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基质细胞衍生因子在多发性骨髓瘤细胞迁移和黏附中生物学作用的研究被引量：1: 2006年; 目的研究基质细胞衍生因子(SDF-1)在多发性骨髓瘤(MM)细胞迁移、黏附中的生物学作用以及相关信号转导。方法采用流式细胞术检测 MM 细胞系 RPMI8226、XG-1、XG-7细胞黏附分子表达;免疫荧光技术检测 SDF-1对细胞形态以及膜表面黏附分子分布的影响;通过微孔隔离实验检测 SDF-1对 MM 细胞的趋化作用及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在趋化过程中的作用;免疫印迹技术检测 MM 细胞 SDF-1对 PI3K的活化。结果 3种 MM 细胞系不同程度表达多种黏附分子,RPMI8226、XG-7细胞均高表达黏附分子 CD29(>70%)、XG-1、XG-7细胞均高表达 CD44(>80%),XG-7细胞高表达 CD49d(>90%);3种细胞系 CD49e 表达水平均较低(<30%);这些黏附分子表达水平不能被SDF-1α明显上调。SDF-1α可触发 MM 细胞的极化形态建立以及诱导 CD29、CD49e 在细胞膜的重分布。SDF-1α能促进 MM 细胞对内皮细胞的黏附,并能够诱导 MM 细胞的迁移,此作用被 G 蛋白抑制剂 PTX 及 PI3K 抑制剂 wortmannin 明显抑制。结论 SDF-1α促进 MM 细胞对内皮细胞的黏附;并触发MM 细胞的极化形态建立及诱导黏附分子的重分布,从而通过 PI3K 信号途径诱导 MM 细胞的迁移。; 张晓慧傅晋翔张建华张阳敏; 关键词：趋化因子类多发性骨髓瘤细胞迁移细胞黏附

多发性骨髓瘤预后相关性研究: 2005年; 张建华傅晋翔; 关键词：多发性骨髓瘤单克隆免疫球蛋白分子免疫学骨髓瘤细胞预后判断骨病变

胰岛素样生长因子在骨髓瘤细胞生长及存活中的作用: 2006年; 目的研究胰岛素样生长因子-Ⅰ、Ⅱ(IGF-Ⅰ、Ⅱ)在多发性骨髓瘤(MM)细胞XG-7生长及存活中的作用。方法IGF-Ⅰ、Ⅱ作用前后MTT法检测XG-7细胞增殖情况,碘化丙啶(PI)染色法检测对XG-7细胞增殖周期的影响,Annexin-Ⅴ标记检测对XG-7细胞凋亡的影响,流式细胞术(FCM)检测XG-7细胞黏附分子的表达。结果IGF-Ⅰ、Ⅱ均促进XG-7细胞增殖,且呈时间浓度依赖,与IL-6具有部分协同效应;IGF-Ⅰ、Ⅱ促进XG-7细胞进入S期,且可抑制去IL-6及地塞米松诱导的细胞凋亡;IGF-Ⅰ明显上调黏附分子CD29表达,且促进XG-7细胞与内皮细胞黏附。结论IGF体外可以替代IL-6并通过细胞黏附作用促进XG-7细胞增殖和存活,并抑制其凋亡。; 张建华傅晋翔袁育青张阳敏; 关键词：多发性骨髓瘤

骨髓瘤细胞抑制骨髓间充质干细胞向成骨细胞的转化被引量：1: 2007年; 目的:多发性骨髓瘤患者的长期生存率没有得到提高,因此进一步明确多发性骨髓瘤的发病机制并寻找理想的治疗方法是当前研究的重要课题。实验观察多发性骨髓瘤细胞对骨髓间充质干细胞成骨分化的潜能及对其表达核因子κB受体激活剂配体/骨保护蛋白的影响。方法:选择2006-07/2007-06在苏州大学附属第二医院住院的7例多发性骨髓瘤患者,患者经骨髓细胞学检查、血液生化测定及免疫球蛋白定量分析等符合多发性骨髓瘤诊断标准。正常成人骨髓由苏州大学附属第二医院血液科研究生捐献。患者对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。实验方法:常规分离培养两种来源骨髓间充质干细胞,采用直接免疫荧光标记及流式细胞术分析其表面标志。观察两种来源骨髓间充质干细胞在成骨诱导培养条件下向成骨细胞分化的潜能,并在诱导培养的第1天和3周时分别加入RPMI8266或XG7多发性骨髓瘤细胞株,于培养28d后行Von-Kossa及TRAP染色;多发性骨髓瘤细胞与正常骨髓间充质干细胞共培养24h后,应用RT-PCR法检测核因子κB受体激活剂配体/骨保护蛋白的表达。结果:①两种骨髓间充质干细胞形态无明显区别,表型特征相似,均可在成骨诱导培养后向成骨细胞分化。②Von-Kossa染色后提示来源于多发性骨髓瘤患者的骨髓间充质干细胞成骨分化潜能较差,矿化基质沉积较正常来源骨髓间充质干细胞少。两种骨髓间充质干细胞共培养第28天行Von-Kossa染色后,可见矿化基质沉积较不加入多发性骨髓瘤细胞株组明显减少(P<0.001),TRAP染色未发现破骨样细胞的存在。③RT-PCR结果显示,正常骨髓间充质干细胞不表达核因子κB受体激活剂配体,但表达骨保护蛋白,与骨髓瘤细胞共培养后,8226或XG7细胞可明显上调骨髓间充质干细胞表达核因子κB受体激活剂配体,相反骨保护蛋白表达明显受抑。结论:; 胡晓丽冯磊张晓慧张建华李炳宗傅晋翔; 关键词：多发性骨髓瘤成骨

胰岛素样生长因子-I在多发性骨髓瘤中的作用: 2006年; 多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中大量恶性浆细胞增生并伴有广泛溶骨病变为特征的B细胞系恶性肿瘤,好发于老年人,约占人类癌症总发生率的1%～2%,尽管大剂量化疗联合造血干细胞移植已应用于MM,但其仍难以治愈。近年来,细胞因子在多发性骨髓瘤的发生发展中的作用已广为重视,大量研究表明,胰岛素样生长因子-(IGF-)在骨髓瘤细胞的生长、存活、黏附、迁移以及相关的耐药过程中发挥重要作用。本文就IGF-在多发性骨髓瘤中作用及其相关机制作一综述。; 张建华傅晋翔; 关键词：多发性骨髓瘤增殖

不同来源间充质干细胞生物学特征的比较被引量：6: 2007年; 目的:比较脐静脉、成人骨髓及胎儿骨髓3种不同来源的间充质干细胞体外生长特性及分化潜能。方法:①实验于2004-01/2006-06在苏州大学附属第二医院中心实验室完成。孕39～40周健康产妇正常分娩2h的脐带以及3～4月龄流产胎儿均由苏州大学附属第二医院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意。正常成人骨髓由苏州大学附属第二医院血液科研究生捐献。本实验经医学伦理委员会批准。②脐带用含青、链霉素的磷酸盐缓冲液冲净静脉腔内残血,夹闭两端,经37℃预热的1.5g/L胶原酶消化,重悬于DMEM-LG(含体积分数为0.1的新生牛血清、20mmol/LHEPES、2mmol/L L-谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠),以108L-1密度接种于25cm2培养瓶常规培养,48h后弃上清,以后每两三天半量换液,3周后用5g/L胰酶消化传代。③抽取正常成人骨髓5～10mL,ficoll分离单个核细胞,收取白雾层及以上部分细胞,采用上述培养基按相同条件进行培养,约14～18d胰酶消化传代。④取流产胎儿,无菌条件下分离股骨,冲洗干净后采用两种方法分离间充质干细胞:直接将胎骨剪成约1mm3大小的碎片,磷酸盐缓冲液洗涤后加入少量上述培养基,置10cm培养皿培养;剪去股骨两端后,用上述培养基冲出骨髓腔内细胞,直接培养。⑤观察连续传代对3种不同来源间充质干细胞增殖的影响;免疫荧光及免疫组化分析所得细胞的表型;观察3种不同来源间充质干细胞在诱导培养条件下向成骨及成脂细胞分化的潜能。结果:①不同来源间充质干细胞的体外增殖特性:脐带、成人及胎儿骨髓内均存在间充质干细胞,且细胞形态相似。成人骨髓间充质干细胞的体外增殖能力较差,传至10～12代基本失去增殖能力。脐静脉间充质干细胞的增殖能力强于成人骨髓间充质干细胞,可体外连续传代15～18次。而胎儿来源的间充质干细胞增殖能力及体外传代更新能力均�; 傅晋翔张晓惠张建华张阳敏孙谕; 关键词：骨髓脐静脉胚胎间充质细胞

破骨细胞在多发性骨髓瘤发病中的作用被引量：9: 2007年; 目的研究多发性骨髓瘤（MM）细胞对破骨细胞（OC）生成及OC对MM细胞生长与存活的相互作用。方法在不同培养体系中行MM细胞与破骨细胞前体共培养，耐酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色鉴定OC的生成；以RT-PCR检测MM细胞对NF-KB受体激活剂配体（RANKL）／护骨素（OPG）的表达及MM细胞系8226细胞、IL-6依赖性MM细胞系XG1细胞对小鼠原代骨髓基质细胞（pBMSC）表达RANKL／OPG的影响；MM细胞与OC共培养后，采用碘化丙锭（PI）染色，以流式细胞术检测OC对MM细胞增殖周期的影响，Annexin V／PI标记检测OC对MM细胞存活的影响。结果8226及XG1细胞均可直接促进破骨细胞前体向TRAP阳性多个核OC分化。8226、XG1及XG7细胞均不表达RANKL及OPG，8226及XG1细胞促进pBMSC对RANKL的表达，抑制OPG的表达。MM细胞促进OC存活，OC明显促进MM细胞增殖，共培养3d后XG1细胞增殖至（3．8±0．1）×10^9／孔，XG7细胞增殖至（3．9±0．1）×10^5／孔，8226细胞增殖至（4．0±0．1）×10^5／孔，共培养7d后XG1细胞增殖至（8．7±0．1）×10^5／孔，XG7细胞增殖至（9．1±0．1）×10^5／孔，8226细胞增殖至（9．0±0．1）×10^5／孔（P〈0．01）。OC抑制去血清培养诱导的MM细胞凋亡，8226、XG1及XG7细胞与OC共培养后Annexin V^-及PI^-细胞分别为57．71％、82．18％、90．92％（P〈0．01），但对地塞米松诱导的MM细胞凋亡并无拮抗作用。结论MM细胞直接和（或）通过破坏RANKL与OPG之间的平衡间接促进破骨细胞前体向OC分化，OC促进MM细胞生长与存活，从而在MM细胞与OC之间形成恶性循环。; 张建华傅晋翔张晓慧孙谕; 关键词：多发性骨髓瘤破骨细胞护骨素

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张建华

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