张伯生
- 作品数：16 被引量：194H指数：6
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程农业科学更多>>
- 乳酸菌表达质粒的构建被引量：3
- 2004年
- 粪肠球菌是乳酸菌的一个属.采用生物信息学方法,预测了粪肠球菌AS1.2984基因组中乳酸脱氢酶和三磷酸甘油醛脱氢酶的组成型启动子序列.设计引物通过PCR扩增得到这2段启动子序列,并克隆到乳酸菌 大肠杆菌穿梭质粒pNZ8037上,在启动子下游接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建乳酸菌的组成型蛋白表达质粒.通过电转化将上述改造过的pNZ8037质粒导入粪肠球菌中,在共聚焦显微镜中可以观察到绿色荧光蛋白的表达.在乳酸菌MRS培养基中加入乳酸、盐酸、氢氧化钠等试剂,发现可以调节绿色荧光蛋白的表达量.
- 倪伟明黄路标王荫榆刘国元张伯生任大明
- 关键词：粪肠球菌表达质粒绿色荧光蛋白电转化MRS培养基乳酸菌
- 人端粒酶逆转录酶在大肠杆菌中表达的初步研究被引量：1
- 2002年
- 端粒酶是迄今为止最为广谱的肿瘤标志物,是一种良好的肿瘤检测和治疗的靶分子.曾报道了人端粒酶逆转录酶(hTERT)一个基因片段的表达和相应的抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究,为了获得更多针对hTERT不同表位的抗体,根据hTERT的抗原性进一步选取了hTERT的数个片段来制备抗体,这里初步探讨了这些抗原片段在大肠杆菌中的表达及各种因素对表达的影响.实验结果表明,位于hTERT蛋白中部和C末端的片段可在大肠杆菌中表达,但位于N末端的片段在各种条件下均不能表达.另外,就选取的hTERT各片段而言,诱导条件的优化只能在量上提高表达的水平,不能决定片段是否表达.而密码子偏好性,启动子强弱及mRNA二级结构的稳定性可能对片段的表达具有更大的决定作用.
- 吕韵哲孙建龙陈孟谦张伯生李景鹏任大明
- 关键词：大肠杆菌端粒酶人端粒酶逆转录酶肿瘤
- 粪肠球菌中具有启动功能的DNA片段的捕获及鉴定
- 2006年
- PCR扩增来自质粒pUC119的β-内酰胺酶基因(bla)作报告基因,克隆进质粒pNZ8037上的能被Nisin诱导的启动子PnisA下游,构建了粪肠球菌启动功能片段探测载体pNZ-bla.利用该探测载体从粪肠球菌染色体总DNA中克隆到了能在粪肠球菌中表达的一系列具有启动功能的DNA片段,将包含克隆片段的pNZ-P-bla6质粒电击转化粪肠球菌,培养转化子并检测其抗氨苄强度,结果表明其抗氨苄强度大于Nisin诱导的含pNZ-bla质粒的粪肠球菌.表明克隆的功能片段启动能力强于PnisA.在pNZ-P-bla6的启动功能片段下游Sau3AⅠ和EcoRⅠ之间接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建表达绿色荧光蛋白的质粒载体pNZ-P-gfp并导入粪肠球菌中,共聚焦显微镜下可以观察到绿色荧光蛋白的表达.
- 黄路标张伯生任大明
- 关键词：乳酸菌粪肠球菌启动子克隆载体GFP
- 端粒酶hTERT在非小细胞肺癌的表达被引量：6
- 2001年
- 目的 探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)组织中端粒酶逆转录酶 (hTERT)表达的分布及其和端粒酶活性表达的关系。方法 35例原发性非小细胞肺癌和 10例正常肺组织冰冻切片经抗hTERT抗体免疫组化染色 ,观察hTERT表达的分布。同时测定标本的端粒酶活性 ,分析两者的相关性。结果 35例肿瘤标本中 ,用免疫组化分析hTERT表达呈阳性2 7例 ,镜下观察阳性信号为棕黄色颗粒 ,主要分布于癌细胞的细胞质。用TRAP法测定 ,端粒酶活性表达呈阳性 30例 ,hTERT呈阳性表达的 2 7例标本中端粒酶活性也呈阳性的为2 2例。 10例正常组织二者均为阴性。结论 hTERT仅在肺癌细胞中的表达 ,且与端粒酶活性的表达相一致。
- 孙建龙冯久贤SAIDA.Saleh包国良陈昭沙慧芳张伯生任大明
- 关键词：肺肿瘤端粒酶逆转录酶
- 溴化乙锭-TRAP法检测端粒酶活性(英文)被引量：1
- 1999年
- 端粒酶是一种核蛋白，在真核生物体内，通过将端粒重复顺序转移到染色体末端而维持染色体的稳定．端粒酶活性存在于生殖细胞和永生癌细胞，但在正常细胞中却极低乃至无法检测．我们使用ＥＢ染色简化了端粒酶活性检测的传统的ＴＲＡＰ（Ｔｅｌｏｍ ｅｒｉｃ Ｒｅｐｅａｔ Ａｍ ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）法．结果表明，对粗抽提物而言，ＥＢ染色具有足够的可信度和灵敏度，同时又经济省时。
- SAIDA.Saleh孙建龙谢匡诚陈昭张伯生任大明
- 关键词：TRAP法端粒酶溴化乙锭酶活性
- 不同生长期的Pseudomonas putida 5-x细胞对工业废水中Cu^(2+)的吸附被引量：10
- 2001年
- 研究了不同生长阶段的Cu2 + 吸附细菌Pseudomonasputida 5 x对Cu2 + 的吸附容量 .结果表明在低硫培养基中 ,当P putida 5 x细胞生长刚进入对数生长期时 ,单位细胞对Cu2 + 的吸附溶量最低 .而当生长进入稳定生长期的后期或死亡期的早期时 ,单位细胞对Cu2 + 的吸附量最大 .实验结果还表明 ,高浓度的Cu2 + 对对数期细胞的吸附能力有一定的抑制 ,而对死亡期的细胞影响较小 .早期研究已证明细胞对重金属离子的吸附和细胞表面某些对重金属离子具有亲和性的功能基团 (如某些膜蛋白及羰基化合物 )有关 .利用透视电子显微镜观察了不同生长阶段的细胞表面结构及对铜离子的吸附效果 ,发现生长后期细胞表面吸附有较多的Cu2 + 。
- 王磊范立梅周琪张伯生李宗林任大明
- 关键词：铜离子废水处理
- hTERT基因片段的克隆、表达和抗hTERT抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究被引量：3
- 2000年
- 端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎受到严格的调控且和端粒酶活性一致。为了检测肿瘤细胞中端粒酶及hTERT的表达,我们制备了抗hTERT蛋白的特异性多克隆抗体。首先用RT-PCR方法克隆了hTERT cDNA的一个片段,将其连接到GST融合表达载体pGEX-5X-3后在大肠杆菌中融合表达。将纯化的融合蛋白抗原免疫动物,制备抗hTERT蛋白的多克隆抗体。不同的细胞抽提物用该抗体进行了Western blot分析,结果表明该抗体可特异识别端粒酶阳性细胞株中的hTERT及端粒酶,为端粒酶及hTERT的检测初步提供了一个简单有效的检测手段。
- SAID A.Saleh孙建龙陈昭黄建生沈先荣张伯生任大明
- 关键词：免疫检测端粒酶
- 不经培养的农田土壤微生物种群构成及系统分类的初步研究被引量：105
- 2002年
- 采用一系列的现代分子生物学技术 ,避开传统的分离培养过程 ,探讨自然界中微生物种群的基因多样性。经过直接从土壤中抽提总DNA ,并对总DNA中 1 6SrDNAV3可变区序列作PCR扩增、变性梯度凝胶电泳等 ,对农田土壤微生物种类分布进行初步的研究 ,发现不同的农田土壤间的菌种差异相当显著 ,同时对部分农田微生物的系统分类作了初步尝试 。
- 陈灏唐小树林洁张伯生任大明
- 关键词：种群构成
- 我国基因工程产品的研究开发概况被引量：2
- 1992年
- 从1953年沃生和克里克阐明DNA双螺旋结构及其遗传学意义后的30多年时间里,遗传学获得了突飞猛进的发展。60年代中期,尼伦伯格(Nirenberg,M.W.)、奥巧阿(Ochoa)、科拉纳(Khorana)等人发现三体遗传密码,确定了遗传密码表。
- 张伯生
- 关键词：基因工程
- 腌制食品中降解亚硝酸盐的乳酸菌分离与鉴定被引量：36
- 2008年
- 从多种传统腌制蔬菜中分离到12株乳酸菌,对它们的16S核糖体基因进行扩增测序,根据序列的同源性鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、沙克乳杆菌(Lactobacillus sakei)和戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)。对其生化特征以及亚硝酸盐耐受性和降解能力进行了研究和比较,最终筛选出1株各项指标优良,且能快速降解亚硝酸盐的植物乳杆菌J-10,该菌降解亚硝酸钠的最适温度为37℃,最适pH值为6.2,在添加0.25 mg/mL的亚硝酸钠的培养液中培养24h后,亚硝酸盐降解率为99.2%。
- 蒋欣茵李晓晖张伯生任大明
- 关键词：乳酸菌腌制蔬菜RDNA亚硝酸钠
