王小海
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 猪苓发酵液抑菌活性物质的性质研究被引量：5
- 2009年
- 研究猪苓发酵液中抑菌活性成分的性质,以期将为猪苓的药用机理的研究提供部分理论依据。以大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、热带假丝酵母、酿酒酵母、小麦赤霉为靶标菌,研究发酵液的抑菌作用;用不同极性有机溶剂萃取活性物质,检测萃取液抑菌效果;并探索了不同温度和pH下对发酵液活性的影响;利用捷克八溶剂系统和紫外扫描对物质类型进行了初步确定。结果表明:猪苓发酵液对细菌有抑菌活性;活性物质对酸碱敏感且热不稳定,可被乙酸乙酯、三氯甲烷、正丁醇等有机溶剂萃取,随萃取剂极性增大萃取能力增强;紫外扫描其萃取浓缩液,表明在λ210 nm处有一典型吸收峰,与酯肽类抗菌素的紫外图谱相似;捷克八溶剂系统纸层析结果显示抑菌物质为非水溶性Ⅱ型抗生素。猪苓发酵液中存在抗生素类物质,但稳定性差,在猪苓的以多糖为主要药用成分的应用过程中不发挥重要作用。
- 王小海刘晚秋方晓峰颜霞
- 关键词：猪苓发酵液
- 蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的构建
- 2012年
- 【目的】构建一种可获得Sumo修饰蛋白的原核表达系统,为Sumo化修饰蛋白的批量制备奠定基础。【方法】用Trizol裂解法提取小鼠畸胎瘤细胞F9的总RNA,反转录成cDNA后PCR扩增获得Sumo1、Ubc9、Sae2和Sae1基因。将上述基因及相应载体酶切、连接后构建出重组质粒pACYC-Ubc9-Sumo1、pCDF-Sae2-Sae1。采用质粒转化-制备阳性克隆感受态细胞-质粒转化的方法获得pACYC-Ubc9-Sumo1和pCDF-Sae2-Sae1共表达的Su-mo化修饰的原核表达系统。以pGEX-GST-Sox2和pGEX-GST-Sox2K247R重组质粒为例,采用Western Blot检测蛋白质Sumo化修饰原核表达系统的有效性。用另一Sumo修饰底物Oct4及其Sumo修饰位点突变的突变体Oct4K118R转化原核Sumo修饰系统,并连续传代,检测蛋白质Sumo化修饰系统的实用性及遗传稳定性。【结果】构建的蛋白质Sumo化修饰原核表达系统可特异修饰Sumo1的底物Sox2和Oct4;含有Oct4原核表达载体的蛋白质Sumo化修饰系统可稳定传至15代,系统的稳定性较好。【结论】获得了成本较低、特异性强、重复性好、稳定性强的可用于制备Sumo化蛋白的原核表达系统。
- 唐波杜娟杨力侠王小海吴海波吴勇延郭泽坤
- 关键词：SUMO原核表达OCT4SOX2
