甘仁宝
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位被引量：1
- 2003年
- 目的 :表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构 (P9TRAF typezincfingerdomain ,简称P9 ZFD)编码的蛋白质 ,制备P9 ZFD多克隆抗体 ,研究P9 ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位。 方法 :应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )克隆编码P9 ZFD的cDNA序列 ,构建pET2 4a P9 ZFD表达载体 ,在E .coliBL2 1(DE3)中胞内诱导表达P9 ZFD蛋白 ,组氨酸亲和色谱法纯化P9 ZFD蛋白并免疫Balb/c小鼠制备其多克隆抗体。ELISA和Westernblot鉴定抗体效价及其免疫特异性。免疫组织化学及免疫电镜观察P9 ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布。结果 :表达、纯化的P9 ZFD蛋白相对分子质量约 30kD ,纯度达 95 %以上。制备的P9 ZFD抗体具有特异的免疫反应性。免疫组织化学和免疫电镜结果显示 ,P9 ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布。结论 :重症肌无力相关的P9 ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达 ,是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分。
- 任明山吕传真乔健任惠民徐韧甘仁宝
- 关键词：重症肌无力逆转录-聚合酶链反应CDNA序列
- 重症肌无力相关基因P9TRAF型锌指结构域的表达及抗体制备
- 2003年
- 目的 克隆重症肌无力相关基因P9 TRAF型锌指结构域(P9 TRAF-type zinc finger domain,简称P9-ZFD)的cDNA片段及表达其编码的蛋白质,制备P9-ZFD多克隆抗体。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列,构建pET24a-P9-ZFD表达载体,在E.coli BL21(DE3)宿主菌中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白,用经组氨酸亲和层析纯化的P9-ZFD融合蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,Western blot鉴定抗体的免疫特异性。结果 扩增的P9-ZFD基因片段经测序证实与基因库报道的序列完全一致。表达、纯化的P9-ZFD融合蛋白相对分子质量约30 000,其纯度达 95％以上。制备的P9-ZFD抗体仅与纯化的P9-ZFD融合蛋白产生特异性免疫反应。结论 P9基因TRAF型锌指结构域编码的蛋白质能够在原核细胞中表达,并能获得具有特异免疫反应性的P9-ZFD多克隆抗体。
- 任明山吕传真任惠民徐韧甘仁宝
- 关键词：重症肌无力相关基因TRAF抗体制备结构域
