目的:分析结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者肿瘤组织或血浆样本中K-ras基因突变状态,以促进针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的靶向药物(如西妥昔单抗和帕尼单抗等)应用于CRC个体化治疗。方法:采用低变性温度下复合扩增聚合酶链反应(coamplication at lower denaturation temperature PCR,COLD-PCR)再结合测序的方法,定点分析431例中国CRC患者的肿瘤组织和另外23例CRC患者的血浆中K-ras基因序列结构,计算K-ras基因突变率。对不同CRC样本及不同年龄患者群的K-ras基因突变频率,采用χ2检验进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:在431例CRC患者的肿瘤组织中,K-ras基因发生突变的总体频率为25.29%;其中2种主要形式的突变为G12D(第12密码子由甘氨酸突变为天冬氨酸)和G13D(第13密码子由甘氨酸突变为天冬氨酸),它们发生的频率分别是12.99%和6.26%。而在23例CRC患者血浆中检出K-ras基因突变的发生频率为21.74%,其与肿瘤组织中的总突变率无明显差异(P>0.05)。在60岁及以上的CRC患者中,检测出任一种K-ras基因突变的可能频率为37.94%,显著高于60岁以下CRC患者的检出率(7.30%,P<0.01)。结论:采用COLD-PCR扩增再结合测序的方法检测K-ras基因突变状态时,在缺乏CRC肿瘤组织的情况下可以采用血浆样本来代替。另外,鉴于60岁及以上的CRC患者更易发生K-ras基因突变,建议对这些老年患者在治疗前须先常规检测K-ras基因突变状态。
