王焕琴
- 作品数：31 被引量：170H指数：10
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中美新发和再发传染病合作项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 黄病毒检测工程细胞系的构建及功能鉴定
- 2015年
- 目的:构建黄病毒检测工程细胞系并对其功能进行鉴定。方法:以含有登革4型病毒814669株全长感染性克隆的质粒P4质粒为基础,缺失pr M-E基因1 945bp,构建含有红色荧光蛋白m Cherry报告基因的登革病毒复制子载体P4-△pr ME-m Cherry。以P4-△pr ME-m Cherry为基础,通过融合PCR方法,以真核表达载体p CDNA3.1+为骨架,构建用于黄病毒检测细胞筛选的缺陷型真核表达质粒p CDNA3.1-P4-m Cherry。脂质体转染法将质粒p CDNA3.1-P4-m Cherry转染BHK-21细胞,G418进行筛选,获得的阳性细胞克隆经96孔板系列稀释筛选、纯化克隆细胞BHKFlavivirus。结果:BHK-Flavivirus细胞感染登革病毒60h后,能够在荧光显微镜下检测到红色荧光蛋白m Cherry的表达,说明BHK-Flavivirus能够用于外源黄病毒的检测。BHK-Flavivirus细胞分别感染黄病毒属的乙脑病毒(P3)、4型登革病毒(P4),可以检测到红色荧光;而辛德毕斯病毒(XJ-160)、和基孔肯雅病毒(SD08Pan)、盖塔病毒(HB0234)等正链RNA病毒感染后则不出现红色荧光。结论:以上结果表明BHK-Alphavirus细胞可用于未知蚊媒黄病毒检测,该方法通过报告基因表达与否,能够高效、特异的甄别主要蚊媒甲病毒和黄病毒,同时该方法有利于稀缺病毒的分离、保存,操作方法简单、直观,有望应用于临床检测及病毒性生物战剂的早期甄别。
- 尉研王焕琴吴萌张凤娟梁国栋朱武洋
- 关键词：黄病毒细胞系红色荧光蛋白
- 在我国北方涉县首次检测到盖塔病毒被引量：5
- 2010年
- 目的:确定从河北省涉县蚊体中分离到的病毒种类。方法:采集三带喙库蚊标本,液氮运输和保存,10只为一组研磨后接种C6/36细胞分离病毒。病毒株分别采用乙醚试验、免疫荧光试验和分子生物学试验进行毒株鉴定。结果:采集到蚊标本1290只,标本处理后接种细胞47批,病毒分离结果得到13株阳性分离物(毒株),经乙醚试验和免疫荧光试验初步鉴定HB0215-3和HB0234两株病毒为披膜病毒科甲病毒属成员,再经RT-PCR、核酸序列测定和分析,证实两株病毒核酸与国际基因库中的AY702913和NC-006558盖塔病毒同源性最高,被进一步鉴定为盖塔病毒。结论:该研究从河北省涉县三带喙库蚊中分离到了盖塔病毒,这是我国内陆地区北方首次分离到。
- 梁勇张连山刘永为王峻巍董运强王志强王焕琴翟友刚刘卫滨杨冬荣陶三菊梁国栋
- 关键词：盖塔病毒甲病毒属病毒分离
- 我国分离的盖塔病毒衣壳蛋白基因和3′非翻译区分子特征研究被引量：17
- 2007年
- 对我国海南省和河北省分离到的3株盖塔病毒（GETV）（M1、HB0215-3和HB0234）进行衣壳蛋白基因和3′UTR区序列测定,并分析比较该病毒的分子生物学遗传特征。首先应用逆转录聚合酶链反应扩增出病毒衣壳蛋白基因和3′UTR片段,纯化后连接到载体中进行测序,然后用Clastal X和DNASTAR软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,用MEGA软件绘制系统发生树。3株病毒衣壳蛋白基因分别由801、804和804个核苷酸组成,分别编码267、268和268个氨基酸,3株病毒之间核苷酸和氨基酸序列同源性为97.6%-100%和97.8%-100%,与其他GETV分离株核苷酸同源性在95.4%-99.6%之间。3株病毒3′UTR分别由411、401和401个核苷酸组成,发现中国株存在10个（45-54位）核苷酸缺失和2个（64位、148位）特有的核苷酸位点。进化分析表明盖塔病毒之间的进化关系与分离年代相关,中国境内流行的盖塔病毒是相对独立的一个类群。
- 翟友刚王焕琴付士红梁国栋
- 关键词：盖塔病毒衣壳蛋白基因核苷酸序列系统发生树
- 新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员被引量：5
- 2009年
- 目的揭示新疆库蚊分离的0507JS11病毒的基本特征，明确其分类地位。方法对0507JS11病毒进行细胞感染特点观察、负染电子显微镜（简称电镜）观察、基因组核酸电泳检测、全基因序列测定和系统进化分析。结果0507JS11病毒可以引起Aedes albopictus C6／36细胞病变；完整病毒颗粒呈20面立体对称，直径20nm，无包膜；病毒基因组为长3977nt的单股正链DNA，基因组核酸电泳检测呈大小约4kbp的DNA条带；病毒基因组编码区包括3个开放读码框（open reading flame，ORF），ORF1和ORF2编码非结构蛋白（non—structural protein，NS），ORF3编码衣壳蛋白（capsid protein，VP）；全基因序列系统进化分析显示病毒位于Brevidensovirus内一个独立进化分支。结论新疆库蚊分离的0507JSl1病毒为Brevidensovirus新成员。
- 吕新军翟友刚孙肖红付士红王焕琴童苏祥张松梁国栋
- 关键词：库蚊属基因组DNA
- 新疆南部地区蚊虫中病毒分离和初步鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的首次从新疆南部地区蚊虫中分离病毒并完成初步鉴定。方法2005年7—8月在新疆南部地区采集蚊虫13491只，分130管进行研磨，取上清同时感染C6／36和Vero细胞进行病毒分离，获得的病毒分离物进行基因组核酸电泳检测和负染电子显微镜（简称电镜）观察。结果获得42个对C6／36细胞致病变（cytopathic effects，CPEs）而对Vero细胞不致病变的病毒分离物。对这42个病毒分离物进行基因组核酸电泳检测发现其中27个为相似的12节段双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）病毒，1个为10节段dsRNA病毒，5个为DNA病毒；电镜观察显示了这3类病毒的形态特点，并且发现基因组核酸电泳检测中未获得分类信息的9个病毒分离物具有相似的形态特点，是另外一类病毒。结论新疆南部地区蚊虫中可能存在多种病毒，并且以具12节段dsRNA的病毒占优势。
- 吕新军吕志孙肖红付士红王焕琴童苏祥张松梁国栋
- 关键词：蚊科病毒
- 甘肃省天水及陇南部分地区虫媒病毒调查被引量：34
- 2008年
- 目的对甘肃省天水陇南部分地区的吸血蚊虫进行病毒分离与鉴定。方法2006年8月在当地采集蚊虫标本,分离病毒和对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定,以软件进行病毒的核苷酸序列比对和系统发生分析。结果分离到19株病毒,鉴定结果显示分离株GS10-2为盖塔病毒,GS42-2为版纳病毒,其余分离株为一种基因组约8 000核苷酸的未知RNA病毒。盖塔病毒分离株3’UTR中具有与已往中国分离株相同的缺失序列和3个特异核苷酸位点。版纳病毒分离株基因组第12片段的进化关系同其它中国分离株有明显差异,位于一条独立的进化枝中。结论在该地区分离到1株盖塔病毒、1株版纳病毒和17株未知RNA病毒;盖塔病毒与以往我国分离株的遗传关系密切,版纳病毒与我国其它地区分离株有明显差异,在进化上相对独立。
- 翟友刚王焕琴许海魁孟维珊曹玉玺付士红梁国栋
- 关键词：虫媒病毒盖塔病毒版纳病毒
- 我国Colti病毒基因分型的研究被引量：11
- 2003年
- 目的 对我国分离的Colti病毒进行基因分型。方法 采用针对Colti病毒B2亚组第9和12片段和B1亚组第12片段的3对引物,对我国近年来分离的Colti病毒利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行基因分型。同时对北京分离株BJ95-75和云南分离株YN-6的PCR产物进行了克隆测序及同源性分析。结果 Colti病毒北京分离株BJ95-75、云南分离株YN-6、-67-1、-68-1、-69、-70-1、-70-2、-90、-92-2、-93病毒用B2亚组特异引物12-854-S/12-B2-R均能得到相对分子质量为850 bp的特异条带,用针对于第9片段的B2亚组引物9-JKT-S/9-JKT-R均得到了相对分子质量为492 bp的特异条带。而Colti病毒东北分离株NE97-12、NE97-31及对照病毒如环状病毒YN-99、乙脑病毒YN-151-1未能扩出特异条带。所有Colti病毒分离株及病毒对照用B1亚组特异引物12-B1-S/12-B1-R均未见特异条带。BJ95-75、YN-6这2株病毒第12片段核苷酸序列与B2亚组其他毒株间的同源性达到89.4％以上,特别是与中国早期分离株Banna病毒,其同源性达到98.9％以上;2株病毒第9片段的核苷酸序列与属于B2a型的Banna病毒的同源性可达到99.2％和96.5％,和JKT6423病毒的同源性也能达到84.0％,而与属于B2b型的JKT6969和JKT7043相应片段核苷酸序列的同源性只有53.0％左右。结论
- 徐丽宏陶三菊曹玉玺王焕琴杨冬荣何英刘琴芝陈伯权
- 关键词：COLTI病毒基因分型核苷酸
- 辽宁省部分地区2008年虫媒病毒分离鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的在辽宁省采集蚊虫标本进行病毒分离,了解虫媒病毒分布情况。方法2008年夏季在辽宁省丹东和锦州市采集蚊虫标本,利用C6/36和BHK-21等细胞分离病毒;对新分离病毒利用血清学、分子生物学和生物信息学方法进行鉴定。结果在辽宁省丹东和锦州市共采集蚊虫标本3属5种9296只,包括库蚊属的三带喙库蚊、淡色库蚊,伊蚊属的刺扰伊蚊、背点伊蚊和按蚊属的中华按蚊。从蚊虫标本中共得到4株病毒分离物,其中1株为乙型脑炎(乙脑)病毒(丹东市的三带喙库蚊),2株为版纳病毒(锦州市的中华按蚊),1株为辽宁病毒和版纳病毒混合(锦州市的中华按蚊)。新分离乙脑病毒属于基因Ⅰ型乙脑病毒,E基因编码病毒毒力和抗原表位的位点未发生改变。结论在辽宁省再次分离到乙脑病毒,并首次证明辽宁省存在辽宁病毒。
- 曹玉玺付士红张稷博孟维珊王焕琴何英王环宇郭军巧梁国栋
- 关键词：乙型脑炎病毒版纳病毒
- 从滇西北地区首次分离到版纳病毒被引量：7
- 2009年
- 目的对滇西北地区分离的版纳病毒进行系统鉴定，明确与云南其他地区分离株的差异。方法对2005、2006年从滇西北地区分离的3株版纳病毒进行形态学、基因组带型和分子生物学鉴定，测定第12片段核苷酸序列，进行序列的同源性和系统进化分析。结果从2005、2006年滇西北蚊虫标本中分离到的3株版纳病毒为直径约70nm、无包膜、有双层衣壳的球形颗粒，基因组带型为6-6分布。3株版纳病毒间第12片段核苷酸序列同源性为99％，与云南其他地区和印度尼西亚版纳病毒毒株的最大同源性分别为98％和90％；系统进化分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株共同形成一个分枝；第12片段编码的氨基酸序列比较发现我国版纳分离株和印度尼西亚毒株间存在共同的氨基酸残基差异。结论首次从滇西北地区蚊虫中分离到3株版纳病毒，基因序列分析显示滇西北分离株和云南其他地区分离株同源性较高。
- 孙肖红付士红王静林吕新军王焕琴何英翟友刚梁国栋
- 关键词：版纳病毒系统进化分析形态学分子生物学
- 喀什分离到新型双链RNA病毒被引量：5
- 2009年
- 2005年7～8月在喀什地区采集蚊虫13,491只,50～100只/组进行研磨,取上清在C6/36和Vero细胞上进行病毒分离,获得24个对C6/36细胞致病变而对Vero细胞不致病变的病毒。24个病毒分离物的基因组核酸电泳显示相同的12节段双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)带型。以随机六聚体引物pd(N)6反转录制备病毒基因组cDNA,采用辽宁病毒(liaoning virus,LNV)第12基因片段特异性引物进行PCR扩增,PCR产物进行核酸序列测定,序列BLAST比对显示与GenBank中已知LNV第12基因片段核酸序列同源性超过85%,证实24个病毒分离物均为LNV。核酸序列系统进化分析显示与LNV-NE9712进化关系更接近。
- 吕新军吕志孙肖红付士红王焕琴梁国栋
- 关键词：蚊虫DSRNA病毒
