伤细胞 (NK细胞 )对猪血管内皮细胞杀伤的作用。方法 利用脂质体介导的基因转染技术将 pcDNA3 HLA G1转入原代培养的猪血管内皮细胞 ,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA G1分子在猪内皮细胞上的表达 ;以NK细胞系(NK92 )和外周血单个核细胞为效应细胞 ,用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测转染细胞对NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果 与未转染HLA G1的对照组相比 ,NK92和外周血单个核细胞对转有HLA G1的猪血管内皮细胞的杀伤效率均有明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 HLA G1分子可以明显抑制人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤。
- 王树森韩军艳曹荣华祁洪刚夏振雄陈栋吴雄文龚非力陈实
- 关键词：自然杀伤细胞异种移植
- RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用被引量：4
- 2005年
- 目的 评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法 将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果 SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论 PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。
- 朱珉夏振雄王树森曹荣华祁洪刚陈栋刘斌张伟杰陈实
- 关键词：RNA干扰补体介导半乳糖转移酶平均荧光强度PED内皮细胞系
- 人类白细胞抗原G1转染猪内皮细胞降低异种细胞排斥反应的研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究转染人类白细胞抗原G1(humanleukocyteantigenG1,HLA-G1)基因后的猪内皮细胞系(porcineendothelialcells,PECs)细胞,对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)和自然杀伤细胞92(naturekillercell92,NK-92)细胞介导的杀伤作用的改变。方法利用脂质体包裹的方法,将携带HLA-G1基因的真核表达载体pcDNA3.0转染PECs细胞,在蛋白质水平通过间接免疫荧光法、在RNA水平通过RT-PCR,检测HLA-G1的表达;取6名健康志愿者,每人5ml静脉血,分离出单个核细胞和NK-92作为效应细胞,利用51Cr释放试验来检测其杀伤作用的改变。结果转染HLA-G1基因后,在转染的内皮细胞中蛋白质水平和RNA水平均检测到HLA-G1基因的表达;PBMC和NK-92细胞介导的对PECs细胞的杀伤作用均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论转染HLA-G1后的PECs,可有效地降低由人NK细胞介导的杀伤作用,从而为抑制异种细胞排斥反应提供了新的思路。
- 夏振雄韩军艳王树森曹荣华朱珉祁洪刚陈栋吴雄文龚非力陈实
- 新生猪胰岛细胞的HLA-G_1基因转染被引量：1
- 2005年
- 目的探讨HLA-G1基因转染新生猪胰岛细胞的可行性,检测其表达和功能状况。方法体外分离纯化新生猪胰岛细胞,脂质体载体转染HLA-G1基因。免疫荧光法检测HLA-G1基因在胰岛细胞上的表达状况;51Cr释放实验分析其对人NK细胞细胞毒的抑制作用。结果新生猪胰岛细胞HLA-G1基因表达率大约为50%,体外转染24-48 h达高峰;混合淋巴细胞培养(胰岛细胞+ NK细胞)后,空质粒转染组的胰岛细胞溶解率为71.57%,而转染组胰岛细胞溶解率为53.5%。结论利用脂质体Genejammer转染体外培养的新生猪胰岛细胞,可以获得靶基因的瞬时高效表达; HLA-G1基因转染可以有效抑制NK细胞对异种胰岛的细胞毒作用。
- 曹荣华韩军艳吴雄文王树森陈栋祁洪刚夏振雄陈实
- 关键词：猪胰岛细胞基因转染混合淋巴细胞培养脂质体载体人NK细胞异种胰岛
