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王晓丹
作品数:
2
被引量:5
H指数:1
供职机构:
中国人民解放军第一军医大学
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
杨天忠
北京市病毒基因工程国家重点实验...
彭朝辉
中国人民解放军第一军医大学
徐钤
中国人民解放军第一军医大学
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机构
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中国人民解放...
作者
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杨天忠
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王晓丹
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彭朝辉
传媒
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1篇
第一军医大学...
年份
2篇
1997
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质粒型单纯疱疹病毒载体的构建及其在真核细胞中的表达
被引量:5
1997年
利用基因工程技术构建成功质粒型Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体pHSV,其中含有HSV-1包装信号序列和HSV-1复制起点,以及HSV-1IE68启动子。为验证其构建是否成功,在其IE68启动子下游的多克隆位点上插入了E.coliLacZ基因,构建成pHSVL质粒。用HSV-1温度敏感株(tsK株)超感染传代细胞后,将这种质粒转染入该细胞,pHSVL可在辅助病毒HSV-1tsK(允许温度为31℃)存在的条件下被包装成病毒颗粒,由此得到的混合病毒含有HSV-1tsK和pHSVL假病毒颗粒,收获后再感染培养的Vero细胞,原位检测β-半乳糖苷酶活性呈阳性。同时用pHSVL病毒接种体外培养的SD大鼠胚胎脊髓运动神经元,用X-gal原位检测β-半乳糖苷酶的活性,亦发现有阳性的神经元存在。说明载体pHSVL携带的报告基因lacZ在这两种真核细胞中均得以正确表达。报告基因可为其它目的基因所代替,可用于神经生理、病理以及神经系统疾病基因治疗的实验研究。
王晓丹
杨天忠
徐钤
彭朝辉
侯云德
颜子颖
关键词:
单纯疱疹病毒
基因转移
真核细胞
含Ⅰ型单纯疱疹病毒包装信号序列片段的分离及扩增子质粒双表达载体的构建
1997年
利用基因工程技术分离出含有Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)包装信号序列和HSV-1基因组复制起点序列的片段,表达外源基因所必需的启动子序列以及其下游作为报告基因的lacZ基因片段,构建成质粒型HSV-1载体pHSVL。用脂质体介导的方法可将该质粒转染入经辅助病毒HSV-1tsK株超感染的Vero细胞,并将其包装成HSV-1假型病毒颗粒,可如天然病毒一样再感染传代细胞和神经细胞并在其中进行基因表达。在pHSVL的基础上,我们还构建了一种可同时表达两种外源基因的质粒型疱疹病毒载体pHLCL,即在pHSVL中插入第二个转录单位:HCMVIE启动子和其下游的荧光素酶基因(lucgene),由此获得的pHLCL病毒接种传代细胞证明它可在其中同时表达两种报告基因.本研究成功地构建了两种质粒型HSV-1载体,其独特的基因转移方式使之在神经生理、病理及神经系统疾病的基因治疗的实验研究中都具有广阔的应用前景。
王晓丹
杨天忠
颜子颖
徐钤
彭朝晖
侯云德
关键词:
单纯疱疹病毒
HSV-1
质粒
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