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质粒型单纯疱疹病毒载体的构建及其在真核细胞中的表达被引量：5: 1997年; 利用基因工程技术构建成功质粒型Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）载体ｐＨＳＶ，其中含有ＨＳＶ－１包装信号序列和ＨＳＶ－１复制起点，以及ＨＳＶ－１ＩＥ６８启动子。为验证其构建是否成功，在其ＩＥ６８启动子下游的多克隆位点上插入了Ｅ．ｃｏｌｉＬａｃＺ基因，构建成ｐＨＳＶＬ质粒。用ＨＳＶ－１温度敏感株（ｔｓＫ株）超感染传代细胞后，将这种质粒转染入该细胞，ｐＨＳＶＬ可在辅助病毒ＨＳＶ－１ｔｓＫ（允许温度为３１℃）存在的条件下被包装成病毒颗粒，由此得到的混合病毒含有ＨＳＶ－１ｔｓＫ和ｐＨＳＶＬ假病毒颗粒，收获后再感染培养的Ｖｅｒｏ细胞，原位检测β－半乳糖苷酶活性呈阳性。同时用ｐＨＳＶＬ病毒接种体外培养的ＳＤ大鼠胚胎脊髓运动神经元，用Ｘ－ｇａｌ原位检测β－半乳糖苷酶的活性，亦发现有阳性的神经元存在。说明载体ｐＨＳＶＬ携带的报告基因ｌａｃＺ在这两种真核细胞中均得以正确表达。报告基因可为其它目的基因所代替，可用于神经生理、病理以及神经系统疾病基因治疗的实验研究。; 王晓丹杨天忠徐钤彭朝辉侯云德颜子颖; 关键词：单纯疱疹病毒基因转移真核细胞

人神经细胞特异表达的质粒型疱疹病毒载体的构建及用途: 本发明涉及一种在人神经细胞中特异表达的质粒型疱疹病毒载体及其用途，其组成：1、HSV-1IE68基因的启动子。2、启动子之后的多酶切点。3、HSV-1基因组复制子(HSV-1ori)。4、HSV-1包装信号序列(Pack...; 杨天忠侯云德王晓丹颜子颖; 文献传递

单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达被引量：4: 1998年; 从单纯疱疹病毒Ⅰ型ＨＳＶ－１基因组中分离出其包装信号序列，与含ＨＳＶ－１复制起点及ＩＥ－６８基因启动子的ＤＮＡ序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架，构建了一种ＨＳＶ－１扩增子质粒载体ｐＨＳＬ，其中ＬａｃＺ基因置于ＩＥ－６８基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了ＨＳＶ－１温度敏感株ｔｓＫ株的Ｖｅｒｏ细胞，ｐＨＳＬ可在ＨＳＶ－１ｔｓＫ的辅助下包装成假病毒颗粒，这样就可得到同时含有假病毒和ＨＳＶ－１ｔｓＫ的混合毒株ｄｖＨＳＬ。将此混合毒株感染传代细胞和神经细胞，可在其中表达ＬａｃＺ基因，而在生理温度（３７℃）下，混合毒株的复制受到抑制。提示这种缺陷型疱疹病毒载体有用于向神经系统基因转移的可能性。; 杨天忠王晓丹崔虹颜子颖侯云德; 关键词：扩增子 LACZ基因单纯疱疹病毒

含Ⅰ型单纯疱疹病毒包装信号序列片段的分离及扩增子质粒双表达载体的构建: 1997年; 利用基因工程技术分离出含有Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV－1）包装信号序列和HSV－1基因组复制起点序列的片段，表达外源基因所必需的启动子序列以及其下游作为报告基因的lacZ基因片段，构建成质粒型HSV－1载体pHSVL。用脂质体介导的方法可将该质粒转染入经辅助病毒HSV－1tsK株超感染的Vero细胞，并将其包装成HSV－1假型病毒颗粒，可如天然病毒一样再感染传代细胞和神经细胞并在其中进行基因表达。在pHSVL的基础上，我们还构建了一种可同时表达两种外源基因的质粒型疱疹病毒载体pHLCL，即在pHSVL中插入第二个转录单位：HCMVIE启动子和其下游的荧光素酶基因（lucgene），由此获得的pHLCL病毒接种传代细胞证明它可在其中同时表达两种报告基因．本研究成功地构建了两种质粒型HSV－1载体，其独特的基因转移方式使之在神经生理、病理及神经系统疾病的基因治疗的实验研究中都具有广阔的应用前景。; 王晓丹杨天忠颜子颖徐钤彭朝晖侯云德; 关键词：单纯疱疹病毒 HSV-1 质粒

新型系列病毒载体的研制和应用: 颜子颖侯云德舒跃龙杨天忠吴小兵王晓丹贡惠宇乔健姚二梅; 1、将单纯疱疹病毒（HSV-1）扩增子载体应用微小病毒载体(AAV-2)包装系统。发明了一种既提供了AAV反式蛋白，又可充当辅助病毒的HSV-1混合毒种dvHSV/AAV，以此混合毒株生产重组AAV，与常规方法相比，简便...; 关键词：; 关键词：病毒载体基因导入基因治疗

人神经细胞特异表达的质粒型疱疹病毒载体的构建及用途: 本发明涉及一种在人神经细胞中特异表达的质粒型疱疹病毒载体及其用途，其组成：1HSV-1IE68基因的启动子。2启动子之后的多酶切点。3.HSV-1基因组复制子(HSV-1 ori)。4.HSV-1包装信号序列(Packa...; 杨天忠侯云德王晓丹颜子颖; 文献传递

以痘苗病毒天坛株为载体的表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D的重组活疫苗的建立被引量：1: 1997年; 从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１－１６８株）病毒基因组中，分离出含有糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因的１．２ｋｂ片段，插入带有痘苗病毒天坛株ＴＫ区的质粒ｐＪＳＢ１１７５Ｐ７．５ｋ启动子下游，转染无白血病鸡胚原代细胞，获得带有ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达ＨＳＶ－１－１６８ｇＤ糖蛋白抗原，能与特异性单克隆抗体反应。在感染细胞中表达的膜抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，表达分子量为５４ｋＤ糖蛋白。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了重组病毒ＤＮＡ中特异的ｇＤ基因，对作为活疫苗的重组痘苗病毒株进行了一些微生物学活性、免疫原性和毒力等方面的研究。; 崔虹尚大庄杨天忠杨雄虎侯云德阮力朱既明; 关键词：痘苗病毒载体疱疹病毒病毒疫苗糖蛋白D

利用缺陷型单纯疱疹病毒载体在大鼠中枢神经系统表达外源基因被引量：4: 1997年; 本研究利用构建的Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）扩增子质粒载体ｐＨＳＬ，在辅助病毒ＨＳＶ－１ｔｓＫ（许可温度３１℃）的辅助下，以首尾相连的连接体形式被包装成复制缺陷型的ＨＳＶ－１假病毒颗粒，得到一种ＨＳＶ－１混合毒种ｄｖＨＳＬ。将ｄｖＨＳＬ接种体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元和大脑皮质神经元后均可获得报告基因的表达；接种大鼠角膜后，ｌａｃＺ基因在三叉神经节中持续表达两个月；直接注射接种到大鼠前脑皮质后，可在注射部位的局部表达报告基因近两个月。研究结果表明上述缺陷型单纯疱疹病毒载体可作为神经系统基因转移的工具，应用于神经系统生理。; 杨天忠王晓丹颜子颖侯云德; 关键词：LACZ基因三叉神经节单纯疱疹病毒

新型系列病毒载体: 颜子颍侯云德舒跃龙杨天忠吴小兵王晓丹贡惠宇乔健等; 该成果包括人工病毒载体和非病毒载体两类。其主要技术内容有：以EBV为基础的肝细胞和肝癌细胞导向性自主复制型人工病毒系统；腺病毒相关病毒（AAV）载体系统；单纯疱疹病毒载体系统三部分。人工病毒载体，通过模拟天然病毒通过特异...; 关键词：; 关键词：病毒载体病毒基因重组

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杨天忠