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蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建: 2012年; 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统,并连续传代,检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4;含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代,系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。; 唐波杜娟杨力侠王小海吴海波吴勇延郭泽坤; 关键词：SUMO 原核表达 OCT4 SOX2

人工锌指蛋白的筛选系统的构建及其在牛β酪蛋白基因上的应用: 锌指核酸酶（Zinc-finger nucleases, ZFNs）是一种人工设计的限制性内切酶，由DNA识别结构域（由一系列Cys2His2锌指蛋白串联组成）和一个非特异性核酸内切酶FokI两部分组成，被广泛应用于动物...; 杨力侠; 关键词：锌指蛋白酵母单杂交; 文献传递

一种筛选锌指蛋白的筛选系统: 本发明公开了一种筛选锌指蛋白的筛选系统，包括两个报告载体pReport-N1-LacZ、pReport-N2-EGFP和一个激活载体pAD-RNAP-alpha-GAL4。通过构建三种元件的配合，构建两套筛选系统，利用三...; 杨力侠王小海郭泽坤张涌; 文献传递

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杨力侠