白小飞 作品数:11 被引量:32 H指数:4 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 公益性行业科研专项 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 更多>>
鹅细小病毒胶体金免疫层析检测方法的建立 被引量:2 2015年 为建立一种快速、简便地检测鹅细小病毒(GPV)的方法,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,将其标记于抗GPV VP3蛋白单克隆抗体2D5上,在硝酸纤维素膜上喷涂抗GPV VP3蛋白单克隆抗体4A8和山羊抗小鼠IgG抗体作为检测线和质控线,制成检测GPV的胶体金免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条检测GPV的最低TCID50为1×104.15/mL,用制备的试纸条仅检测GPV为阳性,而检测其他主要水禽病的病原结果均为阴性;同一批次和不同批次的试纸条对GPV阳性样品的检测结果均无差异。使用该试纸条对已知的80份粪便样品进行检测,阳性及阴性样品的检测符合率分别为96.49%和100%。结果表明,制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,为"小鹅瘟"的快速诊断提供了新的方法。 邵周伍林 白小飞 刘明 张云关键词:鹅细小病毒 胶体金 单克隆抗体 抗鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 为制备抗鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)囊膜蛋白(E蛋白)的单克隆抗体(MAb),本研究将DTMUV E基因原核表达,目的蛋白纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规MAb技术方法,取... 白小飞 刘红玉 陈玉环 殷秀辰 张云关键词:单克隆抗体 文献传递 鹅细小病毒细胞适应毒株基因序列分析 被引量:1 2014年 为了研究鹅细小病毒(GPV)YN分离株在鹅胚成纤维细胞(GEF细胞)中的适应及变异情况,试验将YN毒株接种至GEF细胞中并连续传代至F19代,利用分段PCR法扩增F19代细胞适应毒和亲本病毒F0的全基因组序列,通过对测得序列进行剪辑、拼接,将F19代病毒全基因组序列与亲本病毒序列进行比对,并推导氨基酸差异位点,分析遗传变异性。结果表明:该病毒分离株已适应GEF细胞,并在72小时产生明显的细胞病变,其F19代病毒效价为1×106TCID50/0.1mL。F19代病毒与亲本病毒F0代存在133个核苷酸差异,其中13个位于NS基因,36个位于VP基因,84个位于非编码区;推导的氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列比对差异不显著,存在22个差异位点,其中4个位于NS蛋白,18个位于VP蛋白。 邱娜 邵周伍林 白小飞 张云 侯振中关键词:鹅细小病毒 水禽细小病毒结构蛋白基因的克隆与分析 2014年 为了了解水禽细小病毒分子进化规律,试验采用PCR方法扩增5株水禽细小病毒的结构基因。结果表明:结构基因长度为2199bp,编码732个氨基酸。鹅细小病毒VP1蛋白氨基酸序列的同源性为95.1%~100%,番鸭细小病毒之间的同源性为96.9%~99.3%,鹅细小病毒与番鸭细小病毒之间的同源性为85.1%-88.3%;鹅细小病毒VP2蛋白氨基酸序列的同源性为95.2%~100%,番鸭细小病毒之间的同源性为96.6%~99.3%,鹅细小病毒与番鸭细小病毒之间的同源性为85.5%~88.1%;鹅细小病毒VP3蛋白氨基酸序列的同源性为95.0%~100%,番鸭细小病毒之间的同源性为96.8%~99.4%,鹅细小病毒与番鸭细小病毒之间的同源性为88.4%~91.0%。说明鹅细小病毒和番鸭细小病毒均属于不同的进化分支,没有发生重组现象。番鸭细小病毒的2个毒株均存在8个糖基化位点,而鹅细小病毒ZJ毒株为6个糖基化位点,G3与UY毒株分别缺失582-584NTT和703~705NRT。 贺亦龙 邵周伍林 白小飞 赵健 侯振中 张云关键词:水禽 细小病毒 番鸭细小病毒 结构基因 VP基因 鸭坦布苏病毒E蛋白的细胞凋亡功能研究 引言由鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)引起的以蛋鸭产蛋大幅下降已成为危害我国水禽养殖业的重要传染病之一[1-3]。研究表明DTMUV还可引起蛋鸡和鹅的产蛋下降[2,3],被感染的细胞在很短... 邵周伍林 白小飞 张青山 陈玉环 张云鹅细小病毒鹅胚成纤维细胞适应病毒株的培育及序列分析 被引量:8 2014年 为培育高滴度的鹅细小病毒(GPV)细胞适应病毒株,本研究将原代鹅胚成纤维细胞(GEF)进行连续传代培养,并传至31代次,传代的GEF具有典型的成纤维细胞形态,培养48 h后形成单层细胞。选取不同代次的GEF接种GPV YN分离株,并在GEF中连续传代至F20代,病毒滴度由102.5TCID50/0.1 m L达到106.16TCID50/0.1 m L,表明GPV已适应GEF,并在感染GEF后的72 h产生明显细胞病变。对细胞适应毒F20和亲本病毒F0代进行基因序列比对结果显示,F20与F0存在133个核苷酸差异位点,主要集中在5'和3'非编码区。氨基酸序列共出现22个变异位点,主要集中在VP3蛋白中。这些变异与病毒对细胞培养的适应过程有关,其机理有待进一步研究。 邱娜 刘明 白小飞 邵周伍林 赵健 张云关键词:鹅细小病毒 抗鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:3 2014年 为了制备抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜(E)蛋白的单克隆抗体,将鸭坦布苏病毒E基因进行原核表达,目的蛋白被纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规的单克隆抗体的制备技术,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA方法筛选及3次连续克隆化共获得6株能稳定分泌抗E蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,它们分别被命名为1F3、1G2、1B11、2A5、3B6和4F9。Dot-ELISA及Western-blot分析结果表明,这6株单克隆抗体均能与原核表达的E蛋白特异性结合。经间接免疫荧光(IFA)试验验证,这6株单克隆抗体均能识别鸭坦布苏病毒感染的细胞,且荧光主要位于细胞质中。结果表明,本研究成功制备了6株抗鸭坦布苏病毒E蛋白的单克隆抗体。鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备为今后鸭坦布苏病毒快速的病原学诊断以及E蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。 白小飞 刘红玉 陈玉环 殷秀辰 刘明 张云关键词:E蛋白 原核表达 单克隆抗体 免疫印迹 斑点杂交 间接免疫荧光 鸭坦布苏病毒E蛋白特异性抗原表位鉴定及Epitope-ELISA血清学诊断方法建立 被引量:13 2017年 旨在建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的特异性血清学诊断方法。本研究以纯化的单克隆抗体1A5为固相筛选分子,利用噬菌体展示技术鉴定DTMUV囊膜(E)蛋白的特异性抗原表位,并利用DNAStar分析抗原表位序列在DTMUV中保守性和与其他黄病毒的E蛋白相应位点的氨基酸序列相似性。结果成功筛选到DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位_(87)YAEYI_(91),该抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点差异,而与其他黄病毒E蛋白相应位点的氨基酸序列不具有相似性。Dot-Blotting结果表明表位_(87)YAEYI_(91)与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,而与JEV、DENV、WNV等黄病毒阳性血清间不出现交叉反应,可见抗原表位_(87)YAEYI_(91)为DTMUV所特有的抗原表位。利用DTMUV特异性抗原表位87YAEYI_(91)建立Epitope-ELISA血清学诊断方法并对126份鸭血清样品进行检测,以中和试验作为标准进行比较,结果显示Epitope-ELISA检测方法的相对特异性为100%,相对敏感度为96%,并且Epitope-ELISA与其他黄病毒血清间不出现交叉反应性,表明本研究建立的Epitope-ELISA检测方法是一种特异的、灵敏的ELISA血清学诊断方法。 李晨曦 白小飞 邵周伍林 张青山 刘明 张云关键词:抗原表位 交叉反应性 5株水禽细小病毒全基因组序列分析 被引量:5 2014年 利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编码732个氨基酸。GPV、MDPV NS蛋白不同毒株之间相似性分别为95.9%~99.8%和96.8%~99.0%;而GPV与MDPV NS蛋白之间相似性为88.9%~90.4%。GPV、MDPV VP蛋白不同毒株之间的相似性分别为90.2%~100.0%和96.9%~99.3%,而GPV与MDPV VP蛋白之间的相似性为79.5%~81.6%,表明GPV抗原性不同于MDPV。MDPV与GPV NS蛋白均含有4个潜在的糖基化位点;在结构蛋白区域,MDPV VP含有8个潜在的糖基化位点,而GPV为6个糖基化位点,G3与LJY毒株分别缺失582—584NTT和703—705NRT潜在的糖基化位点。5株水禽细小病毒的进化分析表明,GPV、MDPV在进化上形成两个独立的分支,各个基因片段之间未发生重组。 贺亦龙 邵周伍林 白小飞 张云关键词:鹅细小病毒 番鸭细小病毒 NS基因 VP基因 鸭坦布苏病毒HN株基因组序列分析及抗E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus, DTMUV),是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒,其基因组编码三个结构蛋白(衣壳蛋白C、外膜蛋白PrM/M与囊膜蛋白E)与七个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2... 白小飞关键词:E蛋白 原核表达 单克隆抗体 文献传递