晁彦杰
- 作品数：18 被引量：84H指数：6
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- CSFV猪瘟病毒NS3非结构蛋白结构模型的建立
- 黄病毒科家族分为三个病毒属:黄病毒属、丙型肝炎病毒属和瘟病毒属,其中前两个病毒属里包括了一些主要的人类病原体,后一个属为动物的病原体。该科的 NS3蛋白是一个非常重要的多功能非结构蛋白,具有三种酶的活性,前三分之一区域 ...
- 徐卓菲司有辉何雁南晁彦杰钱平陈焕春
- 文献传递
- 牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用被引量：28
- 2007年
- 为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景。
- 张书环杨俊兴晁彦杰颜邦芬吴波曹莎陈颖钰谭亚娣陈焕春郭爱珍
- 关键词：免疫层析牛分支杆菌牛结核抗体检测
- 牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立被引量：15
- 2007年
- 以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒（IDEXX）平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%（351/380）。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。
- 颜邦芬陈锃张书环林祥梅陈颖钰晁彦杰李德学宋念华陈焕春郭爱珍
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒ELISA原核表达
- 牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立被引量：22
- 2007年
- 实验旨在建立牛重组IFN-γ（BovIFN-γ）的ELISA检测技术，为牛传染病的免疫学诊断提供新方法。PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞，从培养细胞中提取总RNA，经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA，进一步克隆至pET28a，转化大肠杆菌，经IPTG诱导，表达出预期大小（18kD左右）组氨酸标记蛋白，经鉴定为BovIFN-γ；以纯化的重组BovIFN-γ为免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，获得4株能稳定分泌抗BovIFN-γ单克隆抗体的细胞株，分别命名为A7、A10、G6与G10。免疫球蛋白亚类鉴定证明杂交瘤细胞所分泌的抗体均为IgG1，腹水效价在1：2^10×100～1：2^11×100之间。Western-blot分析显示，4株单抗均能特异性结合重组BovIFN-γ。ELISA试验表明，4株单抗只与融合蛋白BovIFN-γ反应，而不与非相关性蛋白Ag85B、ESAT-6-CFP-10、GM-CSF等发生反应。选取A10细胞株分泌的单克隆抗体、纯化的多克隆抗体及辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗免IgG，建立了检测BovIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法。实验结果表明，此方法检测敏感性达到2ng／mL，特异性良好，为进一步建立灵敏、特异的病原感染诊断方法奠定了基础。
- 李川谭亚娣陈颖钰胡巧云马艳张桂荣钦博晁彦杰陈焕春郭爱珍
- 关键词：单克隆抗体ELISA克隆
- 一种适用于牛结核抗体检测的试剂盒及应用
- 本发明属于动物免疫学技术领域。公开了一种适用于牛结核检测试剂盒及其制备方法，所述的试剂盒，包含盒体、设在盒体内的V形底96孔反应板、牛结核分支杆菌野毒感染标准阳性血清、健康牛阴性血清、血清稀释液和1％致敏绵羊红细胞悬液。...
- 谭亚娣胡巧云晁彦杰钦博张桂容陈焕春张书环
- 文献传递
- 检测牛结核抗体的免疫胶体金试纸条及制备方法
- 本发明属于动物细菌学与动物传染病学技术领域。具体涉及一种检测牛结核抗体的免疫胶体金试纸条及其制备方法。本发明的试纸条是由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬组装而成。在PVC背衬上按顺序依次粘附有样品垫、结合...
- 郭爱珍张书环陈焕春谭亚娣晁彦杰陈颖钰钦博吕文匡有吉
- 文献传递
- 人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用被引量：4
- 2008年
- 本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法,用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFN-γ基因,利用纯化的重组IFN-γ免疫小鼠,获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测人IFN-γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到31.25pg/mL。采集111位结核病阳性病人与292位临床健康对照者肝素抗凝全血,利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA及商品化试剂盒平行检测所有样本,结果表明两种方法的检测结果相符。结核患者的检测灵敏度为95.5%,健康对照的阳性检出率为16.7%,患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P<0.01),证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高,具有良好的应用前景。
- 陈颖钰邓铨涛詹枝华郭爱珍项杰陈军周金海曾庆志杜义祥魏武童庆伟晁彦杰匡有吉陈焕春
- 关键词：结核病IFN-ΓELISA
- 基于结核菌素与CFP10/ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究被引量：8
- 2008年
- 本研究通过比较三种刺激物(牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核菌特异性抗原CFP10/ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景。无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液,肝素抗凝。每1mL全血与1mLRPMI1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL(20μg)PHA(阳性对照孔)、0.1mL(20μg PHA)CFP10/ESAT6融合蛋白、0.1mL(2000U)牛结核菌素(PPD/B)、0.1mL(2500U)禽结核菌素(PPD/A)或等量PBS(无刺激阴性对照),37℃培养过夜。次日用夹心ELISA法检测各刺激组0.1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度。结果,特异性抗原CFP10/ESAT6刺激组与牛结核菌素(PPD/B)刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性,相关系数为0.84。但CFP10/ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应(以两刺激组IFN-γ浓度差值表示)间无相关性,相关系数为-0.11。分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应。以OD630=0.17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10/ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应(以OD值差值表示)检出14头,禽PPD阳性反应3头。扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0.54。结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高。当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时,应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛。而基于CFP10/ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆菌的影响,检测具有良好的特异性与敏感性。
- 陈颖钰邓铨涛郭爱珍晁彦杰匡有吉匡有吉陈焕春
- 关键词：牛结核牛结核菌素CFP10ESAT6
- 牛型分枝杆菌MPB70蛋白胶乳凝集方法的建立及应用被引量：11
- 2007年
- 为了研究牛结核病新型诊断试剂,提高诊断的特异性和敏感性,我们用大肠杆菌工程菌表达了牛型分枝杆菌特异性抗原MPB70并提纯蛋白建立了牛结核病乳胶凝集试验(LAT)诊断方法。MPB70是一种牛型分枝杆菌特异性分泌而卡介苗BCG缺失的蛋白质,热稳定性好,用此蛋白建立的乳胶凝集方法具有良好的敏感性、特异性以及较长的保存期,检测70份临床奶牛血清,与皮内变态反应和间接血凝方法相比较分别具有71.4%和88.6%的符合率。该方法还可鉴别诊断自然感染和疫苗免疫接种。我们建立的牛型分枝杆菌MPB70蛋白乳胶凝集试验诊断方法将分子生物学手段和经典试验方法有机结合,为临床快速检测牛结核病血清特异性抗体水平提供了行之有效的方法,。
- 钦博万学济胡巧云喻正军晁彦杰郭爱珍陈焕春谭亚娣
- 关键词：牛型分枝杆菌牛结核病MPB70胶乳凝集间接血凝
- 人和动物结核病新型特异诊断试剂
- 陈焕春詹枝华项杰曾庆志周金海张书环涂玲玲刘颖郭爱珍凌洁玉邓铨涛晁彦杰匡有吉廖娟红吴波于清龙刘冬光陈颖钰熊家军陈军胡长敏杨利国
- 该研究成功研制了适于牛结核与梅花鹿结核的牛结核快速检测胶体金试纸条，适合于牛和梅花鹿的高通量检测ELISA试剂盒，和人、牛、梅花鹿结核高准确度检测IFN-γ试剂盒。通过临床评价证实其具有较高的灵敏度与特异性，且分别适合于...
- 关键词：
- 关键词：结核病
