曹广祥
- 作品数：37 被引量：16H指数：2
- 供职机构：山东省医药生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程文化科学更多>>
- 转录组分析棒状链霉菌F613-1高产克拉维酸的分子基础被引量：2
- 2017年
- 旨在探究S.clavuligerus工业菌株高产克拉维酸(CA)的分子基础。采用转录组高通量测序,对比标准菌株和高产CA的工业菌株F613-1之间的基因转录水平差异,结合菌株表型差异进行综合分析。结果表型比较显示,F613-1在固体培养基中生长速度、气生菌丝形态、孢子形成等方面与标准菌株存在差异。液体摇瓶培养中,菌体生长速度无明显变化,但F613-1的糖消耗量显著降低,同时CA产量比ATCC27064提高约11.7倍。转录组分析显示,F613-1中CA基因簇及其途径特异性调控基因的表达量显著升高,其副产物全霉素基因簇的表达量显著下降;CA合成原料精氨酸和3-磷酸甘油醛代谢相关基因的转录水平发生显著变化,精氨酸合成代谢基因上调,而3-磷酸甘油醛分解代谢基因下调;ABC转运系统中80多个基因的转录水平也发生明显变化,其中42个显著上调,38个显著下调。工业生产菌株高产克拉维酸的主要原因是CA基因簇及其调控基因表达量的升高、相关副产物基因簇的沉默及CA合成原料精氨酸和3-磷酸甘油醛的积累。
- 覃荣活付加芳宗工理王志宇曹广祥
- 关键词：棒状链霉菌转录组克拉维酸
- 畜禽养殖场附近污水中多粘菌素E耐药性肠杆菌的分离分析及内源质粒检测
- 2017年
- 畜禽养殖业大量使用抗生素引起了广泛的微生物耐药性问题,研究抗生素耐药菌株可以了解环境中细菌的耐药性情况和抗性基因的传播机制。采集畜禽养殖场周边的污水,分析了污水中多粘菌素E耐药性细菌和耐药性肠杆菌的丰度;同时以一株具有较高多粘菌素E耐药水平的肠杆菌R11为例,首先进行16S r DNA测序和抗生素耐药谱分析,然后通过质粒提取、酶切电泳以及脉冲场凝胶电泳(PFGE),分析其内源性质粒等情况。结果表明:在畜禽养殖场周边污水环境中,多粘菌素E耐药性细菌占细菌总数的0.14%~0.35%,多粘菌素E耐药性肠杆菌占肠杆菌总数的1.50%~7.40%,而肠杆菌占细菌总数的1.13%~2.45%,说明肠杆菌可能是携带多粘菌素E抗性基因的主要细菌种类,同时也是养殖业污水中细菌的主要组成部分。16S r DNA序列分析确定R11是一株Enterobacter cloacae,抗生素耐药谱分析R11具有多重耐药性,除对林可霉素敏感外,阿米卡星、四环素和环丙沙星的最小抑菌浓度(MICs)为10μg?m L^(-1),阿莫西林的MICs为25μg?m L^(-1),磺胺甲恶唑的MICs为32μg?m L^(-1),氨苄西林的MICs为40μg?m L^(-1),链霉素的MICs为90μg?m L^(-1),而多粘菌素E的MICs最高,达到96μg?m L^(-1)。质粒提取酶切和PFGE分离鉴定结果显示,R11菌株可能有多个内源性质粒。综上所述,R11菌株具有较高水平的多粘菌素E耐药性,并且具有多重耐药性和多个内源性质粒,对于研究多粘菌素E耐药性机制具有一定的参考价值。
- 钟传青宗工理张超付加芳姜天翼曹广祥
- 关键词：畜禽养殖场肠杆菌多粘菌素E多重耐药性质粒
- 一株高效积累多聚磷酸盐的积磷小月菌工程菌及其应用
- 本发明公开了一株高效积累多聚磷酸盐的积磷小月菌工程菌，为积磷小月菌(Microlunatus？phosphovorus)JN459-M571，于2015年12月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编...
- 钟传青曹广祥
- 文献传递
- 重组人骨靶向干扰素γ-1b在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2019年
- 目的建立人骨靶向干扰素γ-1b的高效原核表达体系。方法从Drug Bank数据库下载人干扰素γ-1b氨基酸序列,在羧基端加上10个天冬氨酸标签作为骨靶向分子。采用大肠杆菌偏爱密码子,DNA Star软件分析获得骨靶向性干扰素γ-1b的基因序列。人工合成基因序列并克隆入pET3c质粒表达载体。将上述pET3c-rhIFNγ-1b-D10重组表达载体转入大肠杆菌BL21,筛选高效表达菌株。分离包涵体,8mol/L尿素溶解,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白。Western blot检测目的蛋白的特异性表达。结果测序结果显示所克隆的骨靶向rhIFNγ-1b基因序列正确,筛选出高效表达菌株。经SDS-PAGE显示在相对分子质量19KD处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的30%。表达产物以包涵体形式存在,8mol/L尿素变性后经镍柱亲和层析纯化,纯度大于90%,浓度为0.8mg/mL。Western检测显示在19KD处出现特异性目的条带。结论成功在大肠杆菌中表达了人骨靶向干扰素γ-1b,为研究其生物学活性及用于骨硬化症的治疗奠定基础。
- 王志宇曹广祥曹广祥宗工理付加芳王世立
- 关键词：原核表达纯化骨硬化症
- 一种新型蛋白质表达系统U2‑OS及其应用
- 本发明提供了一种高分泌性二聚体糖蛋白hBMP‑7的癌细胞表达系统，利用癌细胞U2‑OS快速增殖及糖基化修饰系统的特性，通过基因工程技术利用人源癌细胞表达人骨形态发生蛋白hBMP‑7。本发明构建氨基末端含不同信号肽的重组表...
- 付加芳王世立曹广祥宗工理薛俊英
- 文献传递
- 双组分转导系统CNX_RS34865/CNX_RS34870对安丝菌素生物合成的调控机制研究
- 2022年
- 目的探究珍贵束丝放线菌(Actinosynnema pretiosum)中双组分转导系统CNX_RS34865/CNX_RS34870对A.pretiosum中安丝菌素P-3(AP-3)生物合成的调控机制。方法本研究以A.pretiosum X47菌株为出发菌株,构建双组分转导系统CNX_RS34865/CNX_RS34870中调控基因CNX_RS34870的缺失突变菌株;利用HPLC分析及生物活性测定分析出发菌株X47与CNX_RS34870突变菌株(ΔRS34870)的AP-3产量差异;利用转录组测序分析菌株之间各基因的转录水平差异,分析CNX_RS34870对菌株AP-3生物合成的影响及作用机制。结果与出发菌株X47相比,ΔRS34870菌株在液体发酵条件下AP-3生物合成量显著下降,在第6天时,ΔRS34870菌株AP-3产量降低了36.94%。转录水平分析显示ΔRS34870菌株中1524个基因的转录较X47明显不同,其中AP-3生物合成基因簇中的asm1、asm2、asm30、asm32、asm33、asm34、asm35和asm37基因以及与初级代谢中与AP-3前体合成相关的pgk基因出现了显著下调。结论CNX_RS34870是菌株AP-3生物合成的正调控基因,可通过调控AP-3生物合成基因簇的转录以及影响初级代谢从而影响AP-3的产生。本研究将为了解AP-3生物合成的调控网络以及工业菌株的遗传改造提供理论指导。
- 张堃钰张佩佩付加芳付加芳宗工理马欣宗工理曹广祥
- 关键词：生物合成转录组测序
- 积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合
- 2018年
- 【背景】积磷小月菌(Microlunatus phosphovorus)是重要的聚磷微生物,在好氧条件下积累聚磷酸盐并在厌氧条件分解聚磷酸盐,这个过程可能受到精细的基因调控。【目的】利用凝胶迁移实验(EMSA)分析调控蛋白Mlp21700结合的多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子,找到Mlp21700可能的调控靶点。【方法】以积磷小月菌JN459菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增Mlp21700编码序列,构建重组质粒p ET28a-21700并转化到大肠杆菌Transetta(DE3)菌株,诱导表达后采用非变性方法纯化获得Mlp21700融合蛋白。利用PCR方法分别扩增各个Poly-P代谢基因的启动子,用生物素标记后作为探针。采用EMSA分析Mlp21700在试验条件下是否结合启动子以及结合强度。【结果】DNA测序和酶切验证表明p ET28a-21700携带正确的Mlp21700编码序列。SDS-PAGE分析显示试验条件下Transetta(DE3)菌株大量表达可溶性Mlp21700,纯化的重组Mlp21700蛋白纯度大于90%,含量为0.64 mg/mL。EMSA分析表明在试验条件下Mlp21700能够结合Mlp26610基因ppgk和Mlp44770基因ppx的启动子。【结论】调控蛋白Mlp21700可能参与Mlp26610和Mlp44770基因的转录调控,进而调控Poly-P的分解过程。
- 钟传青王静宗工理姜天翼曹广祥
- 关键词：多聚磷酸盐调控蛋白启动子
- 分枝杆菌Ⅶ型分泌系统的研究进展
- 2018年
- Ⅶ型分泌系统是近年来新发现的一种新型、特殊的分泌系统,最先在结核分枝杆菌中发现.Ⅶ型分泌系统负责分枝杆菌的毒力蛋白分泌,介导分枝杆菌与宿主间发生相互作用,并参与分枝杆菌体内锌铁平衡等,在分枝杆菌的生长代谢及致病过程中发挥重要作用.本文从Ⅶ型分泌系统的基因组成与类型、分泌底物、转运机制及其与菌株致病性的关系等方面,对分枝杆菌Ⅶ型分泌系统的研究进展进行简要综述,为发展用于疾病诊断、治疗和预防的新策略提供依据.
- 付加芳王志宇张佩佩宗工理曹广祥
- 关键词：分枝杆菌基因结构分泌机制
- 一种超表达内源性溶菌酶的菌株的构建方法及构建的菌株与应用
- 本发明公开了一种超表达内源性溶菌酶的菌株的构建方法，步骤如下：首先构建内源性溶菌酶的超表达载体，然后将超表达载体通过接合转移转入至出发菌株中，筛选得到内源性溶菌酶超表达的基因工程菌。本发明采用超表达技术，通过高表达内源性...
- 钟传青曹广祥付加芳宗工理
- 文献传递
- 大学生专业创新能力培养与第二课堂建设被引量：2
- 2014年
- 高校教育工作者应注重对当代大学生创新能力的培养,提高其综合能力。教师需要尊重学生的思维方式和新想法、新创意,主动地去引导,鼓励学生的创新思维。本文探讨如何合理利用第二课堂,提高学生自主创新的积极性,为学生提供学习、交流、创新的机会和平台,同时拓展学生视野,激发大学生内在潜能,提高学生综合素质,满足现代社会对创新型人才的需求。
- 曹广祥姜媛媛钟传青
- 关键词：第二课堂教学改革
