张建芝
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 六种支原体单克隆抗体的制备与鉴定
- 2006年
- 目的制备针对临床常见的六种支原体的特异性单克隆抗体,为临床支原体感染检测提供工具。方法用灭活的支原体颗粒免疫BALB/C小鼠,通过传统杂交瘤技术制备抗支原体单克隆抗体,采用6种支原体蛋白以酶联免疫吸附试验(ELISA)进行交叉筛选,并用免疫印记法(WB)对其特异性进行鉴定。结果获得针对生殖支原体、梨形支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、肺炎支原体、穿透支原体的特异性单克隆抗体各1株,经ELISA检测证实具有较好的反应特异性,其中,单抗MG6H1、MPRI ZW1和MPE6G4在WB中也同时分别与生殖支原体、梨形支原体和穿透支原体呈特异反应。结论获得针对6种人体常见感染支原体的不同单克隆抗体,它们在ELISA检测中具较好的反应特异性,有望应用于支原体感染检测。
- 杨文君张建芝李燕张艳丽寿成超
- 关键词：支原体属酶联免疫吸附测定
- 猪鼻支原体P37蛋白相互作用蛋白的筛选与鉴定被引量：4
- 2004年
- 既往工作表明 ,胃癌组织中有较高的猪鼻支原体感染率 ,猪鼻支原体的主要膜蛋白P37能够诱导外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子 (TNF) .为了深入研究P37的作用机制 ,利用酵母双杂交系统筛选与P37蛋白相互作用的蛋白质分子 .首先 ,将编码P37全长的cDNA克隆到 pGBKT7载体中 ,构建“诱饵”表达载体 pGBKT7 p37,以此筛选人胎盘组织cDNA表达文库 .在 2 6× 10 6个克隆中 ,筛选到一株能与P37相互作用的阳性克隆 ,序列测定表明 ,该阳性克隆编码人视网膜色素上皮细胞蛋白 (Norpeg蛋白 ) .在此基础上经GST PullDown实验 ,进一步证实Norpeg蛋白确能与P37相互作用 ,为进一步研究P37对细胞的作用机制奠定了基础 .
- 孙玉宁靳更林张建芝吴健寿成超
- 关键词：酵母双杂交
- 肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65与低密度脂蛋白受体相关蛋白关联蛋白的结合被引量：1
- 2005年
- 目的:寻找与肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白65(cancerandembryoexpressionprotein65,CEP65)相互结合的蛋白分子,为研究CEP65在肿瘤发生中的作用机制提供线索。方法: 以CEP65为诱饵蛋白,通过酵母双杂交方法, 筛选人胚胎组织cDNA表达文库。将获得的阳性克隆cDNA片段分别克隆到原核和哺乳细胞表达质粒,通过GSTpull down和免疫共沉淀对相互作用蛋白作进一步验证。结果: 筛选到能与CEP65相互结合的低密度脂蛋白受体相关蛋白产关联蛋白(lowdensitylipoproteinreceptor relatedprotein associatedprotein1,RAP)。将分别在原核和哺乳细胞中表达的RAP与CEP65进行GSTpull down实验,结果显示,原核表达的GST RAP可以与His CEP65相互结合,而在哺乳细胞共表达的GST CEP65和Myc RAP也能相互结合。结论:RAP可以和CEP65相结合,CEP65有可能通过与RAP相互作用,在肿瘤的浸润、转移及增生中发挥其功能。
- 靳更林张建芝苏荣刘晓颖吴健孟麟寿成超
- 关键词：低密度脂蛋白受体相关蛋白胚胎组织CDNA表达文库哺乳细胞CDNA片段诱饵蛋白
- 四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础。方法构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的最适时间和浓度。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响。结果转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外。四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白。四环素质量浓度在2mg/L并作用60h其表达水平即可达到最高峰。P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用。结论已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型。
- 龚曼曼孟麟刘文斌张建芝寿成超
- 关键词：四环素支原体属细胞系
- 肿瘤及胚胎组织特异表达蛋白CEP65相互作用蛋白的筛选与鉴定
- 2004年
- CEP6 5蛋白 (cancerandembryoexpressionprotein 6 5 )为肿瘤单克隆抗体 3H11所识别的抗原分子 ,RT PCR及RNA印迹检测表明 ,CEP6 5蛋白表达于肿瘤及胚胎组织 .为了研究CEP6 5在肿瘤发生中的作用机制 ,以CEP6 5为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂交体系筛选人胚胎组织cDNA表达文库 .从 5 2× 10 6个克隆中筛选得到 14个阳性克隆 ,并在酵母体系中通过不同方法得到验证 .在此基础上 ,选取在双杂交中作用明显的 5 1号克隆 ,与CEP6 5作GSTpull down实验 ,结果证明 ,CEP6 5与 5 1号阳性克隆蛋白确能相互作用 .生物信息学分析发现 ,CEP6 5与 5 1号阳性克隆蛋白相互作用 。
- 靳更林孙玉宁张建芝马泓孟麟吴健寿成超
- 关键词：单克隆抗体酵母双杂交体系相互作用
- MasPin在食管癌中表达的临床意义及作用机制研
- 目的:masPin基因被认为是一种肿瘤抑制基因,在肿瘤的生长、迁移、侵袭方面起着重要作用,但其作用靶点至今仍不清楚,且在食管癌中国内外尚无系统的研究.本研究的目的是研究MasPin蛋白在食管癌组织中的表达及其与患者病理、...
- 王洋张建芝方芳杨跃
