张昭
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第四军医大学药学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Annexin A2介导DDR2过分泌MMPs的分子机制及其在RA滑膜侵袭中的作用研究
- 本研究中首次提出ANXA2在DDR2介导MMP分泌及促进RA FLS细胞侵袭和软骨破坏过程中发挥重要作用。该研究结果完善和补充了DDR2-MMPs通路中关键环节和关键分子，为进一步阐明RA中晚期病变的发病机制及新的药物靶...
- 赵薇张昭黄同列徐玉金舒震薛晓畅张英起张伟
- 关键词：类风湿性关节炎滑膜细胞免疫调节
- 类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞中膜联蛋白A2磷酸化修饰增强基质金属蛋白酶9的活性被引量：3
- 2015年
- 目的研究膜联蛋白A2(ANXA2)磷酸化修饰对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RAFLS)基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9水平及活性的影响。方法原代培养RAFLS,构建包装ANXA2干涉慢病毒,制备ANXA2显著下调的FLS(si ANXA2/FLS)及同型对照作为细胞模型,采用2型胶原蛋白刺激法间接磷酸化RAFLS中的ANXA2。实时定量PCR(qRT-PCR)分析ANXA2磷酸化对RAFLS细胞中MMP-2和MMP-9表达的影响,明胶酶谱实验观察ANXA2活化对RAFLS中MMP-2和MMP-9活性的影响。结果 qRT-PCR结果提示ANXA2磷酸化修饰对RAFLS中MMP-2和MMP-9的水平无显著影响,明胶酶谱实验显示ANXA2磷酸化修饰能够增强MMP-9的活性。结论通过胶原蛋白刺激法间接促进RAFLS中ANXA2的磷酸化修饰,显著增强MMP-9的活性。
- 赵薇穆楠舒震张昭张伟
- 关键词：类风湿性关节炎膜联蛋白A2基质金属蛋白酶9明胶酶谱
- 重组质粒pFLAG-CMV2-FcDDR2的构建及应用
- 2015年
- 目的构建人盘状结构域受体2(DDR2)与IgG Fc段嵌合受体的重组质粒(pFLAG-CMV2-Fc DDR2),检测其自主磷酸化水平。方法设计Fc DDR2克隆引物,以质粒pSec Tag2B-Fc DDR2为模板,PCR扩增IgG Fc段与DDR2跨膜区和胞内区的c DNA序列(Fc DDR2),将其插入pFLAG-CMV2真核表达载体中。PCR扩增鉴定并测序验证重组质粒pFLAG-CMV2-Fc DDR2后,将其转染人胚肾HEK293T细胞,Western blot法验证HEK293T细胞中目标蛋白Fc DDR2的表达效率。将pcDNA3.1-DDR2转染HEK293T细胞,给予2型胶原蛋白刺激后作为阳性对照,用小鼠来源抗DDR2抗体免疫沉淀`pFLAG-CMV2-Fc DDR2阳性的HEK293T细胞及胶原刺激的pcDNA3.1-DDR2阳性的HEK293T细胞,4G10抗体分析DDR2的磷酸化水平,评价Fc DDR2的自主磷酸化能力。结果重组质粒pFLAG-CMV2-Fc DDR2的PCR扩增产物为大小约2800 bp左右的片段,与预期相符,测序验证正确。Western blot结果提示pFLAG-CMV2-Fc DDR2转染后的HEK293T细胞,FLAG-Fc DDR2表达水平显著上调。免疫沉淀结合Western blot分析提示FcDDR2的磷酸化水平与胶原刺激后的DDR2水平相当。结论成功构建了pFLAG-CMV2-FcDDR2真核表达载体,Fc DDR2的自主磷酸化与胶原蛋白刺激后DDR2的活化水平相当,可以用作DDR2经胶原蛋白刺激后的活化替代形式。
- 赵薇张昭黄同列穆楠田菲张伟
- 关键词：重组质粒磷酸化
- 重组人胸腺素β4二串体蛋白的原核表达、纯化及生物活性被引量：1
- 2012年
- 目的:获得具有生物学活性的重组人胸腺素β4二串体蛋白(Tβ4②)。方法:人工合成人Tβ4全长基因,构建Tβ4②基因,并将该基因克隆入载体pET-22b(+)中,转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经疏水作用层析纯化重组Tβ4②蛋白,采用Western印迹鉴定表达产物,并对其进行生物活性检测。结果:表达和纯化了Tβ4②蛋白,重组人Tβ4②在体外可促进人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移。结论:重组人Tβ4②具有与化学合成Tβ4相同的功能,并有更高的生物学活性。
- 徐天娇张昭舒震徐玉金赵薇李萌张伟张伟
- 关键词：胸腺素Β4纯化活性检测
- 十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞功能的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:观察十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞株HUVEC增殖、周期、迁移及小管形成的影响。方法:用不同浓度(0、1、5、10、50、100μg/mL)的BPC-157作用于HUVEC细胞株,采用MTT法检测药物对内皮细胞增殖的影响,通过流式细胞仪观察细胞周期的变化,经细胞划痕和Transwell实验检测药物对内皮细胞迁移的影响,并且通过小管形成实验观察BPC-157对内皮细胞小管形成能力的影响。结果:HUVEC细胞株经BPC-157刺激48 h后,细胞增殖率和各时期细胞比例没有明显变化;而在刺激12 h时,BPC-157显著性促进细胞伤口愈合及穿膜细胞数的增加(P<0.01);刺激8 h时,给药组细胞开始聚合,形成复杂的管状网络结构,特别是5μg/mL剂量组。结论:十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞株HUVEC增殖及细胞周期的改变基本没有影响,但对内皮细胞的迁移及小管形成能力具有明显的促进作用。
- 黄同列张昭舒震徐玉金赵薇张存张伟张伟
- 关键词：人脐静脉内皮细胞增殖细胞周期迁移小管形成
- 一种新型抗纤维化小肽AcSDKP的构建及活性初步研究
- 2012年
- 目的:以D型氨基酸替代的方式构建一种能抵抗血管紧张素转化酶(ACE)降解的异构体小肽AcSDKP,并对其抗纤维化活性进行初步研究,以期为AcSDKP在抗纤维化方面的应用提供依据。方法:用HPLC法检测D型氨基酸替代方式构建的AcSDKP异构体抗ACE降解的能力;用MTT法检测AcSDKP异构体对小鼠成纤维细胞L929和原代培养的心脏成纤维细胞增殖的影响;用流式细胞术检测AcSDKP异构体对骨髓干细胞(BMSC)向巨噬细胞分化的影响。结果:AcSDKP异构体均能抗ACE降解,能抑制L929细胞和心脏成纤维细胞增殖,能抑制BMSC向巨噬细胞分化。结论:构建了能抵抗ACE降解,在体外能抑制成纤维细胞增殖、巨噬细胞分化的AcSDKP异构体小肽,为该小肽进一步的体内研究及应用奠定了基础。
- 张昭黄同列徐天娇赵薇李萌张伟张伟
- 关键词：异构体抗纤维化骨髓干细胞心脏成纤维细胞
- 抗纤维化Ac-SDKP异构体:改善小鼠心肌梗死后心室重构（英文）
- 2015年
- 本文主要目的是研究体外合成的Ac-SDKP异构体抗血管紧张素转化酶(ACE)降解的特性及其对心梗后心室重构的影响。我们通过D型氨基酸替代Asp和Lys的方式制备了一个Ac-SDKP小肽的异构体Ac-SDDKDP(中国发明专利ZL201110436671.9),并通过建立心肌梗死小鼠动物模型,培养心肌成纤维细胞,结合流式细胞仪,qRT-PCR,Western Blots等技术评估Ac-SDDKDP对梗死心肌的保护作用。结果发现,Ac-SDDKDP使Ac-SDKP的半衰期从数分钟延长至2小时。AcSDDKDP主要通过抑制梗死心肌中巨噬细胞的旁路激活(Alternative activation,M2),减少TGF-β1、ARG I、胶原蛋白I等一系列分子的分泌来发挥抗纤维化的功能。与对照组小鼠左室短轴缩短率(FS)11.2±6.2相比,Ac-SDDKDP组FS为23.0±7.8,Ac-SDKP组FS为11.7±5.3(P<0.05)。结论:该研究证实Ac-SDKP异构体Ac-SDDKDP通过抑制梗死心肌中巨噬细胞的旁路激活(M2),减少TGF-β1、ARGI分泌发挥治疗缺血性心脏病的药用潜能。
- 陈建辉马晓雯张昭张英启苑媛李萌
- 关键词：抗纤维化心肌梗死心衰异构体心室重构
- 抗血管紧张素转化酶降解的AcSDKP异构体的筛选和活性研究
- 目的：
AcSDKP是一个氮端乙酰化的内源性四肽，主要由它的前体物胸腺素β4经由脯氨酰寡肽酶（POP）水解而释放。在血液中的浓度一般为纳摩尔级。AcSDKP是一种多功能性生理调控因子，具有多种生物学活性，如抑制心...
- 张昭
- 关键词：ACSDKP骨髓干细胞心脏成纤维细胞抗纤维化
- 文献传递
