王树森
- 作品数：14 被引量：14H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 采用核转染技术建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G_1的真核细胞系
- 2006年
- 目的建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G1(solublehumanleucocyteantigenG1,sHLA-G1)的真核细胞系。方法采用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入不表达HLA-类分子的LCL721.221细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞,通过RT-PCR及Dot-ELISA在基因和蛋白水平鉴定目的基因的表达。结果采用核转染法LCL721.221细胞转染效率可以达到约14%。RT-PCR检测发现了sHLA-G1基因特异性条带;采用Dot-ELISA方法利用sHLA-G1特异性抗体MEM-G/9检测,存在sHLA-G1蛋白。结论通过核转染方法成功建立了稳定表达sHLA-G1的真核细胞系。
- 曾梦华房崇芸王树森朱珉谢林王璐李荣吴雄文陈实
- HLA-G1抑制人自然杀伤细胞杀伤猪血管内皮细胞的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究HLA G1基因抑制人自然杀伤细胞 (NK细胞 )对猪血管内皮细胞杀伤的作用。方法 利用脂质体介导的基因转染技术将 pcDNA3 HLA G1转入原代培养的猪血管内皮细胞 ,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA G1分子在猪内皮细胞上的表达 ;以NK细胞系(NK92 )和外周血单个核细胞为效应细胞 ,用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测转染细胞对NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果 与未转染HLA G1的对照组相比 ,NK92和外周血单个核细胞对转有HLA G1的猪血管内皮细胞的杀伤效率均有明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 HLA G1分子可以明显抑制人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤。
- 王树森韩军艳曹荣华祁洪刚夏振雄陈栋吴雄文龚非力陈实
- 关键词：自然杀伤细胞异种移植
- 人类白细胞抗原G1转染猪内皮细胞降低异种细胞排斥反应的研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究转染人类白细胞抗原G1(humanleukocyteantigenG1,HLA-G1)基因后的猪内皮细胞系(porcineendothelialcells,PECs)细胞,对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)和自然杀伤细胞92(naturekillercell92,NK-92)细胞介导的杀伤作用的改变。方法利用脂质体包裹的方法,将携带HLA-G1基因的真核表达载体pcDNA3.0转染PECs细胞,在蛋白质水平通过间接免疫荧光法、在RNA水平通过RT-PCR,检测HLA-G1的表达;取6名健康志愿者,每人5ml静脉血,分离出单个核细胞和NK-92作为效应细胞,利用51Cr释放试验来检测其杀伤作用的改变。结果转染HLA-G1基因后,在转染的内皮细胞中蛋白质水平和RNA水平均检测到HLA-G1基因的表达;PBMC和NK-92细胞介导的对PECs细胞的杀伤作用均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论转染HLA-G1后的PECs,可有效地降低由人NK细胞介导的杀伤作用,从而为抑制异种细胞排斥反应提供了新的思路。
- 夏振雄韩军艳王树森曹荣华朱珉祁洪刚陈栋吴雄文龚非力陈实
- 胚胎胰组织移植的实验研究
- 2007年
- 目的：研究胚胎胰组织在同种异体内再生长发育的可能性，并根据不同胎龄、不同移植部位的移植胚胰生长状况，研究大鼠胚胰移植的适合胎龄和移植部位。方法：将远交系SD大鼠妊娠15．5d（E15．5）、E16．5、E17．5和E18．5的胚胰移植到成年健康SD大鼠的肾包膜下或网膜内。移植后14～21d期间剖腹观察器官生长情况，并取标本行病理切片和免疫组化观察。结果：①E15，5胚胰植入肾包膜21d后，发育良好，腺泡导管分化发育，β细胞增殖并聚集。植入网膜内16d后，有中度排斥反应，发育有限。②E16．5胚胰植入肾包膜下21d后，可见中度排斥，但结构发育较好。③E17．5和E18．5胚胰植入肾包膜下后，16d内就发生重度排斥，生长严重受限，β细胞也未见增殖。④E15．5胚胰移植到小鼠体内，未经任何免疫抑制处理，16d内见到重度排斥表现并导致组织坏死。结论：不使用免疫抑制剂时，一定胎龄的胚胰可在同种远交系成年大鼠体内再血管化，并发育为近似正常胰腺组织。E15．5或更早期的胚胰用来移植比较适合，排斥反应较轻，增殖潜力较大。胚胰移植在肾包膜下相对于移植在网膜内的排斥轻、发育好。
- 王璐黄亚冰郭晖朱珉王树森谢林曾梦华李荣陈实
- 关键词：同种异体移植再血管化排斥反应
- 建立同种大鼠心脏移植超急性排斥反应动物模型被引量：2
- 2006年
- 目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏后的受者体内抗供者抗体滴度明显升高。7只受者心脏移植后有6只移植心在24h内被排斥,病理学证实为超急性排斥反应。结论供、受者间连续3次皮肤移植预致敏后,再行心脏移植可以建立稳定的同种移植超急性排斥反应模型。
- 李荣郭晖王大卫谢林曾梦华王树森王璐陈实
- 关键词：心脏移植动物移植物排斥
- 同种大鼠胚胎胰组织移植后在异体内的增殖和分化
- 2006年
- 目的研究同种大鼠胚胎胰组织移植后在异体内重新血管化并再生长发育的可能性。方法将妊娠14．5 d(E14．5)和妊娠15．5 d(E15．5)的Lewis大鼠胚胎胰移植到成年健康Lewis大鼠的肾包膜下,分别在移植后3周和6周开腹观察移植胰的发育情况,并取标本作病理切片观察,采用免疫组织化学染色半定量和定位。结果(1)E14．5和E15．5的胚胎胰移植入肾包膜下3周后,体积均增大约10-15倍,外分泌部分腺泡导管分化发育,B细胞大量增殖,形成胰岛,组织周围有新生血管,且胰岛素分泌功能正常。(2)胚胎胰植入肾包膜下6周后,E14．5的胚胎胰内分泌部分进一步增殖;E15．5的胚胎胰则未见增殖,外分泌部分均有纤维化表现,内分泌部分与外分泌部分有分离趋势。结论(1)E14．5与E15．5的胚胎胰移植于同种大鼠肾包膜下均可在异体内再血管化,并发育为近似正常的胰腺组织。(2)E14．5和E15．5胎龄的大鼠胚胎胰都是比较适合移植的。
- 王璐黄亚冰郭晖王树森谢林曾梦华李荣陈实
- 关键词：胚胎组织移植再血管化
- 可溶性HLA-G1抑制人自然杀伤细胞NK92对猪内皮细胞PED的黏附被引量：1
- 2006年
- 目的研究可溶性HLA-G1(HLA-G5)对人自然杀伤细胞(NK细胞)黏附到猪血管内皮细胞(PED)的抑制作用,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞杀伤杀伤活性。方法利用核转染技术将pcDNA3-HLA-G5转入LCL721.221细胞株。以RT-PCR、Dot-ELISA技术分别在基因水平和蛋白水平检测HLA-G5的表达;以人类NK细胞系(NK92)效应细胞,猪内皮细胞系(PED)为靶细胞,检测NK92在静止和流动状态下对PED的黏附作用;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HLA-G5抑制NK细胞的杀伤活性。结果与未加入HLA-G5的对照组相比,NK92在静止和流动状态下对PED的黏附功能明显降低(P<0.01),且对HLA-G5组PED的杀伤效率均有明显下降(P<0.01)。结论HLA-G5可以通过抑制NK92对PED的黏附功能,来减轻NK92对PED的杀伤作用。
- 王树森房崇云曾梦华谢林李荣王璐朱珉吴雄文陈实
- 关键词：自然杀伤细胞异种
- 白细胞介素-5在慢性排斥反应中作用机制的探讨被引量：1
- 2004年
- 目的 通过观察白细胞介素 5 (IL 5 )对人嗜酸性粒细胞 (Eos)中转化生长因子TGF β1基因表达的影响 ,以阐明其在Eos相关性慢性排斥反应中的作用。方法 采用改良的密度梯度离心法分离并体外培养人外周血Eos ,以未加任何细胞因子的孔作为阴性对照 ,试验组加入不同浓度的IL 5 ( 10 -1 1 ,10 -9,10 -7mol/L)共培养 ,台盼蓝拒染法观察细胞活力变化 ,培养 16h后收集细胞和细胞培养上清液 ,应用RT PCR和ELISA方法通过检测转化生长因子TGF β1mRNA和蛋白表达的量观察IL 5的调控作用。结果 与对照组 ( 2 2 8.9± 2 .87)相比 ,3种浓度的 ( 10 -1 1 ,10 -9,10 -7mol/L)Th2型细胞因子IL 5均能显著增强体外培养的Eos中TGF β1蛋白的表达 ( 3 3 5 .13± 9.43 ,40 3 .7± 0 .0 9,42 6.0± 0 .0 5 ) ,P <0 .0 5 ,处理组mRNA的量分别为对照组的 1.42 ,1.70和 1.76倍 (P <0 .0 5 )。结论 Th2型细胞因子IL 5可能通过上调TGF
- 黄亚冰刘斌朱珉王树森陈实
- 关键词：白细胞介素-5嗜酸性粒细胞转化生长因子-Β1慢性排斥
- 转人CD46基因抑制人补体在转基因小鼠心脏组织中的沉积
- 2008年
- 目的观察转人源性膜辅助蛋白（CD46）基因对转基因小鼠心脏中人补体沉积的抑制作用。方法以近交系昆明小鼠为对象，采用显微注射法制备转人CD46基因小鼠，用逆转录聚合酶链法（RT_PCR法）检测外源基因的整合情况。以F0代转基因小鼠11只为实验组，同窝非转基因小鼠10只为对照，快速切取小鼠心脏，用改良的Langendorff法经小鼠主动脉逆行灌注预先制备的含补体的B型血人血浆。观察并记录小鼠心脏搏动时间；采用免疫荧光和免疫组织化学法检测小鼠心脏组织中补体C3。及C9的沉积情况。结果Fn代转基因小鼠外源基因的整合率为33．3％。实验组小鼠心脏搏动时间为（42．6±20．6）min（15±77min），长于对照组的（20．2±12．5）min（7±40min），差异有统计学意义（P〈0．01）。实验组小鼠心脏组织中补体G3c及C9的沉积均少于对照组。结论通过显微注射法制备的转人CD46基因小鼠，其外源基因可稳定表达；转人CD46基因可以抑制人补体C3c及C9在转基因小鼠心脏组织中的沉积。
- 谢林魏庆信李文鑫王树森李荣曾梦华朱珉郭晖陈实
- 关键词：转基因异种补体小鼠
- RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用被引量：4
- 2005年
- 目的 评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法 将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果 SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论 PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。
- 朱珉夏振雄王树森曹荣华祁洪刚陈栋刘斌张伟杰陈实
- 关键词：RNA干扰补体介导半乳糖转移酶平均荧光强度PED内皮细胞系
