曹玉玺
- 作品数：50 被引量：235H指数：10
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金中美新发和再发传染病合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学理学农业科学更多>>
- Flanders病毒TaqMan RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的应用TaqMan PCR技术建立针对Flanders病毒(Flanders virus,FLAV)的实时荧光定量PCR检测方法。方法下载GenBank中FLAV基因序列资料并进行多序列比对分析,选择其L基因中的高保守序列片段进行FLAV特异引物与探针的设计,使用来自于不同科属的15株病毒验证方法特异性,通过重复/平行实验验证方法稳定性,并利用体外转录的L基因RNA标准品建立基因拷贝数绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测Ct值的变异系数均小于1.7%,定量分析模型灵敏度达到100copies/PCR。结论建立完成针对FLAV的TaqMan PCR检测方法。实验结果显示,本方法具有高特异性、高敏感性、高稳定性、简便、易操作的特点,为今后对FLAV的检测、监测及相关研究提供技术手段。
- 李浩赫晓霞曹玉玺聂凯刘岩何英高晓艳付士红王环宇
- 关键词：TAQMANRT-PCR分子检测
- Banna病毒TaqMan探针法RT-PCR检测方法的建立被引量：11
- 2006年
- 目的建立Banna病毒核酸特异的快速、敏感的TaqMan探针RT-PCR检测方法。方法首先对从GenBank中检索到的所有Banna病毒的序列进行同源性分析及引物、探针的设计。病毒在BHK21细胞或C6/36细胞上繁殖扩增后提取病毒RNA和逆转录。以cDNA为模板分别进行TaqMan探针法RT-PCR和传统的PCR检测,并对方法的种内广谱性和特异性、检测灵敏性以及用于蚊虫和临床标本的适用性等进行评价。结果Banna病毒核酸特异的TaqMan探针RT-PCR检测方法具有较好的种内广谱性和特异性,可以检出所有12株Banna病毒,而其他虫媒病毒如辛德毕斯病毒、乙型脑炎病毒、batai病毒和环状病毒检测结果均为阴性。与传统PCR相比,敏感性高100倍以上,可以检出每50μl标本中含有0·5CCID50的Banna病毒。单链RNA变性条件(65℃)进行逆转录使检测结果的敏感性比99℃变性法最少低10倍。病毒在室温保存1天和4℃保存1周后,检出敏感性会比原来低10倍左右。该方法在检测模拟感染Banna病毒的人血清标本以及蚊虫标本时,均显示出较好的特异性。112份蚊标本中检出6份标本阳性,4份可疑阳性,病毒分离结果3份阳性。结论本实验成功建立了Banna病毒特异性核酸的TaqMan探针RT-PCR检测方法,并初步证实可用于血清标本和媒介蚊虫标本的检测,为开展Banna病毒的流行监测及临床早期诊断提供了新的技术手段。
- 徐丽宏曹玉玺何丽芳王焕琴何英付士红孙肖红王环宇刘卫滨王力华梁国栋
- 关键词：虫媒病毒聚合酶链反应
- 云南省澜沧江下游地区虫媒病毒的调查研究被引量：39
- 2003年
- 目的 了解云南澜沧江下游地区自然界虫媒病毒流行情况。方法 从云南澜沧江下游地区(澜沧县和思茅市)所属乡村采集蚊虫,分类后保存于液氮。经消毒、研磨、离心等处理后接种组织培养细胞分离病毒,并进行初步鉴定。结果从233份标本中,分离到22株致C6/36细胞病变的病毒,表现为细胞圆化、聚集、脱落。分离阳性率为9.4％(22/233)。经鉴定10株对乙醚和5’-磺脱氧尿苷抵抗,为无包膜双链RNA病毒,核酸电泳为12节段RNA病毒。9株对乙醚敏感,对5’-碘脱氧尿苷抵抗,为有膜RNA病毒,核酸电泳为10条带。Colti病毒95-75单克隆抗体与新分离的12节段RNA病毒的酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验呈阳性反应,而与10节段病毒呈阴性反应。3株病毒为对乙醚敏感,其中1株被乙型脑炎病毒A2株免疫腹水中和,并与A2免疫腹水荧光试验呈阳性反应;1株(云南92-4)与布尼亚病毒组特异免疫腹水的荧光试验和ELISA试验均为强阳性,而与甲病毒组特异性免疫腹水及黄病毒组的乙型脑炎病毒免疫腹水均呈阴性反应;经负染在电镜下观察毒粒呈圆形,直径约为(87.00±0.05)nm。外层可见表面突起。结论 从云南澜沧江下游地区采集的蚊标本分离到10株Colti病毒,9株环状病毒,1株为乙脑病毒,1株为布尼亚病毒,1株尚在研究中。
- 陶三菊张海林杨冬荣王焕琴刘琴芝张云智杨卫红章域震曹玉玺徐丽宏何英陈伯权
- 关键词：虫媒病毒脑炎病毒布尼亚病毒
- 青海省凶小库蚊辽宁病毒的分离鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的对青海省蚊虫标本中新分离的QH07130病毒株进行系统鉴定分析。方法采用血清学和分子生物学方法对QH07130病毒进行鉴定,并对该病毒进行系统进化特征分析。结果 QH07130病毒株对C6/36细胞产生明显细胞病变;间接免疫荧光试验显示,QH07130病毒株与辽宁病毒(LNV)单克隆抗体呈现阳性反应。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,QH07130病毒为12条带双链RNA病毒,与LNV的6-5-1带型一致。该病毒第10节段序列测定全长为844 bp,与LNV SX0771和NE9712株核苷酸同源性分别为99.5%和98.0%;系统进化分析显示,QH07130病毒位于LNV进化分支内,并且与LNV SX0771和NE9712株的进化关系最近,确认QH07130病毒为LNV。结论青海省蚊虫中存在LNV传播,这是首次在位于青藏高原的青海省分离到该病毒。
- 李文娟李铭华王静林吕志曹玉玺王志玉梁国栋
- 关键词：进化分析
- 拉沙热研究进展被引量：8
- 2016年
- 拉沙热(Lassa fever,LF)由拉沙病毒(Lassa virus,LASV)引起,是一种通过鼠类传播给人的急性出血性动物源性传染病,病死率高。主要在西非地区流行,但在全球多个国家发现输入性病例。本文主要针对拉沙病毒的病原学特点、疾病流行现状、临床特征、实验室检测、治疗及预防进展进行综述。同时,建议在全球经济一体化的大形势下,加强对拉沙热国际防控的关注度,建立国际联防联控防治策略和措施,并将其纳入全球防控体系。
- 邵楠曹玉玺王环宇
- 关键词：拉沙热流行病学
- G145R突变后HBsAg“a”决定簇合成肽的免疫学特性分析被引量：5
- 2005年
- 目的研究G145R突变后乙肝表面抗原(HBsAg)“a”决定簇合成肽的免疫学特性改变情况。方法首先合成2条短肽P1wt和P2145R,分别代表野毒株和G145R突变后HBsAg“a”决定簇合成肽。然后用β巯基乙醇(2ME)变性试验以及用乙肝疫苗标准品制备的小鼠多抗血清研究2条合成肽的空间构象以及抗原性异同。最后用等量合成肽免疫小鼠,用酶免疫法、竞争抑制试验和Westernblot试验等研究G145R突变后“a”决定簇合成肽的免疫原性改变。结果合成肽P1wt和P2145R用2ME温和变性后,PAGE结果表现为相对分子质量(Mr)为4×103左右的单一条带,而变性前2条合成肽均表现为Mr是从4×103到30×103的弥漫条带,主带位置在5×103和10×103,分别相当于二聚体和四聚体位置;用HBsAg的多克隆抗体(antiHBs)检测合成肽的抗原性,结果在固定抗原量的前提下,在抗体1∶32000稀释时仍可检测到P1wt的阳性结果,而当同一抗体稀释到1∶8000时,P2145R检测结果即为阴性。合成肽P2145R免疫小鼠产生的抗体与P1wt合成肽的反应滴度比与P2145R合成肽本身的反应低4～8倍。结论针对HBsAg“a”决定簇合成肽可自发形成一定的空间构象,G145R突变株的HBsAg“a”决定簇的抗原性和免疫原性与野毒株相比发生了明显改变,为正确评价G145R变异株的流行危害以及现行疫苗的保护效果提供了实验依据。
- 徐丽宏梁国栋付士红关坤萍曹玉玺吴士俊夏国良张智清
- 关键词：乙肝表面抗原免疫学特性HBSAG合成肽决定簇突变株
- 乙型脑炎病毒TaqMan PCR检测方法的建立及初步应用被引量：25
- 2005年
- 目的利用TaqMan PCR技术,建立乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)实时荧光PCR检测方法,初步应用于蚊虫媒介的JEV监测。方法根据GenBank发表的JEV全基因组序列资料分析结果,在其NS5基因区段设计JEV特异的引物与探针;优化Mg2+浓度和引物浓度比例,并利用11株JEV和7株相关病毒株考核检测体系的保守性、特异性、灵敏性和稳定性;利用体外转录的病毒RNA和定量的病毒样品,建立相应的定量分析模型;初步应用于蚊虫媒介的监测与检测分析。结果Mg2+优化浓度为5mmolL,上下游引物浓度比例为4∶1,引物探针具有良好的保守性和特异性,灵敏度为10PFUml,稳定性分析表明,同一样品Ct值的重复检测5次,变异系数均小于5%;绘制两种标准曲线,构建了JEV基因拷贝数、病毒滴度为分析指标的定量分析模型,检测蚊虫标本结果显示,TaqMan PCR方法较病毒分离法敏感、快捷、简便。结论本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的JEVTaqMan PCR检测方法,为蚊虫媒介检测奠定了基础,为乙型脑炎的预防控制和脑炎相关疾病的诊断与鉴别诊断提供了一种技术手段。
- 刘卫滨付士红宋宏王环宇曹玉玺何英王俊文王力华梁国栋
- 关键词：乙型脑炎病毒TAQMANPCRPCR检测方法ENCEPHALITISMG^2+
- 人禽流感酶联免疫诊断方法的建立及其初步应用
- 2007年
- 目的建立人禽流感H5抗体的酶联免疫检测方法（ELISA）。方法用ELISA法检测疑似高致病性禽流感患者及正常人群血清标本中H5IgG抗体。结果23例疑似高致病性禽流感患者血清样品中有4例H5IsG抗体阳性，阳性率为17．40％，与血凝抑制试验（HI）和微量中和试验（NI）相比较，三者符和率为100％。234例正常人群血清H5 IgG抗体检测均为阴性。结论建立的ELISA方法可用于高致病性人禽流感的血清样品初步筛查。
- 鲁健郭瑜李梓曹玉玺王琦王秀平黄晶晶王敏毕胜利舒跃龙
- 关键词：人禽流感免疫球蛋白G酶联免疫吸附测定
- 在内蒙古蚊虫中分离到版纳病毒被引量：8
- 2009年
- 目的鉴定内蒙古通辽市分离的虫媒病毒。方法使用血清学及分子生物学方法鉴定内蒙古蚊虫标本分离的病毒，对毒株的部分核苷酸序列进行测定，应用Clustal X软件做碱基配对分析，MEGA软件完成病毒进化分析，DNAStar软件包中的MegAlign完成核苷酸和氨基酸同源性分析。结果在内蒙古通辽市采集凶小库蚊标本分离的病毒经过血清学和分子生物学实验鉴定为版纳病毒（Banna virus，BAV），与版纳病毒部分中国分离株位于同一进化分支中，病毒第12片段核苷酸同源性为89．6％～98．4％，氨基酸同源性为90．4％～98．6％。结论在内蒙古凶小库蚊标本中分离到版纳病毒。
- 曹玉玺付士红田兆丰何英王焕琴王环宇杨红梅涛波梁国栋
- 关键词：种系发生
- 2013年中国狂犬病流行特征分析被引量：18
- 2015年
- 目的 分析2013年我国狂犬病的流行特征和分布特点,掌握疫情变化和规律,为防控重点的设置与调整提供科学依据.方法 收集2013年全国狂犬病疫情资料,采用描述流行病学方法对资料进行统计、分析.结果 2013年全国28个省（区）报告狂犬病1128例,发病率为0.083/10万,病死率为100％.按照我国七大地理区域划分,全部区域均有报告,主要集中在华南和西南地区,超过病例报告总数一半以上.长江以南地区报告病例数占总病例数70.48％,远高于长江以北地区.报告病例数居全国前五位的省（区）依次为广西、广东、湖南、贵州和云南,合计报告病例数占全国的47.96％.男女发病比例为2.28∶1;病例的年龄分布中,各年龄段均有发生;职业分布以农民为主,占71.01％.2013年与2012年相比,全国总体疫情形势呈下降趋势,但仍有个别中低发省（区）病例数有所上升.结论 2013年我国狂犬病疫情持续第6年下降,疫情地域分布仍旧呈现从南向北、从高发向低发地区蔓延的趋势.
- 李浩陶晓燕曹玉玺吕新军王环宇
- 关键词：狂犬病
