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大鼠复发性实验性自身免疫性葡萄膜炎眼部炎症和病理特征分析被引量：4: 2013年; 背景目前用于自身免疫性葡萄膜炎的实验研究动物模型多为单次发作性葡萄膜炎，与临床上自身免疫性葡萄膜炎患者反复发作导致的眼部严重组织形态学和功能学改变的自然病程并不完全相符。建立复发性实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型对临床研究具有重要意义。目的建立大鼠复发性EAU动物模型，动态观察眼部炎症和病理特点，并分析其眼部白细胞介素-17（IL-17）的表达。方法采用光感受器间维生素A类结合蛋白1177—1191多肽片段（IRBP1177—1191，R16）注射于9只SPF级Lewis大鼠皮下进行免疫，10d后分离淋巴结及脾脏T细胞，体外R16刺激下培养2d。将24只SPF级Lewis大鼠按随机数字表法分为正常组和造模后1、2、3个月组，每组6只。将制备的T细胞悬液通过尾静脉注射法注入模型组大鼠体内，建立复发性EAU模型。注射后每天在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部炎症表现，依据Caspi炎症反应分级标准进行评分。分别于造模后1、2、3个月处死动物后制备视网膜切片，并行苏木精-伊红染色，观察视网膜组织中炎性细胞浸润情况和视网膜厚度的改变；采用免疫组织化学法检测IL-17A在各组大鼠视网膜中的表达，并计算阳性表达的评分。结果R16特异性T细胞注射后第4天大鼠前房出现不同程度的混浊，炎症评分为2分。第6天前房重度混浊，评为3分；至第10天大鼠眼前节恢复正常，但造模后2个月内炎症复发4—5次，且大鼠一侧眼发病而对侧眼可正常，与人自身免疫性葡萄膜炎的自然病程极为相似。视网膜组织病理学检查发现，造模后1、2、3个月组随着注射时间的延长，炎性细胞浸润逐渐减少。与正常组大鼠比较，造模后1、2、3个月组大鼠视网膜全层、外核层及内核层逐渐变薄，4个组间的总体比较差异均有统计学意义（F=20．46、288．40、4．43，均P=0．00）；正常; 郑慧张晓敏粘红张灵君刘勋Hui Shao李筱荣; 关键词：葡萄膜炎免疫动物模型

补体系统在实验性自身免疫性葡萄膜炎中对T细胞的调节作用: 实验目的：　　1.最近的研究结果表明，通过抑制补体系统的活性可以有效用于治疗T细胞介导的自身免疫性疾病。然而，在自身免疫性葡萄膜炎（experimental autoimmune uveitis，EAU）中，补体过敏毒素...; 张灵君; 关键词：自身免疫性葡萄膜炎 T淋巴细胞补体激活凝集素

尾静脉注射骨髓间充质干细胞对小鼠视网膜激光损伤后细胞凋亡的影响被引量：4: 2013年; 目的观察尾静脉注射骨髓间充质干细胞（MSCs）对小鼠视网膜激光损伤后细胞凋亡的影响。方法体外培养绿色荧光蛋白（GFP）标记的C57BL／6小鼠骨髓间充质干细胞（GFP-MSCs）。135只C57BL／6小鼠随机分为正常对照组、损伤对照组和MSCs治疗组，分别为15、60、60只。采用激光光凝方式建立视网膜激光损伤模型。激光光凝后1d，MSCs治疗组小鼠尾静脉注射0．2mlGFP-MSCs细胞悬液（含MSCs1×106个），损伤对照组小鼠尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液。分别于激光光凝后3、7、14、21d，处死各组小鼠并摘除眼球。采用苏木精一伊红（HE）染色观察视网膜组织形态，并用图像处理软件测量激光斑直径和外核层光感受器细胞核完全缺损区域直径；原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况；荧光显微镜观察MSCs治疗组GFP-MSCs的迁移情况。结果光学显微镜观察发现，正常对照组视网膜组织结构完整；损伤对照组及MsCs治疗组均可见视网膜组织结构损伤，但MSCs治疗组较损伤对照组损伤程度减轻。激光光凝后3d，损伤对照组与MSCs治疗组激光斑直径比较，差异无统计学意义（t=0．964，P〉0．05）；MSCs治疗组外核层细胞核完全缺损区域直径小于损伤对照组，差异有统计学意义（t=5．769，P〈0．05）。激光光凝后7、14、21d，MSCs治疗组激光斑直径（t=5．180、5．417、2．381）和外核层细胞核完全缺损区域直径（t=3．530、3．224、3．162）均小于损伤对照组，差异均有统计学意义（P〈O．05）。激光光凝后3、7、14、21d，正常对照组小鼠视网膜内均未见凋亡细胞；损伤对照组及MSCs治疗组小鼠损伤部位视网膜内可见凋亡细胞；MSCs治疗组平均细胞凋亡数均小于损伤对照组，差异均有统计学意义（t=11．142、7．479、6．678、3．953，P〈0．05）。荧光显微镜观察发现，激光光凝后3、7、14、21d均�; 蒋元丰张晓敏张琰张丽娟张灵君刘勋李筱荣; 关键词：间质干细胞移植视网膜病理生理学细胞凋亡

间充质干细胞对实验性复发自身免疫性葡萄膜炎作用的研究: 目的葡萄膜炎是常见的致盲性眼病,病因及发病机制复杂,多种类型反复发作,治疗棘手。实验性复发自身免疫性葡萄膜炎动物模型（recurrent experimental autoimmune uveitis, rEAU）具有与...; 张灵君; 关键词：间充质干细胞 T淋巴细胞增殖 TH17细胞流式细胞分析; 文献传递

间充质干细胞对实验性自身免疫性葡萄膜炎眼部CD4＋T细胞亚群浸润的影响被引量：1: 2013年; 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞（MsCs）对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）的治疗效果。方法Lewis大鼠12只随机分为对照组与治疗组，均为6只大鼠。大鼠单后足及背部6点注射含30μg光感受器间维生素A类结合蛋白多肽片段R16的乳剂0．2m1，建立EAU模型，观察各组临床表现。贴壁培养法纯化Wistar大鼠骨髓MSCs。建模后第9～11天，治疗组每日行尾静脉注射浓度为5×10^6／ml的MSCs悬液1ml，对照组注射等体积磷酸盐缓冲液。建模后第15天，分离各组大鼠眼部细胞，通过流式细胞仪检测干扰素-7、白细胞介素-17和叉状头螺旋转录因子3阳性细胞的比例。采用混合线性模型进行重复测量资料的方差分析统计临床评分；独立样本t检验统计流式细胞检测结果。结果建模后第6天，虹膜血管轻度扩张充血；第9天前房轻度混浊，瞳孔缩小，对光反射消失；第12天前房混浊，瞳孔膜闭，眼底红光反射变暗甚至消失；之后炎症反应逐渐减轻。第11～15天，MSCs治疗组临床评分明显低于对照组，差异有统计学意义（t=2．42、2．21、4．16、5．24、4．03，P〈0．05）。流式细胞仪检测结果显示，MSCs治疗可以显著减少眼部CD4＋T细胞、Th1细胞和Th17细胞比例以及增加调节性T细胞比例。结论MSCs治疗可以减轻EAu的临床表现；减少CD4＋ T细胞向眼部浸润，下调眼部效应性Th1细胞、Th17细胞以及上调调节性T细胞。; 张灵君张晓敏郑慧张琰邵慧李筱荣; 关键词：葡萄膜炎间质干细胞 CD4阳性T淋巴细胞

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张灵君

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