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王永: 作品数：28 被引量：94H指数：7; 供职机构：内蒙古农业大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生文化科学生物学更多>>

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新城疫病毒F蛋白碱裂解位点修饰及外源基因的插入对新城疫LaSota疫苗株致病力的影响被引量：7: 2008年; 新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗株反向遗传操作平台,将LaSota病毒F蛋白的碱裂解位点由GGRQGR↓L分别突变为GRRQRR↓F和GRRQRR↓L,在未加入TPCK胰酶的情况下分别成功拯救出突变修饰LaSota疫苗病毒株rL-FmF和rL-FmL,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等指标对其毒力进行评估,结果rL-FmF和rL-FmL的ICPI值由LaSota的0.36分别上升为1.18和1.05,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0,表明碱裂解位点的突变可显著增强致病力。为了检测外源基因插入对病毒致病力的影响,进一步以rL-FmF为载体,分别构建并拯救出表达H5亚型禽流感病毒血凝素HA和增强绿色荧光蛋白EGFP基因的重组病毒rL-FmF-HA和rL-FmF-EGFP,经测定ICPI分别为0.67和1.10,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0。结果表明,对rLaSota病毒F蛋白裂解位点2个非碱性氨基酸突变为碱性氨基酸,无论F2蛋白氨基端为F或L,均可显著增强其脑内接种致病力,接近中发型毒株标准,但对静脉内接种致病能力均无显著影响,而对鸡胚致死能力均保持rLaSota病毒缓发型特点(MDT≥90);外源基因的重组、表达可不同程度致弱病毒,其致弱程度与外源基因及其表达产物性质有关。结果提示,影响NDV致病力不仅仅局限于F蛋白裂解位点氨基酸序列;通过F裂解位点修饰及HA基因插入可以获得致病力较高但基本接近缓发型标准的重组病毒。; 王永葛金英解希帝丁玉林步志高; 关键词：新城疫病毒裂解位点致病力

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建被引量：13: 2008年; 【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV-VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120h,脑内致病指数(ICPI)分别为0.4和0.36,静脉内致病指数(IVPI)均为0;接种后72～96h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100%保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90%以上。【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病-新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。; 葛金英温志远高宏雷王永胡森鲍恩东王笑梅步志高; 关键词：重组新城疫病毒反向遗传操作 VP2基因

一种可自动拉伸育苗苗床遮阳架: 本实用新型提出了一种可自动拉伸育苗苗床遮阳架，包括遮阳网布，还包括存储筒，所述存储筒两端设有端盖，所述端盖上均设有轴承，所述存储筒轴线与地面平行且外筒壁两端底部设有支撑腿；还包括位于两轴承之间的回转轴，所述遮阳网布绕卷于...; 刘燕王永高婧李正男付崇毅张之为康立茹白红梅廉勇

一例急性奶牛生产瘫痪的治疗: 2008年; 王永李云章; 关键词：奶牛发病特点急性预后

利用VSV△G*伪型病毒建立安全、快速的西尼罗病毒抗体检测方法的尝试: 2010年; 目的为探讨利用水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)假病毒粒子系统包装西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)的E蛋白可行性,构建3种E蛋白基因的真核表达质粒。以期用于WNV感染的流行病学调查。方法将表达WNV囊膜蛋白E的质粒体外转染293T细胞,然后感染VSV△G*G,并对E蛋白表达质粒进行改造,分别在基因序列前加入信号肽,在终止密码子之前加入VSV△G蛋白的细胞质尾序列。结果包装出的VSV△G*-WNVE滴度没有明显升高。提示WNVE蛋白与VSV的囊膜匹配性不佳,VSV△G*-WNVE作为病毒中和抗原代替野毒进行抗体筛查还需要进一步提高转染和包装效率。结论VSV作为高效、安全的新型载体、活病毒疫苗载体和肿瘤基因治疗载体以及高危病毒的研究工具具有巨大的研究价值和应用潜力。; 王永葛金英李霞王滨有; 关键词：西尼罗病毒

重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究被引量：16: 2006年; 目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原,初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法,并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本,与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果试管凝集试验血清样本阳性率为15%(15/100);BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性,相对阳性率为73.3%,二者阳性符合率为92%(11/12);而采用OMP31为包被抗原,阳性检出率为0(图5)。结论被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌(B.abortus天然缺失OMP31基因);BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。; 陈伟业王淑杰王永胡森王清华辛九庆佟有恩黄克和步志高; 关键词：间接ELISA 试管凝集试验

绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立被引量：2: 2010年; 目的建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒（GFP-rhMPV）空斑形成滴度测定方法.方法基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提升病毒滴度并保存.将等倍稀释的重组病毒液接种常规制备的Vero-E6细胞单层,用含或不含胰酶的低熔点琼脂精凝胶覆盖细胞,孵育一定时间后,采用荧光显微镜下计数荧光空斑数和抗原抗体蓝斑形成法计算病毒滴度.结果感染后3 d,荧光显微镜下GFP-rhMPV可在低熔点琼脂糖凝胶覆盖层下形成分界较为清晰的绿色荧光集落,接种后3 d荧光空斑相对独立,便于计数.蓝斑形成法在感染后第5天蓝斑较大,易观察.此前拯救获得的GFP-rhMPV在宿主细胞Vero-E6中的复制滴度可达1×10^6 PFU以上.结论成功建立了GFP-rhMPV的空斑形成实验滴度定量检测方法,为hMPV的致病机制、防治手段研究奠定了基础.; 余春梅陈昕张金辉王永步志高赵晓东; 关键词：人偏肺病毒滴度测定

预防医学本科生流行病学笔试试卷分析与评价: 2015年; 针对预防医学五年制本科生的特点,通过不断的摸索和总结教学经验,不断改进试题的难易程度,改善笔试考试的客观合理性。该次笔试考试试题总的来说难度偏易,多项选择题的难度偏难;试题的区分度总体合格,其中多项选择题和单项选择题的区分度比较好。该次试题分析提示同学们对多项选择题考核的知识点掌握的不够透彻,提示我们在今后的教学过程中要注重此方面的讲授,为我们今后提高命题水平和考试质量,并不断完善和提高教学质量提供了有益的参考。; 刘宇鹏王永胡付兰周海波王帆赵亚双; 关键词：流行病学试卷分析

表达绿色荧光蛋白重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建被引量：23: 2006年; 新城疫病毒是理想的新型活病毒疫苗载体，具有巨大的优势和应用前景。采用生产实践中广泛应用、免疫效果良好的NDV LaSota弱毒疫苗株，建立了反向遗传操作系统。在此基础上，进一步构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组NDV基因组cDNA克隆，成功救获了重组病毒rLaSota-EGFP，病毒F1代尿囊病毒液按1×10^4 EID50接种9—10日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种后分别于24h、48h、72h及96h收获尿囊液，检测平均HA滴度分别为2^8、2^10.3、2^11.3和2^11，每mL尿囊液病毒量EID50分别为10^8.64、10^9.22、10^9.21和10^9.64，重组病毒与亲本株生长滴度在相近时间达到峰值，生长动力学特性与亲本株无明显差异。各代次重组病毒按1×10^6 EID50病毒量接种9—10日龄SPF鸡胚，96h内完全不致死鸡胚。救获重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性，并且鸡胚连续传9代次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。重组病毒rLaSota-EGFP的成功救获为开展新城疫病毒活载体疫苗研制提供了可行的技术平台。; 葛金英温志远王永鲍恩东步志高; 关键词：新城疫绿色荧光蛋白反向遗传操作活载体疫苗

表达增强绿色荧光蛋白重组水疱性口炎病毒印第安纳株的构建被引量：13: 2007年; 通过负链RNA病毒反向遗传操作技术,成功救获了表达增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组印地安纳株水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus Indiana serotype)、救获的重组病毒保持了野生型VSV高滴度生长特性,细胞连续传代10次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。本研究为VSV作为新型重组活病毒载体疫苗和肿瘤治疗载体研制及基础病毒学相关研究提供了理想的技术平台。; 温志远葛金英胡森王永步志高; 关键词：反向遗传操作

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