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犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4: 2011年; 将纯化的犬瘟热病毒(CDV)分别与弗氏完全佐剂(CFA)和弗氏不完全佐剂(IFA)乳化制备的乳化抗原作为免疫原,以有限稀释法和间接ELISA法进行单克隆抗体的筛选,从而获得了3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7、3G2、5E3。亚型鉴定结果显示,2F7为IgG2a型,3G2为IgG1,5E3为IgGM。用2F7制备的荧光抗体对感染CDV 3 d的Vero细胞进行染色观察,结果表明,荧光抗体具有很好的特异性,染色效价为1∶200,获得的单克隆抗体可用作犬瘟热病毒抗原检测的诊断试剂。; 孙玮王铁成杨松涛高玉伟王承宇张涛杨玉姣刘玉秀阮洋靳晓霞夏咸柱; 关键词：犬瘟热病毒杂交瘤单克隆抗体

小反刍兽疫病毒H基因的真核表达被引量：1: 2011年; 目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因真核表达载体,并对其表达能力及免疫活性进行鉴定,为后期疫苗的研制提供基础。方法根据GenBank上公布的PPRV(China/Tib/Gej/07-30株)H基因的序列进行引物设计并进行扩增,纯化回收后将其克隆到pMD-18T载体中,将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pCAGGS上。结果成功构建了含有PPRV H基因的真核表达载体pCAGGS-H。通过脂质体介导质粒pCAGGS-H转染DK细胞,经间接免疫荧光及Western blot证实,表达蛋白分子质量单位为68.8 ku,能与PPRV阳性血清发生特异性反应。结论 pCAGGS-H在真核细胞内可有效表达。; 阮洋秦峻岭高玉伟黄海楠孙玮杨松涛王承宇王铁成黄耕王志亮夏咸柱; 关键词：小反刍兽疫 H基因 WESTERN BLOT

狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸的制备被引量：14: 2011年; 通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的狂犬病病毒抗体检测方法,对犬等动物免疫狂犬病疫苗后的抗体水平监测提供参考。用醋酸锌沉淀法沉淀狂犬病病毒CVS11,Sepharose 4FF进行层析纯化。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的狂犬病病毒,喷于试纸的结合释放垫(金标垫),将SPA(葡萄球菌表面A蛋白)和纯化的兔抗狂犬病病毒IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(对照线)处,组装试纸条。用制备的试纸条对261份犬血清进行检测,与快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测的结果一致;对已知效价的犬狂犬病毒中和抗体(VNA)大于0.5 IU,结果为阳性;对狂犬病病毒中和抗体(VNA)小于0.5 IU/mL的血清,结果为阴性。制备的狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸检测犬血清抗体,具有特异、便捷、快速的特点,能够检测出狂犬病病毒中和抗体大于0.5 IU的血清,适用于临床犬血清抗体水平监测,具有良好的应用前景。; 王铁成张涛杨松涛王化磊高玉伟孙玮靳晓霞赵平森冯娜黄耕邹啸环夏咸柱; 关键词：胶体金狂犬病病毒中和抗体

犬瘟热病毒单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用: 犬瘟热病毒与麻疹病毒、牛瘟病毒、小反刍兽疫病毒、鲸类麻疹病毒同属于副粘病毒科、麻疹病毒属。大部分的CDV可以归结为七个主要遗传谱系:America-1(主要的疫苗株),America-2, Asia-1, Asia-2,...; 孙玮; 关键词：单克隆抗体荧光抗体; 文献传递

小反刍兽疫病毒N基因的原核表达被引量：9: 2011年; 目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-28a-N。阳性质粒转化原核表达宿主菌Transetta(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间、温度。通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析确定表达蛋白的表达量和活性。扩增出PPRV-N基因,构建的原核表达载体pET-28a-N和原核表达菌,表达了N蛋白,表达蛋白能与PPRV阳性血清发生特异性反应。; 阮洋秦峻岭高玉伟孙玮张涛杨玉姣杨松涛王承宇王铁成黄耕夏咸柱; 关键词：原核表达 SDS-PAGE电泳 WESTERN-BLOT

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孙玮