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鲍曼不动杆菌多重耐药性与外排泵机制研究被引量：3: 2015年; 目的分析江苏大学附属医院鲍曼不动杆菌外排泵对其耐药性形成的作用。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院住院患者44株鲍曼不动杆菌。应用K-B纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对抗生素的敏感性。经Realtime PCR法检测外排泵基因ade B m RNA水平。扩增外排泵调控基因ade R和ade S全长片段并测序比对。结果在44株鲍曼不动杆菌中,27株为多重耐药株且对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素较为敏感。耐药菌株ade B m RNA表达水平明显高于敏感株,且发现ade R的2639位碱基发生A→G突变,其对应的219位氨基酸则呈现AAA(赖氨酸)→GAA(谷氨酸)改变,而ade S无有义突变。结论鲍曼不动杆菌的多重耐药性可能与ade ABC外排泵系统的过表达相关,且其表达可能与调控基因ade R的突变相关。; 杨慧健邢丽丹糜祖煌沈培吴玉敏应欣宇别庆丽张盼徐芸芸吴静张梦莹倪萍苏兆亮许化溪; 关键词：鲍曼不动杆菌多重耐药外排泵基因

小鼠GITR真核表达载体的构建及表达: 2011年; 目的:构建小鼠GITR(mGITR)的真核表达载体,转染COS-7细胞表达小鼠GITR蛋白。方法:用TRIzol试剂抽提小鼠脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增出GITR全长基因,构建真核重组载体pIRES2-EGFP-mGITR,经鉴定后采用脂质体介导DNA法转染COS-7细胞。结果:从小鼠脾细胞中成功扩增得到GITR全长基因。重组载体pIRES2-EGFP-mGITR转染COS-7细胞后,经荧光显微镜观察可见绿色荧光,提取蛋白后经蛋白质印迹鉴定有目的蛋白mGITR。结论:成功构建了小鼠GITR基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-mGITR,转染COS-7细胞后mGITR蛋白获得成功表达。; 沈培郑东刘艳田洁赵银霞刘青玲朱晨露马洁苏兆亮马斌许化溪王胜军; 关键词：真核表达转染 COS-7细胞

产丙酮酸棒状杆菌及痤疮丙酸杆菌对树突状细胞的免疫调节作用被引量：2: 2011年; 目的产丙酮酸棒状杆菌是近年来发现的细菌新种,其与痤疮丙酸杆菌一样属需脂杆菌,但有无与痤疮丙酸杆菌类似的免疫调节作用尚不清楚。本文以痤疮丙酸杆菌为对照,以在固有和适应性免疫应答中发挥重要调节作用的树突状细胞为靶向,研究了产丙酮酸棒状杆菌对树突状细胞成熟标志表达和细胞因子产生等方面的影响,为该菌作为免疫调节剂进一步开发利用提供依据。方法加热灭活的产丙酮酸棒状杆菌或痤疮丙酸杆菌刺激树突状细胞DC2.4后,ELISA法检测其产生相关细胞因子的变化;MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪分析细胞表面MHCⅡ、CD40等表达水平。结果两种细菌刺激后,DC2.4表达IL-6和IL-12的水平均有增加,且随刺激的菌液浓度的增加而升高,这种刺激还明显增强DC2.4的增殖能力。此外,刺激后细胞表面的MHCⅡ、CD40/80/86表达也呈现不同程度的上调,尤以MHCⅡ为著。结论产丙酮酸棒状杆菌对DC2.4细胞增殖、成熟和相关细胞因子的表达均有明显的影响,这种影响将有助于促进DC的抗原提呈功能。; 韩清珍仝佳赵阳刘嫣芳沈培苏兆亮邵启祥焦志军王胜军许化溪; 关键词：痤疮丙酸杆菌树突状细胞免疫调节

小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白生物信息学分析被引量：1: 2014年; 目的获取小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关蛋白（GITR）氨基酸序列,并预测其结构和功能。方法利用网络平台及相关生物学软件对小鼠GITR氨基酸序列进行生物信息学分析。结果小鼠GITR氨基酸序列与人等其他物种具有56%的同源性,具有信号肽、胞外区、跨膜区及胞内区等结构;小鼠GITR蛋白胞外区位于第22-153号氨基酸序列区间;可能含有4个N-糖基化位点、4个丝氨酸磷酸化位点、1个苏氨酸磷酸化位点以及1个酪氨酸磷酸化位点。结论小鼠GITR氨基酸序列的生物信息学分析为进一步表达该蛋白及其相关功能研究奠定了基础。; 沈培苏兆亮王胜军许化溪; 关键词：小鼠氨基酸生物信息技术

青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成及其抗炎作用被引量：3: 2014年; 目的合成并初步探索青藤碱衍生物青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎作用。方法以青藤碱(SN)为原料,化学合成青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。用脂多糖(LPS)诱导建立内毒素血症小鼠模型,并在诱模前于治疗组小鼠体内分别注射5 mg/kg、2.5 mg/kg剂量的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,未治疗组和空白对照组注射生理盐水,观察记录各组小鼠的状态及生存状况。MTT法检测不同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞增殖的影响。用终浓度为(0、1、2、5、10)μmol/L的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯共培养刺激RAW264.7细胞24 h,再加终浓度为1μg/kg的LPS刺激6 h后,实时定量PCR检测IL-6mRNA表达水平。结果成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。体内研究发现:相同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯治疗组小鼠,生存状态较青藤碱治疗组有所改善;青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外可以抑制巨噬细胞的增殖和IL-6的表达。结论青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯具有一定的抗炎作用,可能是通过抑制巨噬细胞增殖、减少炎症介质释放而实现的。; 田莎莎张蓉杨凤英汪汀沈培汤建徐鑫鑫邢丽丹许化溪苏兆亮; 关键词：脂多糖青藤碱 IL-6 内毒素血症

肿瘤特异性单克隆抗体与酵母β-葡聚糖联合用于抗瘤免疫治疗的研究进展被引量：1: 2010年; 刘晶晶Lacey GunnRichard Hansen严俊沈培; 关键词：肿瘤特异性单克隆抗体抗瘤作用酵母联合用

CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系的初步研究: 2012年; 目的探讨CpG-ODN对人肺腺癌A549细胞的增殖及其抑癌基因Runx相关转录因子3(Runx3)表达的影响,探讨TLR9与肺腺癌发生发展的关系,为基于TLR9的肿瘤治疗寻找理论依据。方法不同浓度CpG-ODN作用于人肺腺癌A549细胞系,用RT-PCR和Western blot分别检测Runx3在mRNA和蛋白水平的表达情况。针对Runx3基因的特定靶位,采用化学合成法合成Runx3 siRNA,并瞬时转染A549细胞,用MTT法检测CpG-ODN对转染前后的细胞生长作用的影响。结果 CpG-ODN能明显抑制A549细胞的增殖;不同浓度CpG-ODN刺激A549后,细胞中Runx3基因在mRNA和蛋白表达水平均增加;Runx3 siRNA的瞬时转入对CpG-ODN刺激的A549增殖抑制作用明显减弱。结论 TLR9的配体CpG-ODN可抑制A549细胞的增殖,同时正向调控Runx3的表达。由此推测,CpG-ODN可能通过上调Runx3抑制A549细胞的增殖。; 赵阳苏兆亮沈培刘嫣芳韩清珍仝佳王胜军夏圣邵启祥许化溪; 关键词：CPG-ODN RUNX3 A549细胞细胞增殖

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沈培