芦清霞
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金新疆维吾尔自治区高校科研计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骆驼重组SpaA-N单域抗体的制备与性质研究
- 2012年
- 目的:获得特异识别SpaA-N的单域抗体。方法:用His-SpaA-N重组抗原从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中,筛选SpaA-N的结合子。经测序后亚克隆至pET30a并在E.coli BL21高表达,用镍离子亲和层析柱纯化。ELISA分析重组单域抗体的热稳定性,Western blot检测结合特异性。结果:经His-SpaA-N筛选富集后,筛选得到2个目的克隆。构建至pET30a,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符。SDS-PAGE显示,Mr 29 000和23 000有特异性目的条带。ELISA检测显示,抗SpaA-N的VHH对SpaA-N重组蛋白具有很好的结合活性;VHH热变性后,经室温复性均可以恢复其抗原结合活性。Western blot显示,重组VHH在Mr 66 000处可以识别丹毒丝菌中存在的表面蛋白。结论:获得了具有热稳定性和特异结合SpaA-N的单域抗体,为进一步研究spaA抗原在丹毒丝菌感染免疫中的作用提供了基础。
- 芦清霞庆格乐图杨春静夏雪琴李江伟
- 关键词：单域抗体热稳定性
